滅菌注射用水無菌檢查方法適用性

1、滅菌注射用水無菌檢查方法適用性編號(hào):SOP-VM-02-075版本號(hào)：00陜西同康藥業(yè)有限公司滅菌注射用水無菌檢查方法 適用性試驗(yàn)方案 起草人日期年 月 日化驗(yàn)室：日期年 月 日會(huì)審 質(zhì)量管理處： 日期年 月曰批準(zhǔn)人日期年 月曰 目錄1試驗(yàn)描232 4試驗(yàn)內(nèi)22據(jù)試驗(yàn)項(xiàng)目組成員及36試驗(yàn)前準(zhǔn)試驗(yàn)過試驗(yàn)依25陜西同康藥業(yè)有限公司滅菌注射用水無菌檢查方法適用性試驗(yàn)方案1試驗(yàn)描述：本分析方法為本公司的滅菌注射用水檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP制定依據(jù)中華人民共和國(guó)藥典2015年版二部的方法。為確保其檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確,本公司實(shí)驗(yàn)室對(duì)該品種無菌檢查方法適用性是否適合進(jìn)行試驗(yàn)。2試驗(yàn)依據(jù)：中華人民共和 國(guó)藥典2015

2、年版四部分析方法指導(dǎo)原則中華人民共和國(guó)藥典2015年版二部滅菌注射用水檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-QC-01-001無菌檢查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-QC-07-018滅菌注射用水質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)3試驗(yàn)項(xiàng)目組成員及職責(zé)部門成員職責(zé)QC報(bào)告起草QC方法實(shí)施QA QA監(jiān)督質(zhì)量部分析方法審核偏差處理88變更控最終評(píng)價(jià)及建議9 10試驗(yàn)周（下稱SOP,該4試驗(yàn)內(nèi)容：序列號(hào) 試驗(yàn)測(cè)試項(xiàng)目可接受標(biāo)準(zhǔn)1滅菌注射用水無菌檢查方法 用水的無菌檢查適用性試驗(yàn)5試驗(yàn)前準(zhǔn)備：5.1人員培訓(xùn)：規(guī)定口不符合規(guī)定12口是口否口符合規(guī)定口不符合規(guī)定5.2儀器設(shè)備、標(biāo)準(zhǔn)品和試劑：5.2.1儀器設(shè)備儀器名稱編號(hào)設(shè)備操作規(guī)程萬分之一天平pH計(jì)集菌儀

3、蒸汽滅菌器生化培養(yǎng)箱口不符合規(guī)定2口是口否口符合規(guī)定口不符合規(guī)定3口是口否口符合規(guī)口不符合規(guī)定4口是口否口符合規(guī)定口不符合規(guī)定5口是口否口符合規(guī)口不符合規(guī)定6口是口否口符合規(guī)定口不符合規(guī)定7口是口否口符合規(guī)口不符合規(guī)定8口是口否口符合規(guī)定口不符合規(guī)定9口是口否口符合規(guī)序號(hào)參加試驗(yàn)人員名單是否參加培訓(xùn)口是口否口符合規(guī)培訓(xùn)考核結(jié)果1口不符合規(guī)定10口是口否口符合規(guī)定口不符合規(guī)定11口是口否口符合該檢查方法適用于滅菌注射根據(jù)試驗(yàn)方案已對(duì)本次試驗(yàn)相關(guān)人員進(jìn)行培訓(xùn)（見附表1）霉菌培養(yǎng)箱生物安全柜快速振蕩器5.2.2標(biāo)準(zhǔn)品和試劑名稱廠家批號(hào)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基（TSB培養(yǎng)基）沙氏葡萄

4、糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA培 養(yǎng)基）0.9%無菌氯化鈉溶液5.2.3指導(dǎo)文件文件名稱編號(hào)存放地點(diǎn)無菌檢查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-QC-07-018質(zhì)量管理處5.2.4樣品名稱廠家規(guī)格批號(hào)滅菌注射用水本公司5ml6試驗(yàn)過程6.1培 養(yǎng)基的適用性檢查 對(duì)配制好的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基無菌性及靈敏度檢 查均符合中國(guó)藥典2015年版無菌檢查法（通則1101）要求。6.2菌種及菌液制備6.2.1、菌種：金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) CCMCC(B) 26 003 J ,枯草(Clostridium sporogenes)CMCC(B) 64 941,大腸埃希菌

5、菌(Escherichia coli)CMCC(B)44 102，白色念珠菌(Candida albicans) CCMCC(F) 98芽抱桿菌(Bacillus subtilis）CMCC（B）63 501,生抱梭菌001,黑曲霉（Aspergillus niger） CCMCC （F） 98 003,上述標(biāo)準(zhǔn)菌株均源自中國(guó)食品藥品檢定研究院，工作用菌株為第三代。6.2.2、6.2.2.1接種金黃色葡萄球菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基（TSB培養(yǎng)基）中,30,35?培養(yǎng)18,24h培養(yǎng)后，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的混懸液。6.2.2.2接種生胞梭菌的

6、新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（+瓊脂）中，30,35?培養(yǎng)18,24h培養(yǎng)后，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的混懸液。622.3接種大腸埃希菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基（TSB培養(yǎng)基）中，30,35?培養(yǎng)18,24h培養(yǎng)后，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的混懸液。6.2.2.4接種枯草芽抱桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基（TSB培養(yǎng)基）中,30,35?培養(yǎng)18,24h培養(yǎng)后，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的混懸6.2.2.5接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基（SDB培養(yǎng)基）中

7、，20,25?培養(yǎng)24,48h培養(yǎng)后，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于lOOcfu的混懸液。6.2.2.6接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基（SDA培養(yǎng)基）上,20,25?培養(yǎng)5,7d ,加入含0.05% （ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶 液，將砲子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出胞子懸液至無菌試管內(nèi)，用0.05% （ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1 ml含菌數(shù)小于lOOcfu的抱子懸液。上述6株菌制得菌懸液含量（每1 ml含菌數(shù)）結(jié)果見表1o表1菌液制備計(jì)數(shù)結(jié)果5腸埃希菌金黃色葡萄球菌生抱梭菌枯草芽胞桿菌白色念珠菌黑曲霉6.3

8、方法適用性試驗(yàn)6.3.1供試液制備：按照中國(guó)藥典2015年版“無菌檢查法試品120支/每次，按無菌操作法處理，以薄膜過濾法進(jìn)行試驗(yàn)。6.3.2試驗(yàn)過程：6.3.2.1試驗(yàn)管取供試品20支，導(dǎo)入集菌過濾器內(nèi)（單聯(lián)）,0.9%無菌氯化鈉溶液沖洗，每次100ml,共沖洗2次，在最后一次沖洗液中分別加入小于lOOcfu的金黃色葡萄球菌，加入硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基；枯草芽胞桿菌、生砲梭菌、大腸埃希菌菌白色念珠菌、黑曲霉等試驗(yàn)菌，同法操作，加入相應(yīng)培養(yǎng)基。結(jié)果判斷與對(duì)照管比較，如含供試品各容器中的試驗(yàn)菌均生長(zhǎng)良好，則說明供試品 的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不 計(jì)，照此檢查方法和檢查條件

9、進(jìn)行 供試品的無菌檢查。如含供試品的任一容器中的 試驗(yàn)菌生長(zhǎng)微弱、緩慢或不生長(zhǎng)，則說明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下有抑菌 作用，應(yīng)采用增 加沖洗量、使用中和劑或滅活劑、更換濾膜品種等方法，消除供試 品的抑ml/皿平皿1平皿2大（通則1101）,取供按薄膜過濾法過濾。用6.3.2.2對(duì)照管不加入供試液，按試驗(yàn)管方法同法試驗(yàn)。6 3 2 3培養(yǎng)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置3035?培養(yǎng)，胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基培養(yǎng)基置20-25?培養(yǎng)。培養(yǎng)不得超過5天。6.3.2.47并重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。陰性對(duì)照陰性對(duì)照試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行，不得有菌生長(zhǎng)。6,3.3方法適用試驗(yàn)時(shí)間：年 月曰培養(yǎng)溫度：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基

10、置35?;胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基置25?o試驗(yàn) 結(jié)果見表2.0表2無菌檢查方法適用性第一次試驗(yàn)結(jié)果硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基觀察結(jié)果培養(yǎng)對(duì)象試驗(yàn)菌培養(yǎng)時(shí)間1 2 3 4 5試驗(yàn)管大腸埃希菌對(duì)照管金黃色試驗(yàn)管葡萄球菌對(duì)照管試驗(yàn)管生胞梭菌對(duì)照管陰性對(duì)照硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（，）胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基觀察結(jié)果培養(yǎng)對(duì)象 試驗(yàn)菌 培養(yǎng)時(shí)間1 2 3 4 5試驗(yàn)管枯草芽胞桿菌對(duì)照管試驗(yàn)管白色念珠菌對(duì)照管試驗(yàn)管黑曲霉對(duì)照管陰性對(duì)照胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基（，）備注表示混濁；表示澄清；“+/-表示生長(zhǎng)微弱試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)：本次試驗(yàn)小組組長(zhǎng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行試驗(yàn)及評(píng)價(jià)。評(píng)價(jià)人：日期：年 月 日6,3.3,2第二次試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)時(shí)

11、間：年 月曰6.3.2.5性試驗(yàn)結(jié)果6.3.3.1第一次結(jié)果培養(yǎng)溫度：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置35?;胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基置25?o6試驗(yàn)結(jié)果見表3o表3無菌檢查方法適用性第二次試驗(yàn)結(jié)果硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基觀察結(jié)果培養(yǎng)對(duì)象試驗(yàn)菌培養(yǎng)時(shí)間1 2 3 4 5試驗(yàn)管大腸埃希菌對(duì)照管金黃色試驗(yàn)管葡萄球菌對(duì)照管試驗(yàn)管生胞梭菌對(duì)照管陰性對(duì)照硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基(,)培養(yǎng)時(shí)間胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基觀察結(jié)果試驗(yàn)菌1 2 3 4 5培養(yǎng)對(duì)象試驗(yàn)管枯草芽抱桿菌對(duì)照管試驗(yàn)管白色念珠菌對(duì)照管試驗(yàn)管黑曲霉對(duì)照管陰性對(duì)照胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基(,)備注表示混濁；“表示澄清；“+/-表示生長(zhǎng)微弱試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)：本次試驗(yàn)小組組

12、長(zhǎng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行試驗(yàn)及評(píng)價(jià)。評(píng)價(jià)人：日期：年 月 日6,3,3,3第三次試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)時(shí)間：年 月曰培養(yǎng)溫度：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置35?;胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基置25?o試驗(yàn)結(jié)果見表4o表4無菌檢查方法適用性第三次試驗(yàn)結(jié)果硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基觀察結(jié)果培養(yǎng)對(duì)象試驗(yàn)菌培養(yǎng)時(shí)間1 2345試驗(yàn)管大腸埃希菌菌對(duì)照管7試驗(yàn)管金黃色葡萄球菌對(duì)照管試驗(yàn)管生胞梭菌對(duì)照管陰性對(duì)照 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（，）胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基觀察結(jié)果培養(yǎng)對(duì)象試驗(yàn)菌12345培養(yǎng)時(shí)間試驗(yàn)管枯草芽胞桿菌對(duì)照管試驗(yàn)管白色念珠菌對(duì)照管試驗(yàn)管黑曲霉對(duì)照管陰性對(duì)照胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基（，）備注表示混濁；表示澄清；表示生長(zhǎng)微弱試驗(yàn)結(jié)果評(píng)

13、價(jià)本次試驗(yàn)小組組長(zhǎng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行試驗(yàn)及評(píng)價(jià)。評(píng)價(jià)人：日期：年 月 日6,3,4滅菌注射用水無菌檢查方法適用性試驗(yàn)結(jié)論 本次試驗(yàn)小組組長(zhǎng)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行試驗(yàn)及評(píng)價(jià)。評(píng)價(jià)人：日期：年 月 日6 4無菌檢查方法取供試品60支，采用薄膜過濾法，以0.9%無菌氯化鈉溶液為沖洗液（沖洗量:200rnl/膜,100ml/次）按照中國(guó)藥典2015年版四部無菌檢查法，以相應(yīng)溶劑和稀釋液、沖洗液同法操作,作為陰性對(duì)照；以金黃色葡萄球菌為陽(yáng)性對(duì)照菌。6.5結(jié)果判斷陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)生長(zhǎng)良好，陰性對(duì)照管不得有菌生長(zhǎng)。否則，試驗(yàn)無效。若供試品管均澄清，或雖 顯渾濁但均確證無菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；若供試品管中任何一管顯渾濁并確

14、證有菌生長(zhǎng)，判 供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無效，即生長(zhǎng)的微生物非供試品所含。當(dāng)符合下列至少一個(gè)條件時(shí)方可判試驗(yàn)結(jié)果無效:無菌檢查試驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無菌檢查法的要求。回顧無菌實(shí)驗(yàn)過程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素。供試品中污染的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無菌試驗(yàn)中所使用的物品和無菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。試驗(yàn)若經(jīng)確認(rèn)無效，應(yīng)重試。重試時(shí)，重新取同量供試品，依法檢查，若無菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；若有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定。7偏差處理方案執(zhí)行過程中如有偏差產(chǎn)生，根據(jù)偏差處理管理規(guī)定處理，并填寫偏差處理記錄最終報(bào)告包括偏差列表（見附表3）和以下信息。處理措施偏差編號(hào)發(fā)生工序產(chǎn)生原因處理情況處理結(jié)果8變更控制（或）方案執(zhí)行過程中如有對(duì)原系統(tǒng)進(jìn)行變更，提出的變更應(yīng)遵循，變更控制管理 規(guī)程，并要求填寫變更申請(qǐng)控制表，最終報(bào)告應(yīng)包括變更控制列表（見附表4）和以下信息變更控制號(hào)變更內(nèi)容變更原因處理情況變更結(jié)果9最終評(píng)價(jià)及建議驗(yàn)證委員會(huì)主任對(duì)本次試驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。9.1本次試驗(yàn)人員培訓(xùn)效果是否達(dá)到預(yù)期。9.2本次試驗(yàn)的先決條件的試驗(yàn)是否滿足設(shè)計(jì)要求。評(píng)價(jià)人：日期：年 月 日10試驗(yàn)周期當(dāng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有變更，需對(duì)相關(guān)項(xiàng)目進(jìn)行再試驗(yàn)。編號(hào):SOP-VM-02-035-00-0