腎癌患者TGF-β1表達(dá)和腫瘤微血管密度檢測的臨床意義

1、    腎癌患者TGF-1表達(dá)和腫瘤微血管 密度檢測的臨床意義        【摘要】目的探討轉(zhuǎn)化生長因子-1 （TGF-1）在腎癌中的表達(dá)和腫瘤微血管密度(MVD)與腫瘤侵襲的關(guān)系。方法采用免疫組化方法對32例腎癌和6例正常腎組織進(jìn)行TGF-1多克隆抗體和第因子相關(guān)抗原（VWF：Ag )單克隆抗體染色。觀察腎癌組織和正常腎組織TGF-1表達(dá)與MVD之間的相關(guān)性。結(jié)果TGF-1在正常腎組織中僅1例呈陽性表達(dá)，而在腎癌組織中陽性表達(dá)28例，兩者之間差異有顯著性(P0.

2、005)；腎癌組織中TGF-1 表達(dá)強(qiáng)度與腫瘤間質(zhì)微血管密度之間存在正相關(guān)性；二者與腎癌周圍組織有無侵襲存在顯著相關(guān)性(P0.05)，但與腫瘤大小無關(guān)(P0.05)。結(jié)論TGF-1表達(dá)是腎癌的惡性表型之一, 且有可能促進(jìn)腫瘤微血管的形成，上述二項(xiàng)指標(biāo)對評估腎癌的預(yù)后有重要意義?！娟P(guān)鍵詞】腎腫瘤癌免疫組織化學(xué) The clinical significance of TGF-1 expression and tumor interstitial vascular density in renal cell carcinomaZHAO Zhide, KOU Baijun, LI Shengwene

3、t al. Department of Urology, the Third Affiliated Hospital, Norman Bethune Medical University, Changchun 130031【Abstract】ObjectiveTo study the expression of TGF-1 and tumor interstitial vascular density in renal cell carcinoma.MethodsWith anti-TGF-1 multi-Ab and VWF:Ag McAb, immunohistochemistry was

4、 used in 32 cases of renal cell carcinoma and in 6 cases of normal renal tissues as contrast.ResultsThe positive rate of TGF-1 expression in renal cell carcinoma was 87.5%(28/32 cases),being obviously higher than that in normal renal tissues (1/6), (P）. The expression of TGF-1 in renal cell carcinom

5、a was positively correlated to tumor interstitial vascular density;Both of them were related to the invasiveness of the tumour tissues(P0.05 ), but not related to the tumor size ( P0.05 ).ConclusionsIt was suggested that TGF-1 was related to the formation of the tumor interstitial vascularization.Bo

6、th the expression of TGF-1 and tumor interstitial vascular density were malignant phenotypes in renal cell carcinoma and had remarkable significance in evaluating the prognosis of renal cell carcinoma.【Key words】Kidney neoplasmsCarcinomaImmunohistochemistry應(yīng)用免疫組化技術(shù)LSAB法檢測轉(zhuǎn)化生長因子-1(TGF-1)蛋白的表達(dá)，探討TGF-1

7、在腎癌組織與正常腎組織中的表達(dá)部位、程度與腫瘤微血管密度之間的關(guān)系，研究對腎癌預(yù)后的意義。材料和方法 一、標(biāo)本來源采用1995年4 月1997年11月白求恩醫(yī)科大學(xué)第二，三臨床醫(yī)學(xué)院的腎細(xì)胞癌組織標(biāo)本32例。男20例，女12例。平均年齡54.4歲。6例正常腎組織取自尸檢標(biāo)本。所有病例術(shù)前均未行放療、化療和免疫治療，手術(shù)和病理檢查均無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。所有組織均經(jīng)Carnoy液固定，梯度脫水，石蠟包埋后4m連續(xù)切片。二、主要試劑實(shí)驗(yàn)用多克隆抗體兔抗TGF-1 (工作濃度1:50 )，第因子相關(guān)抗原(VWF:Ag)單克隆抗體(工作濃度1:400)，用已知喉癌陽性切片作陽性對照，用PBS 液代替一抗作陰性

8、對照，DAB顯色，Mayer蘇木素復(fù)染。三、結(jié)果判斷TGF-1陽性染色主要位于腫瘤實(shí)質(zhì)與周圍增生的纖維結(jié)締組織或由于腫瘤壓迫而纖維化的癌周圍腎組織之間(其中有3例在腫瘤細(xì)胞之間的纖維結(jié)締組織基質(zhì)中可見TGF-1陽性表達(dá))，部位在細(xì)胞外基質(zhì)中，陽性著色為橙黃色顆粒感。按Shimizu方法：在400倍鏡下對陽性反應(yīng)作如下判斷:(1)陽性數(shù)分為無著色，淺著色，深著色3組。(2)陽性范圍按無著色為(-)，著色15 %為(+)，著色在15%為(+)，著色在30%為(+)，著色50%為(+)。VWF:Ag以血管內(nèi)皮細(xì)胞染成棕黃色為陽性，單個的內(nèi)皮細(xì)胞著色也判斷為陽性。用顯微鏡在200 倍視野下對每例腎癌的

9、VWF:Ag染色切片選取10個血管數(shù)目最多的視野記數(shù)其血管數(shù)，計(jì)算其平均數(shù)。四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用秩和檢驗(yàn)與t檢驗(yàn)。結(jié)果32例腎癌組織中有28例TGF-1呈陽性表達(dá)，其中5例呈強(qiáng)陽性表達(dá)；6例正常腎組織中僅1例在腎小管上皮細(xì)胞外基質(zhì)中微弱表達(dá)，兩者之間差異有顯著性（P0.005 ）。TGF-1表達(dá)陽性數(shù)和陽性范圍與腫瘤間質(zhì)微血管密度(MVD)之間存在正相關(guān)性：當(dāng)TGF-1為陰性時(shí)，MVD為17.6±7.4，當(dāng)TGF-1為(+)時(shí)，MVD為57.9±12.4，P0.05。TGF-1與腫瘤間質(zhì)微血管密度二者皆與腎癌周圍組織有或無侵襲有顯著相關(guān)性：有侵襲時(shí)TGF-1著色深，平均MVD

10、為62.6±13.7，無侵襲時(shí)TGF-1著色淺或無，MVD為26.8±10.3，P0.05。但與腫瘤大小無關(guān)：腫瘤小于5cm，其MVD為32.8±14.5；腫瘤大于5cm，其MVD為38.7±11.0，P0.05。討論已證實(shí)腫瘤細(xì)胞及其相關(guān)性炎性細(xì)胞釋放的特殊因子、細(xì)胞外基質(zhì)、細(xì)胞粘附分子等可誘導(dǎo)產(chǎn)生腫瘤微小血管，后者是腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的重要因素1。VWF:Ag位于血管內(nèi)皮細(xì)胞的Weibel-palade小體上，是血管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)記抗原，而一些血管依賴性的腫瘤其微血管密度與腫瘤的生物學(xué)行為密切相關(guān)2,3。研究表明：腫瘤組織生長的大小與預(yù)后有一定關(guān)系，但

11、腎腫瘤的大小并不影響預(yù)后。腎癌的預(yù)后與腫瘤組織生長時(shí)壓迫周圍組織所形成的假包膜是否被突破有關(guān)，及腫瘤與周圍組織粘連、受侵襲，或有瘤栓形成等有關(guān)4。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：周圍組織有侵襲組的腫瘤微血管密度明顯高于無侵襲組。說明有侵襲組的腫瘤微血管形成增加，促進(jìn)癌細(xì)胞的合成代謝，加速酸性及毒性代謝產(chǎn)物的排泄，為腫瘤細(xì)胞的快速增長及物質(zhì)代謝提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。因此腫瘤微血管密度可以作為評估腎腫瘤患者預(yù)后的重要指標(biāo)5。而腫瘤微血管密度與腫瘤大小無關(guān)。TGF-1是具有雙重調(diào)節(jié)作用的因子，體外實(shí)驗(yàn)證明TGF-1是腫瘤細(xì)胞生長的主要負(fù)性調(diào)控因子，TGF-1與細(xì)胞表面受體結(jié)合，通過p53和PRB的低能磷酸化，抑制c-my

12、c的表達(dá)，使細(xì)胞分裂停止，抑制腫瘤細(xì)胞的生長6。但近期報(bào)道在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)TGF-1在一些腫瘤中的表達(dá)結(jié)果與體外實(shí)驗(yàn)相反，可能與細(xì)胞表面的受體改變和缺失有關(guān)，與RB基因、p53基因突變和缺失有關(guān)6，也有人推測其與免疫抑制有關(guān)7。TGF-1有可能通過破壞機(jī)體的免疫監(jiān)視和免疫殺傷作用，或者通過旁分泌作用刺激間質(zhì)間接促進(jìn)腫瘤的生長。腫瘤細(xì)胞本身分泌的TGF-1對腫瘤生物學(xué)行為有著廣泛的影響8，在導(dǎo)致腫瘤間質(zhì)血管生成的正負(fù)調(diào)控因素中，當(dāng)起負(fù)性調(diào)控作用之一的TGF-1不能發(fā)揮作用時(shí)，其正向調(diào)控因素勢必加強(qiáng)。本研究結(jié)果顯示TGF-1蛋白的表達(dá)存在于正常及癌變的腎組織中，在癌變組織中TGF-1蛋白主要表達(dá)在

13、腫瘤實(shí)質(zhì)與周圍增生的纖維結(jié)締組織或由于腫瘤壓迫而已纖維化的癌周圍腎組織之間，表達(dá)部位在細(xì)胞外基質(zhì)，1例正常腎組織中TGF-1蛋白只微弱表達(dá)在腎小管上皮細(xì)胞外基質(zhì)中，TGF-1在癌變及正常腎組織中的表達(dá)陽性數(shù)和范圍差異有顯著性。本研究還發(fā)現(xiàn)TGF-1表達(dá)的陽性數(shù)和陽性范圍與腫瘤組織是否向周圍組織侵襲相關(guān)，說明TGF-1與腎腫瘤的生物學(xué)行為密切相關(guān)9。TGF-1在體內(nèi)通過刺激血管生成，改變腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)的生化特點(diǎn)有利于腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移,并與其他生長因子相互作用，抑制免疫系統(tǒng)，使腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視，抑制免疫系統(tǒng)對腫瘤殺傷等方式，間接促進(jìn)腫瘤生長7。本研究發(fā)現(xiàn)在TGF-1表達(dá)較強(qiáng)的部位，其周圍的腫瘤

14、間質(zhì)微血管密度明顯增高。腫瘤微血管密度與TGF-1表達(dá)陽性數(shù)和范圍呈正相關(guān)性，說明腫瘤細(xì)胞通過自分泌或旁分泌途徑分泌的TGF-1在腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)中與細(xì)胞外粘附分子如整合素互相作用，調(diào)控腫瘤血管生長，從而促進(jìn)了腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移。Koochekpours等10報(bào)道TGF-1可促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞合成分泌血管上皮生長因子(VEGF)，而后者對血管新生有促進(jìn)作用。本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明TGF-1在腎癌組織中參與腫瘤血管的形成，促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。在腫瘤的發(fā)生、生長、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中，血管生成是必要的，但不是唯一的。在這一過程中TGF-1起著加強(qiáng)的作用 (至少在腎癌組織是如此) 。但TGF-1的這種促進(jìn)腫瘤生長，

15、轉(zhuǎn)移作用的機(jī)理 (包括受體的缺失或免疫抑制等)有待進(jìn)一步證實(shí)。作者單位：130031 長春，白求恩醫(yī)科大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院泌尿外科（趙志德 、李勝文、魯學(xué)軍）；白求恩醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理教研室（寇伯君、李玉林、韓英杰）參考文獻(xiàn)1Blood CH, Zetter BR. Tumor interaction with the vasculature: angiogenesis and tumor metastasis. Biochem Biophys Acta, 1990, 103289-97.2Weidner N, Folkman J, Pozza F, et al. Tumor angiogen

16、esis: a new significant and independent prognostic indicator in early-stage breast carcinoma. J Natl Cancer Inst, 1992, 841875-1887.3Yamazaki K, Abe S, Takekawa H, et al. Tumor angiogenesis in human lung adenocarcinoma. Cancer, 1994, 742245-2250.4顧方六.腎腫瘤.見：吳階平主編.泌尿外科.第1版.濟(jì)南:山東科學(xué)技術(shù)出版社，1993，477-490.5Y

17、oshino S, Kato M, Okada K. Prognostic significance of microvessel count in low stage renal cell carcinoma. Int J Urol, 1995, 2156-160. 6張祥生, 王子明. TGF-抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用及在泌尿系統(tǒng)腫瘤中的研究現(xiàn)狀. 國外醫(yī)學(xué)泌尿系統(tǒng)分冊, 1996, 1617-19.7Torre Amione G, Beauchamp R D, Koeppen H, et al. A highly immunogenic tumor transfected with a m

18、urine transforming growth factor type 1 cDNA escapes immune surveillance. Proc Natl Acad Sci USA, 1990, 871486-1490.8Steiner MS, Barrack ER. Transforming growth factor beta 1 over production in prostate cancer: effects on growth in vivo and in vitro. Mol Endocrinol, 1992, 615-23.9Junker U, Knoefel B, Nuske K, et al. Transforming growth factor beta 1 is significantly elevated in plasma of patients suff