維生素c的定量測定

1、華南師范大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告學(xué)生姓名葉潔麗學(xué)號20070004006專業(yè)綜合理科二班年級、班級2007 級課程名稱 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目維生素 C 的定量測定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）實(shí)驗(yàn)類型驗(yàn)證 設(shè)計(jì) 綜合實(shí)驗(yàn)時間2008年 11月 3日實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)老師陳文利徐杰實(shí)驗(yàn)評分一、目的1學(xué)習(xí)并掌握定量測定維生素C 的原理和方法。2掌握微量滴定法的基本操作技術(shù)。二、原理維生素C 是人類營養(yǎng)中最重要的維生素之一，缺少它時會產(chǎn)生壞血病，因此又稱為抗壞血酸（ ascorbic acid）。它對物質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)具有重要的作用。近年來，發(fā)現(xiàn)它有增強(qiáng)機(jī)體對腫瘤的抵抗力，并具有對化學(xué)致癌物的阻斷作用。維生素 C 是具有 L 系糖

2、構(gòu)型的不飽和多羥基物，屬于水溶性維生素。它分布很廣，植物的綠色部分及許多水果（如橘子、蘋果、草莓、山楂等）、蔬菜（黃瓜、洋白菜、西紅柿等）中的含量更為豐富。維生素 C（抗壞血酸）具有很強(qiáng)的還原性，能將染料2，6 一二氯酚靛酚還原成無色，而抗壞血酸本身被氧化成脫氫抗壞血酸。OCHOCOClHOC+ ONOHHCH +ClHOCOHClCH2OHONO還原 型抗壞血酸2， 6二氯 酚靛酚 (紅色 )OCl(藍(lán)色)COCClOOCNOH+ OHCHClHOC還原 型2， 6二氯酚靛酚 (無色 ）C H 2OH氧 化型脫氫抗 壞血酸氧化型 2，6 一二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉紅色，在中性或堿性溶液中呈

3、藍(lán)色，當(dāng)用此染料滴定含有抗壞血酸的酸性溶液時，在抗壞血酸未全部氧化前，則滴下染料立即被還原成無色， 一旦溶淀中的抗壞血酸全部被氧化時，則滴下的染料立即使溶液顯示粉紅色，此時為滴定終點(diǎn)，即表示溶液中的抗壞血酸剛剛被氧化完全，從滴定時2， 6 一二氯酚靛酚標(biāo)準(zhǔn)液的消耗量，可以計(jì)算出被檢物質(zhì)中抗壞血酸的含量。三、材料、試劑與器具（一）材料花椰菜（二）試劑1、標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液2、 2%草酸溶液3、 1%草酸溶液4、 0.01% 2,6一二氯酚靛溶液（三）器具1、錐形瓶若干2、移液管若干3、容量瓶一個（5、漏斗一個100 毫升）4、微量滴定管（6 、研缽3 毫升）四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一）提取稱取 1.8 克花

4、椰菜，剪碎加2%的草酸幾毫升，置研缽中研成漿，倒入100 毫升的容量瓶內(nèi)，用 2%草酸洗滌數(shù)次，最后定容至刻度，充分混勻后過濾。（二）滴定1、標(biāo)定 2， 6 一二氯酚靛酚溶液的濃度：量取標(biāo)準(zhǔn)維生素C 溶液 1ml, 加 9ml 1% 草酸加入50ml 錐形瓶中， 同時量取 10ml 草酸加入另一個 50ml 錐形瓶中作空白對照，用已標(biāo)定的2，6 一二氯酚靛酚滴定至粉紅色出現(xiàn)，15 秒不退色。記錄所用的毫升數(shù)， 計(jì)算每毫升2，6 一二氯酚靛酚所能氧給維生素C 的毫克數(shù)（K）。錐形瓶號1（標(biāo)準(zhǔn)）2（空白對照）標(biāo)準(zhǔn)維生素 C 溶液（ ml）11%草酸（ ml）910操作用已標(biāo)定的2，6 一二氯酚靛酚

5、滴定至粉紅色出現(xiàn)，15 秒不退色記錄（所用的毫升數(shù) ml ）3.150.37計(jì)算： K=0.1mg/ （ V標(biāo) V 空） =0.1mg/(3.15 0.37)ml=0.03597mg/ml2、樣品的測定：取 50ml 錐形瓶2 個，分別加入濾液10ml，用已標(biāo)定的 2，6 一二氯酚靛酚溶液滴定至終點(diǎn)，以微紅色能保持15 秒不退色為止，整個滴定過程宜迅速，不宜超過2min，空白滴定方法同前，記錄兩次滴定所得的結(jié)果，求平均值V1。錐形瓶號1（濾液）2（濾液）3（空白）濾液（ ml）10101%草酸（ ml）10操作用已標(biāo)定的2，6 一二氯酚靛酚滴定至粉紅色出現(xiàn)，15 秒不退色記錄（所用的毫升數(shù)ml

6、 ） 1.451.440.32平均值（ ml）1.445 （ V1）0.32分析：兩次滴定的結(jié)果分別為4.45ml 和 4.44ml，比較接近，只相差了0.01，說明滴定結(jié)果還是比較準(zhǔn)確的，這就要求每一步操作都要很正確且準(zhǔn)確。此次空白滴定和前面在標(biāo)定 2， 6 一二氯酚靛酚溶液的濃度時的空白滴定分別為0.37ml 和 0.32ml，相差了0.05ml ，誤差相對比較大。根據(jù)分析可能是1.滴定終點(diǎn)時溶液變紅程度所選取的標(biāo)準(zhǔn)不夠一致，有少許不同； 2.滴定過程中溶液濺到了錐形瓶壁而沒有弄回溶液中；影響了實(shí)驗(yàn)結(jié)果。（三）結(jié)果計(jì)算根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)算出每100g 樣品的維生素C 含量：(V1V2)KV維生

7、素 C（ mg/100g 樣品） =×100W V3式中： V 1 為滴定樣品液所用去染料體積（ V 2 為滴定空白所用去染料體積（ V 3 為樣品測定時所用濾液體積（ml ） ;ml ） ;10ml ） ;為樣品提取液的總體積；K 為 1 毫升染料能氧化維生素C 的量（ mg） ;W 為稱取樣品重量(g )。計(jì)算：維生素C（ mg/100g 樣品） = (V1V2 )KV ×100=（ 4.445 0.32）× 0.03597WV3× 100× 100/1.8× 10=82.43mg/100g根據(jù)查得值85100 mg/100g（數(shù)

8、據(jù)來源 ）此結(jié)果是比較接近的，但還是偏少了。通過分析，偏少的原因可能是1. 在標(biāo)定2， 6 一二氯酚靛酚溶液的濃度時，滴定標(biāo)準(zhǔn)維生素C 溶液過程中，變紅程度較深時才停止滴定，所用2， 6 一二氯酚靛酚溶液增多，導(dǎo)致最終算出的K 值偏?。?. 在標(biāo)定 2，6 一二氯酚靛酚溶液的濃度時，滴定標(biāo)準(zhǔn)維生素C 溶液過程中， 有少許 2，6 一二氯酚靛酚溶液滴到錐形瓶壁了，所用2， 6 一二氯酚靛酚溶液增多，導(dǎo)致最終算出的 K 值偏??；所以這兩個原因共同導(dǎo)致了最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果比查得值偏小。不過同時也還有可能是數(shù)據(jù)本身，因?yàn)槲也榈牡臄?shù)據(jù)是溫州花椰菜的維生素含量，而實(shí)驗(yàn)室的花椰菜不一定是產(chǎn)自溫州，地域、季節(jié)都會

9、影響到其中維生素的含量。五、注意事項(xiàng)1滴定時速度要盡可能快，因樣品內(nèi)一般都含有一些能特將2，6 一二氯酚靛酚還原的其它物質(zhì)，盡管它們還原比染料的能力一般較維生素C 弱。2滴定所用染料要在14ml 之間，否則須增減樣品量或?qū)⑻崛∫哼m當(dāng)稀釋。3.抗壞血酸易溶于水，也極易被氯化，故提取抗壞血酸時，須抑制組織中氧化酶活性。2%草酸可抑制該酶，1%草酸則不能，三氯醋酸、偏磷酸、鹽酸有同樣功效。Fe2+能還原二氯酚靛酚，如用醋酸（8%即可）則 Fe2+不會很快與染料起作用。4.樣品提取液應(yīng)避免日光直射，否則會加速抗壞血酸的氧化。5.在生物組織內(nèi)和組織提取物內(nèi)，抗壞血酸還能以脫氫抗壞血酸及結(jié)合抗壞血酸的形式

10、存在。它們同樣地具有維生素C 的生理作用，但不能將 2， 6 一二氯酚靛酚還原脫色。6.本實(shí)驗(yàn)必須在酸性條件下進(jìn)行。在此條件下，干擾物反應(yīng)進(jìn)行得很慢。7.樣品中可能有其它雜質(zhì)還原二氯酚靛酚，但反應(yīng)速度均較抗壞血酸慢，因而滴定開始時，染料要迅速加入，而后盡可能一點(diǎn)一點(diǎn)地加入，并要不斷地?fù)u動錐形瓶直至呈粉紅色，于 15s 內(nèi)不消退為終點(diǎn)。 【 1】六、實(shí)驗(yàn)討論思考題：（一）、為了測得準(zhǔn)確的維生素C含量，實(shí)驗(yàn)過程中都應(yīng)注意哪些操作步驟？答： 1. 量取液體時一定要精確，注意讀數(shù)時視線一定要與液體凹液面最低處相持平；2.滴定時一定要控制好滴定速度，不要一下子滴下太多2， 6 一二氯酚靛酚溶液，導(dǎo)致滴定

11、過量，若發(fā)生此種情況要重新做一次，不能取巧；3.滴定過程要注意觀察錐形瓶中溶液的顏色，準(zhǔn)確判斷滴定終點(diǎn)，即以微紅色能保持 15 秒不退色為止， 而且每次滴定終點(diǎn)的微紅色都要采取同樣的標(biāo)準(zhǔn)，即變紅程度要一樣。（二）、試簡述維生素C 的生理意義。答： 1 、合成 Collagen （膠原蛋白） - 以形成軟骨、 骨質(zhì)、 牙釉質(zhì)及血管上皮重要基質(zhì)。2、促進(jìn)脯胺酸轉(zhuǎn)變?yōu)闅涓匪嶂磻?yīng)，而氫脯胺酸為構(gòu)成膠原重要成分之一，因此維生素 C 可促進(jìn)膠原之生成。3、維持結(jié)締組織之正常- 因?yàn)槟z原是構(gòu)成結(jié)締組織之細(xì)胞間質(zhì)。4、參加體內(nèi)氧化還原反應(yīng)- 維生素 C 可參加酪胺酸及某些物質(zhì)的氧化反應(yīng)。5、制造腎上腺類固醇激素。6、增進(jìn)傷口愈合及增加對受傷及感染等壓力的感受力。7、在受感染、 發(fā)熱時， 此維生素之損失亦隨之增加，故其對刺激之反應(yīng)扮演重要角色。8、解毒作用；9、改善心肌功能，減低毛細(xì)血管脆性，增加機(jī)體抵抗力；10、對抗游離基，有助于防癌，降低膽固醇，防止壞血病。【 2】現(xiàn)在我們做生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)的時候，主要都是兩人一組搭配合作，當(dāng)中就涉及到怎樣分工、