下載本文檔
版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、葶藶生脈飲對壓力負荷大鼠心肌組織MMP9及TIMP1表達的影響 作者:趙淑明 郭秋紅 張志良 吳迪 周樺 張一昕 【摘要】 目的 觀察葶藶生脈飲對壓力負荷增加致充血性心力衰竭(CHF)大鼠心肌組織基質金屬蛋白酶9(MMP9)及基質金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP1)表達的影
2、響。方法 建立腹主動脈縮窄所致充血性心力衰竭大鼠模型,隨機分為假手術組、模型組、葶藶生脈飲高劑量組、葶藶生脈飲低劑量組、陽性藥(心寶丸)對照組。使用MS4000 U生物信號定量記錄分析系統(tǒng)檢測各組大鼠的LVSP、LVEDP、±dp/dtmax變化;采用免疫組化法觀察各組大鼠心肌組織MMP9、TIMP1的表達情況。結果 模型組大鼠LVEDP、dp/dtmax升高,MMP9表達增強(P<0.05或P<0.01);LVSP、+dp/dtmax降低,TIMP1表達減弱(P<0.05或P<0.01)。各給藥組與模型組比較, LVEDP、dp/dtmax降低,MMP9表達
3、減弱(P<0.05或P<0.01);LVSP、+dp/dtmax升高,TIMP1表達增強(P<0.05或P<0.01);其中高劑量組明顯優(yōu)于低劑量組和心寶組(P<0.05或P<0.01)。結論 葶藶生脈通過調控MMP9和TIMP1的表達,可能是其逆轉心室重塑、增強心臟功能、治療CHF的作用機制之一。 【關鍵詞】 葶藶生脈飲;心力衰竭; MMP9; TIMP1【Abstract】 Objective To observe the effects of Tinglishengmaiyin on the expressions of matrix me
4、talloproteinases9 (MMP9) and tissue inhibitor of metalloproteinases (TIMP1) in the myocardiac tissue of rats with congestive heart failure (CHF) induced by over loaded pressure. Methods The model rats with CHF were established by suprarenal aortic constriction operation and divided into 5 groups ran
5、domly: sham operated, model control, Tinglishengmaiyin high, low dose groups and Xinbaowan group. The MS4000U biological signal collecting system was used to record and analyze the changes of LVSP, LVEDP and±dp/dtmax. Immunohistochemical method was used to observe the expressions of MMP9 and TI
6、MP1. Results In model control group, the LVEDP, dp/dtmax, the expression of MMP9 increased (P<0.05 or P<0.01) and the LVSP, +dp/dtmax, the expression of TIMP1 decreased (P<0.05 or P<0.01). Compared with model control group, LVEDP, dp/dtmax, the expression of MMP9 decreased (P<0.05 or
7、P<0.01), LVSP,+dp/dtmax, the expression of TIMP1 increased (P<0.05 or P<0.01) in the treatment groups. High dose group was significantly superior to low dose group and Xinbaowan group (P<0.05). Conclusions Tinglishengmaiyin can adjust the expressions of MMP9 and TIMP1, which may be one o
8、f the mechanisms of reversing myocardial model and improving heart function to treat CHF.【Key words】 Tinglishengmaiyin; Heart failure; MMP9; TIMP1 心室重塑是充血性心力衰竭發(fā)生發(fā)展的重要病理生理過程,是由于一系列復雜的分子和細胞機制導致的心肌結構、功能變化。近年研究發(fā)現(xiàn),基質金屬蛋白酶(MMPs)及內源性基質金屬蛋白酶組織抑制因子(TIMPs)的表達變化在心室重塑及心力衰竭的發(fā)展過程中具有顯著作用1 。但有關中藥對CHF時MMPs及TIMPs表達變化
9、影響的報道較少。葶藶生脈飲是根據(jù)中醫(yī)理論及多年臨床實踐研制出的治療CHF的效方。為了進一步闡明其作用機制,本文觀察了其對壓力超負荷致充血性心力衰竭大鼠模型心肌組織MMP9及TIMP1表達的影響。 1 材料與方法1.1 藥物 葶藶生脈飲(河北醫(yī)科大學中醫(yī)學院制劑室制備)由葶藶子、紅參、黃芪、五味子、丹參等組成,實驗時用蒸餾水分別配成1.5、3.0 g/ml濃度的混懸液;心寶丸(汕頭市麒麟藥業(yè)有限公司生產,批號:20070631),實驗時研磨成極細末,用蒸餾水配成濃度為0.024 g/ml的水溶液,放置4貯存?zhèn)溆谩?.2 儀器與試劑 MS4000U生
10、物信號定量記錄分析系統(tǒng)(廣州市龍飛達科技有限公司);DGB20電熱干燥箱(上海光華儀器廠),2010水浴箱(天津泰斯特儀器有限公司),CU600恒溫水浴震蕩器(姜堰市醫(yī)療器械有限公司),BD120冰箱(青島海爾股份有限公司),NikonFXA尼康光鏡顯微照相機(日本尼康株式會社),LEICA RM2125石蠟切片機(萊卡上海分公司),Motic6.0數(shù)碼醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)(廈門麥克奧迪儀器儀表有限公司)。MMP9、TIMP1免疫組化試劑盒(武漢博士德生物公司)。1.3 動物模型的建立、分組與給藥 健康成年Wistar大鼠60只,雌雄各半,體質量160200 g(河北省實驗動物中心提供)。隨機分為
11、5組:假手術組、模型組、葶藶生脈飲高劑量組、葶藶生脈飲低劑量組、心寶丸對照組,每組12只。動物造模參照相關文獻2 ,用1%戊巴比妥鈉(40 mg/kg)腹腔注射麻醉,劍突下腹正中切口,分層打開腹腔;在腎動脈水平以上鈍性游離腹主動脈,將7號針頭平行置于腹主動脈上,用0號手術絲線將腹主動脈和針頭一同結扎,然后緩慢將針頭撤出,使大鼠腹主動脈直徑縮窄為0.7 mm,最后分層縫合關腹。假手術組開腹后將手術絲線穿過腹主動脈,不結扎,其他操作與手術組完全相同。于造模4 w后開始給藥。葶藶生脈飲高劑量組、低劑量組分別按30、15 g/kg體重的標準灌服,對照組按0.24 g/kg體重的標準灌服,正常組和模型組
12、灌服生理鹽水。各組1次/d灌胃,每次用藥體積均按1 ml/100 g計算,持續(xù)4 w。實驗過程中假手術組、模型組、高劑量組、低劑量組、心寶組各死亡0、3、2、3、2只,最后進入檢測的動物分別為12、9、10、9、10 只。1.4 檢測指標1.4.1 血液動力學測定 于末次灌胃后禁食12 h,用20 %烏拉坦(0.75 g/kg)腹腔注射麻醉后,將大鼠固定于實驗臺,分離右頸總動脈,在動脈壁剪一小口,插入直經為1 mm帶肝素的心導管,經壓力轉換器接ms4000 u型生物信號定量分析系統(tǒng),緩慢推進導管,觀察示波器,當出現(xiàn)左室波型后停止推進,穩(wěn)定2 min后記錄LVSP、LVEDP、±dp/
13、dtmax等。1.4.2 免疫組化法檢測MMP9、TIMP1表達 于末次灌胃后禁食12 h,麻醉狀態(tài)下迅速剖取心臟,切取約0.5 cm3大小的左室組織,用4%多聚甲醛溶液固定,石蠟包埋,切片脫蠟水化后分別做MMP9及 TIMP1的免疫組織化學染色。采用常規(guī)親和素生物素過氧化物酶技術,以磷酸緩沖液代替一抗作為陰性對照,MMP9、TIMP1陽性表現(xiàn)為胞漿染成淺黃色、棕黃色。每個標本選取3張切片,每張切片取5個視野,采用Motic6.0數(shù)碼醫(yī)學圖像分析系統(tǒng),檢測MMP9和TIMP1蛋白表達情況(積分吸光度),取平均值。1.5 統(tǒng)計學處理 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件包進行分析,數(shù)據(jù)結果以
14、x±s表示,組間比較用單因素方差分析。2 結 果2.1 葶藶生脈飲對實驗大鼠血流動力學的影響 見表1。與假手術組比較,模型組LVSP、+dp/dtmax顯著降低(P<0.01),LVEDP、dp/dtmax顯著升高(P<0.01);與模型組比較,各治療組LVSP、+dp/dtmax顯著升高(P<0.01),LVEDP、dp/dtmax顯著降低(P<0.01)。其中,高劑量組+dp/dtmax高于心寶組和低劑量組(P<0.01),dp/dtmax低于心寶組和低劑量組(P<0.01);低劑量組+dp/dtmax低于心寶組,dp/dtmax高于心寶組(P
15、<0.01);而LVSP、LVEDP的變化在各治療組之間無明顯差異(P>0.05)。表1 各組大鼠血流動力學結果比較(x±s)與模型組比較:1)P<0.05,2)P<0.01;與心寶組比較:3)P<0.01;與低劑量比較:4)P<0.01 2.2 葶藶生脈飲對實驗大鼠心肌組織MMP9、TIMP1表達的影響 見表2。與假手術組比較,模型組MMP9的表達及MMP9/TIMP1比值明顯升高(P<0.01),TIMP1的表達明顯降低(P<0.01);與模型組比較,各治療組MMP9表達及MMP9/T
16、IMP1比值明顯降低(P<0.01),TIMP1表達明顯升高(P<0.01)。其中,高劑量組MMP9的表達及MMP9/TIMP1比值低于低劑量組和心寶組(P<0.01),TIMP1的表達高于低劑量組和心寶組;低劑量組與心寶組比較各項指標變化無明顯差異(P>0.05)。表2 各組大鼠心肌組織MMP9、TIMP1蛋白表達及MMP9/TIMP1的比較3 討 論MMPs是一組能特異地降解細胞外基質(extracellularmatrix,ECM)成分的鋅(Zn2+)依賴酶家族,可降解除多糖以外的所有細胞外基質成分;還可通過基質降解時釋放強有力的基質合成分子如基質素及一些生物活性
17、因子,包括轉化生長因子(TGF1)、成纖維細胞生長因子(FGF)等調節(jié)膠原的合成,最終破壞心臟纖維膠原網(wǎng)絡導致心肌纖維化心室重構心臟泵功能衰竭。MMPs在心室重構和心力衰竭中起著重要作用3 。MMPs主要分為膠原酶、明膠酶、基質溶解素及膜型MMPs (MTMMP)。明膠酶包括明膠酶A(MMP2)和B(MMP9),兩種明膠酶是目前研究較多且具有降解間質蛋白的作用4 ,其中,MMP9在心衰的發(fā)生發(fā)展中起著更為重要的作用 5 。 內源性基質金屬蛋白酶組織抑制因子(TIMPs)是MMPs的特異性抑制劑。包括有TIMP1、TIMP2、TIMP3、TIMP4。正常情況下,TIMPs與MMPs呈11的比例形
18、成MMP-TIMP復合物阻斷MMPs與底物結合,調節(jié)MMPs的活性。其中TIMP1可有效抑制除MMP2和MT1MMP以外大多數(shù)MMPs的表達。據(jù)報道,敲除TIMP1的小鼠,左室?guī)缀涡螤畎l(fā)生改變。心肌組織中TIMP含量降低,且MMPs增加,心腔變形、擴大,造成心室重構6 。正常情況下,具有降解細胞外基質的MMPs和抑制MMPs的內源性TIMPs的良好平衡在維持正常的心臟結構和功能中起重要作用。心衰發(fā)生后,降解細胞外基質的MMPs升高,而MMPs內源性抑制劑TIMPs下降,兩者比例失調。慢性心衰屬于祖國醫(yī)學的心悸、怔忡、咳喘、水腫等病證的范疇。氣虛、血瘀、水停是心衰的基本病機,屬于本虛標實之證,即心臟氣虛為本,血瘀水停為標。益氣活血,強心利水為其有效治法。因此,精心篩選相關藥物組成葶藶生脈飲,經臨床應用療效滿意。方中黃芪益氣利水;葶藶子強心利水;丹參、紅花活血祛瘀;益母草活血利水;
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 2024鐵路電氣化工程安全施工協(xié)議及質量監(jiān)控3篇
- 二零二五年度物業(yè)管理服務合同:視頻監(jiān)控系統(tǒng)維護與升級
- 2024版廣告設計與推廣合同
- 濰坊理工學院《半導體元件》2023-2024學年第一學期期末試卷
- 2024版物流服務合同認定條件與服務內容規(guī)定
- 2024版石油買賣合同
- 四川文化傳媒職業(yè)學院《招貼設計》2023-2024學年第一學期期末試卷
- 2024版廣西勞動合同
- 2024年高清晰度立體投影系統(tǒng)合同
- 二零二五版電氣工程師電力設備檢修合同樣本3篇
- 工作證明模板下載免費
- 顛茄流浸膏實驗方案及總結
- 投標人情況表
- GB/T 34241-2017卷式聚酰胺復合反滲透膜元件
- GB/T 12494-1990食品機械專用白油
- 運輸供應商年度評價表
- 北京語言大學保衛(wèi)處管理崗位工作人員招考聘用【共500題附答案解析】模擬試卷
- 肺癌的診治指南課件
- 人教版七年級下冊數(shù)學全冊完整版課件
- 商場裝修改造施工組織設計
- 統(tǒng)編版一年級語文上冊 第5單元教材解讀 PPT
評論
0/150
提交評論