附件2飼料和飼料添加劑畜禽靶動(dòng)物耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)指

1、附件2：飼料和飼料添加劑畜禽靶動(dòng)物耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)指南（試行） 1適用范圍飼料原料和飼料添加劑畜禽靶動(dòng)物耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)的基本原則、試驗(yàn)方案、試驗(yàn)方法和試驗(yàn)報(bào)告等要求。飼料和飼料添加劑、進(jìn)口飼料和飼料添加劑申報(bào)以及已經(jīng)批準(zhǔn)使用的飼料和飼料添加劑再評(píng)價(jià)而進(jìn)行的畜禽靶動(dòng)物耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)。1.3 畜禽飼料產(chǎn)品的靶動(dòng)物體內(nèi)耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)可參照本指南的要求進(jìn)行。2基本原則飼料和飼料添加劑（以下簡稱為“受試物”）對(duì)靶動(dòng)物的短期毒性提供有限評(píng)價(jià)；當(dāng)受試物使用劑量超出推薦用量時(shí)，也可用來確立受試物的安全范圍。2.2應(yīng)根據(jù)中國的養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)實(shí)際開展靶動(dòng)物耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)，以保證評(píng)價(jià)結(jié)果的科學(xué)性、客觀性。， 本指南4.3

2、以及其他另有規(guī)定的特殊情況除外。2.4 靶動(dòng)物耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)應(yīng)由具備一定專業(yè)知識(shí)和試驗(yàn)技能的專業(yè)人員在適宜的試驗(yàn)場所、使用適宜的設(shè)備設(shè)施、按照規(guī)范的操作程序進(jìn)行，并且由試驗(yàn)機(jī)構(gòu)指定的負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)。用于產(chǎn)品申報(bào)的，評(píng)價(jià)機(jī)構(gòu)和人員的要求另行規(guī)定。2.5試驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)健康并且具有相似的遺傳背景；飼養(yǎng)環(huán)境不應(yīng)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果造成影響；受試物和試驗(yàn)日糧不得受到污染。2.6在符合靶動(dòng)物耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)相關(guān)要求的前提下，靶動(dòng)物耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)可與靶動(dòng)物有效性評(píng)價(jià)試驗(yàn)合并進(jìn)行。2.7 靶動(dòng)物耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)應(yīng)充分考慮實(shí)驗(yàn)動(dòng)物毒理學(xué)研究的結(jié)果。3 試驗(yàn)方案試驗(yàn)開始前，應(yīng)根據(jù)受試物和靶動(dòng)物的特點(diǎn)，對(duì)試驗(yàn)進(jìn)行系統(tǒng)設(shè)計(jì)，形成試驗(yàn)方案。

3、試驗(yàn)方案應(yīng)包括試驗(yàn)?zāi)康?、試?yàn)方法、儀器設(shè)備、詳細(xì)的動(dòng)物品種和類別、動(dòng)物數(shù)量、飼養(yǎng)和飼喂條件等，并由試驗(yàn)負(fù)責(zé)人簽字確認(rèn)。具體要求如下：試驗(yàn)動(dòng)物：品種、年齡、性別、生理階段和一般健康狀況；試驗(yàn)條件：動(dòng)物來源和種群規(guī)模、飼養(yǎng)條件、飼喂方式；預(yù)飼期的條件要求；試驗(yàn)分組：試驗(yàn)組和對(duì)照組數(shù)量、每組重復(fù)數(shù)和每個(gè)重復(fù)的動(dòng)物數(shù)（必須滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求）、統(tǒng)計(jì)方法； 試驗(yàn)日糧：描述日糧的加工方法、日糧組成及相關(guān)的營養(yǎng)成分含量（實(shí)測值）和能量水平；注意根據(jù)受試物特點(diǎn)和使用方法配制日糧，使用的原料應(yīng)符合我國法規(guī)和相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求，各試驗(yàn)處理組試驗(yàn)因子以外的其他因素（如：料型、粒度、加工工藝等）應(yīng)一致；受試物的測定：受試物及其

4、有效成分的通用名稱、生產(chǎn)廠家、規(guī)格、生產(chǎn)批號(hào)、有效成分含量的測試方法及測試結(jié)果、測試機(jī)構(gòu)，受試物有效成分在試驗(yàn)日糧中的含量；觀測項(xiàng)目和時(shí)間：檢測和觀察項(xiàng)目名稱、實(shí)施和持續(xù)的確切時(shí)間； 疾病治療和預(yù)防措施：不應(yīng)干擾受試物的作用模式并逐一記錄；突發(fā)狀況處理：動(dòng)物個(gè)體和各試驗(yàn)組發(fā)生的所有非預(yù)期的突發(fā)狀況，都應(yīng)記錄其發(fā)生的時(shí)間和范圍。受試物對(duì)于申請(qǐng)產(chǎn)品審定或登記的受試物，應(yīng)與擬生產(chǎn)（或擬進(jìn)口）的產(chǎn)品完全一致。產(chǎn)品應(yīng)由申報(bào)單位自行研制并在中試車間或生產(chǎn)線生產(chǎn)，同時(shí)提供產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和使用說明。試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)將受試物樣品送國家或農(nóng)業(yè)部認(rèn)可的質(zhì)檢機(jī)構(gòu)對(duì)其有效成分的含量進(jìn)行實(shí)際測定。劑量與分組試驗(yàn)分組：靶動(dòng)物耐受性

5、評(píng)價(jià)試驗(yàn)至少要包括三個(gè)組，即對(duì)照組、有效劑量組、多倍劑量組。試驗(yàn)劑量對(duì)照組通常不應(yīng)含有受試物，但是，對(duì)于某些動(dòng)物機(jī)體的必需營養(yǎng)素（如氨基酸、維生素、微量元素等），可以添加，但添加量應(yīng)維持在最低必需水平。一般情況下，有效劑量組應(yīng)該選用最高限量。如果沒有最高限量，應(yīng)選用最高推薦劑量。如果沒有最高推薦量，應(yīng)根據(jù)受試物的自身特性，選擇最低推薦劑量的2-5倍作為有效劑量。多倍劑量組一般選用上述有效劑量的10倍。如果受試物的耐受劑量低于有效劑量的10倍，耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)應(yīng)能通過尸檢、組織病理學(xué)以及其他適宜的試驗(yàn)方法提出反映受試物毒性的特異性指標(biāo)，并計(jì)算出受試物的安全系數(shù)。試驗(yàn)重復(fù)數(shù)：各試驗(yàn)組和對(duì)照組的試驗(yàn)重

6、復(fù)數(shù)（或動(dòng)物數(shù)）必須滿足數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析的要求。一般情況下，每組重復(fù)數(shù)不能少于6個(gè)，其中豬、羊、牛等家畜1個(gè)動(dòng)物即可為1個(gè)重復(fù)，而小動(dòng)物（如家禽、兔等）則要求每個(gè)重復(fù)的動(dòng)物數(shù)不能少于10只。性別比例應(yīng)相同。試驗(yàn)期豬：哺乳仔豬的試驗(yàn)應(yīng)在出生14天之后至斷奶前進(jìn)行，生長育肥豬試驗(yàn)開始體重應(yīng)不大于35 kg。如果哺乳仔豬和斷奶仔豬均需要進(jìn)行耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)，采用一個(gè)組合試驗(yàn)即可，試驗(yàn)期為斷奶前14天到斷奶后28天。如果已進(jìn)行了斷奶仔豬的耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)，則不必再進(jìn)行生長育肥豬的耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)。家禽：肉仔雞、蛋用雛雞和育肥用火雞的試驗(yàn)一般選用1日齡雛禽。肉仔雞獲得的靶動(dòng)物耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)數(shù)據(jù)可以外推至蛋用和種用

7、雛雞，肉用火雞的數(shù)據(jù)也可外推至蛋用和種用火雞。產(chǎn)蛋家禽的試驗(yàn)一般選擇在前1/3產(chǎn)蛋期進(jìn)行。牛：生產(chǎn)小牛肉的肉用犢牛的試驗(yàn)應(yīng)選用體重不超過70 kg的犢牛。如果犢牛和育肥牛均需要進(jìn)行靶動(dòng)物耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)，開展一個(gè)組合試驗(yàn)即可，每個(gè)階段各28天。家兔：如果哺乳期和斷奶期的家兔都需進(jìn)行耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)，試驗(yàn)應(yīng)自仔兔出生后1周開始，試驗(yàn)時(shí)間不少于49天，并且母兔應(yīng)與仔兔一同飼養(yǎng)直至斷奶。其他.1靶動(dòng)物耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)需要的最短試驗(yàn)期取決于適用動(dòng)物的種類和生長階段，具體要求見附錄A。對(duì)于附錄A中未列出的動(dòng)物，生長期動(dòng)物的試驗(yàn)期至少為28天，成年動(dòng)物至少為42天。.2如果受試物僅適用于動(dòng)物的特定生長階段并且短

8、于附錄A中規(guī)定的試驗(yàn)期，試驗(yàn)時(shí)間應(yīng)根據(jù)具體情況進(jìn)行調(diào)整，但不得少于28天，而且應(yīng)考察相關(guān)的特異性指標(biāo)（如：若在妊娠母豬上使用，應(yīng)考察產(chǎn)活仔數(shù)；若在泌乳母豬上使用，則應(yīng)考察斷奶仔豬的體重和斷奶成活率等）。觀察與檢測臨床觀察試驗(yàn)期內(nèi)應(yīng)每天觀察試驗(yàn)動(dòng)物臨床表現(xiàn)、采食和飲水情況、生長情況以及相關(guān)動(dòng)物產(chǎn)品的產(chǎn)量和特性。也應(yīng)詳細(xì)觀察和記錄不良反應(yīng)。對(duì)試驗(yàn)中出現(xiàn)的不明原因的死亡應(yīng)進(jìn)行尸檢，如果可能，最好進(jìn)行組織學(xué)分析。血液學(xué)檢測試驗(yàn)開始和試驗(yàn)結(jié)束（必要時(shí)增加試驗(yàn)中期）時(shí)每組隨機(jī)抽檢一定數(shù)量的動(dòng)物，性別比例適當(dāng)，分別采集血樣進(jìn)行血液常規(guī)、生化指標(biāo)及其他與受試物相關(guān)的各種生理參數(shù)的檢測。血液常規(guī)指標(biāo)主要包括白細(xì)

9、胞計(jì)數(shù)（WBC）、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）、血紅蛋白（HGB）、紅細(xì)胞壓積（HCT）、血小板計(jì)數(shù)（PLT）等指標(biāo)；生化指標(biāo)主要指谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、總蛋白（TPRO）、白蛋白（ALB）、尿素氮（UN）、肌酐（CRE）、血糖（GLU）、總膽紅素（TBILI）等指標(biāo)。組織病理學(xué)檢查.1尸體解剖學(xué)檢查：試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組屠宰一定數(shù)量的試驗(yàn)動(dòng)物(性別比例適當(dāng))，進(jìn)行系統(tǒng)尸體解剖學(xué)檢查，為進(jìn)一步的組織學(xué)檢查提供依據(jù)。.2臟器系數(shù)測定：試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組隨機(jī)屠宰一定數(shù)量動(dòng)物(性別比例適當(dāng))，剖檢取心、肝、脾、肺、腎等臟器稱重，并計(jì)算各器官與體重的比值。.

10、3組織病理學(xué)檢查：試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)多倍劑量組及尸檢異常動(dòng)物的主要器官進(jìn)行系統(tǒng)的組織病理學(xué)檢查，詳細(xì)檢查的器官和組織包括：心、肝、脾、肺、腎、胸腺、胰腺、胃、十二指腸、回腸、直腸、淋巴結(jié)、骨髓等組織。其他特異性觀測指標(biāo)根據(jù)受試物的作用特點(diǎn)和用途，增加相應(yīng)的特異性觀測指標(biāo)和敏感性功能指標(biāo)。數(shù)據(jù)記錄在試驗(yàn)實(shí)施過程中，試驗(yàn)方案所涉及的內(nèi)容均應(yīng)逐一記錄。數(shù)據(jù)記錄應(yīng)真實(shí)、準(zhǔn)確、完整、規(guī)范、清晰，并妥善保管。數(shù)據(jù)的有效位數(shù)以所用儀器的精度為準(zhǔn)，采用國家法定計(jì)量單位和國家推薦使用的單位。統(tǒng)計(jì)分析以重復(fù)為單位，根據(jù)不同的試驗(yàn)設(shè)計(jì)采用相應(yīng)的統(tǒng)計(jì)分析方法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。統(tǒng)計(jì)顯著性差異水平至少應(yīng)達(dá)到P<0.05。5

11、試驗(yàn)報(bào)告試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)提供試驗(yàn)獲取的所有數(shù)據(jù)，包括所有試驗(yàn)動(dòng)物和試驗(yàn)重復(fù)。未納入統(tǒng)計(jì)分析的數(shù)據(jù)或由于數(shù)據(jù)缺乏、數(shù)據(jù)丟失而無法評(píng)價(jià)的情況也應(yīng)報(bào)告，并說明在各組別中的分布情況。5.2每個(gè)靶動(dòng)物耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)必須單獨(dú)形成最終報(bào)告。每個(gè)試驗(yàn)最終報(bào)告中應(yīng)包含試驗(yàn)概述（見附錄B）和報(bào)告正文。5.3試驗(yàn)報(bào)告正文至少應(yīng)包括：A、試驗(yàn)名稱；B、摘要；C、試驗(yàn)?zāi)康?；D、受試物；E、試驗(yàn)時(shí)間和地點(diǎn)；F、試驗(yàn)材料和方法；G、結(jié)果與討論；H、結(jié)論；I、原始數(shù)據(jù)及相關(guān)的圖表和照片；未納入統(tǒng)計(jì)分析的數(shù)據(jù)或由于數(shù)據(jù)缺乏、數(shù)據(jù)丟失而無法評(píng)價(jià)的情況應(yīng)具體說明；J、參考文獻(xiàn)；K、試驗(yàn)機(jī)構(gòu)和操作人員，包括試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的名稱，試驗(yàn)操作人員、試

12、驗(yàn)負(fù)責(zé)人和報(bào)告簽發(fā)人的簽名，報(bào)告簽發(fā)時(shí)間，加蓋簽發(fā)機(jī)構(gòu)的單位公章或?qū)ｉT的分析測試章；委托檢測的數(shù)據(jù)應(yīng)提供檢測機(jī)構(gòu)出具的檢測報(bào)告。5.4 應(yīng)對(duì)試驗(yàn)報(bào)告每頁進(jìn)行編碼，格式為“第 頁，共 頁”， 并加蓋騎縫章，確保報(bào)告的完整性。6資料存檔最終報(bào)告、原始記錄、圖表和照片、試驗(yàn)方案、受試物樣品及其檢測報(bào)告等原始資料應(yīng)存檔備查，保存時(shí)間一般不得少于5年，作為產(chǎn)品申報(bào)的，保存時(shí)間至少為10年。附錄A：試驗(yàn)期表1. 豬類 別試驗(yàn)階段*（體重或日齡）最短試驗(yàn)期起始結(jié)束日齡結(jié)束體重（kg）哺乳仔豬14日齡214261114天斷奶仔豬2142日齡1203528天哺乳和斷奶仔豬14日齡1203542天生長育肥豬35

13、kg120250（或根據(jù)當(dāng)?shù)亓?xí)慣）80150 （或根據(jù)當(dāng)?shù)亓?xí)慣）42天*繁殖母豬初次受精受精至斷奶，至少一個(gè)繁殖周期泌乳母豬分娩前兩周至斷奶注：* 試驗(yàn)階段：指試驗(yàn)用動(dòng)物所處的生長階段，最短試驗(yàn)期應(yīng)處于所對(duì)應(yīng)的試驗(yàn)階段*如果已有斷奶仔豬的耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)數(shù)據(jù)，則不必再進(jìn)行生長育肥豬的耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)表2. 家禽類 別試驗(yàn)階段（體重或日齡）最短試驗(yàn)期起始結(jié)束日齡結(jié)束體重（kg）肉仔雞出殼35天35天蛋用雛雞出殼16(20)周齡35天*產(chǎn)蛋雞1621周齡13（18）月齡56天*育肥用火雞出殼母：14(20)周齡公：16(24)周齡母：710公：122042天種用火雞開始產(chǎn)蛋（30周齡）60周齡56天后

14、備種用火雞出殼30周齡母：15公：3042天*注： * 僅當(dāng)肉仔雞的耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)數(shù)據(jù)無法提供時(shí)進(jìn)行*最好在開產(chǎn)后的前1/3產(chǎn)蛋期進(jìn)行*僅當(dāng)育肥用火雞的耐受性評(píng)價(jià)試驗(yàn)數(shù)據(jù)無法提供時(shí)進(jìn)行表3. 牛（包括水牛）類 別試驗(yàn)階段（體重或日齡）最短試驗(yàn)期起始結(jié)束日齡結(jié)束體重（kg）犢牛出生或60-80 kg4月齡14542天生產(chǎn)小牛肉的肉用犢牛<70 kg6月齡180（250）28天育肥牛瘤胃發(fā)育完全（至少完全斷奶）1036月齡35070042天泌乳奶牛56天繁殖母牛初次受精受精至斷奶，至少一個(gè)繁殖周期表4. 綿羊類 別試驗(yàn)階段（體重或日齡）最短試驗(yàn)期起始結(jié)束日齡結(jié)束體重（kg）育成羔羊出生3月齡

15、1520 28天育肥羔羊出生6月齡或以上4028天泌乳奶綿羊42天繁殖綿羊初次受精受精至斷奶，至少一個(gè)繁殖周期表5. 山羊類 別試驗(yàn)階段（體重或日齡）最短試驗(yàn)期起始結(jié)束日齡結(jié)束體重（kg）育成羔羊出生3月齡152028天育肥羔羊出生6月齡或以上4028天泌乳奶山羊42天繁殖山羊初次受精受精至斷奶，至少一個(gè)繁殖周期表6. 家兔類 別試驗(yàn)階段（體重或日齡）最短試驗(yàn)期開始結(jié)束日齡哺乳和斷奶兔出生后一周49天育肥兔斷奶后811周28天繁殖母兔從受精開始受精至斷奶，至少一個(gè)繁殖周期泌乳母兔第一次受精分娩前兩周至斷奶附錄B：試驗(yàn)概述表試驗(yàn)編號(hào)：第1頁，共   頁受試物受試物通

16、用名稱：有效成分：有效成分標(biāo)示值：有效成分實(shí)測值：產(chǎn)品類別：外觀性狀：生產(chǎn)單位：生產(chǎn)日期及批號(hào)：樣品數(shù)量及包裝規(guī)格：保質(zhì)期：收(抽)樣日期：送(抽)樣人：抽樣地點(diǎn)：（適用時(shí)） 抽樣基數(shù)：（適用時(shí)） 試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)動(dòng)物品種：性別：生理階段：起始日齡：起始體重：健康狀況： 動(dòng)物來源和種群規(guī)模：飼喂方式：飼養(yǎng)條件：時(shí)間與場所試驗(yàn)起始時(shí)間：試驗(yàn)持續(xù)時(shí)間：試驗(yàn)場所：設(shè)計(jì)與分組分組設(shè)計(jì)方法：試驗(yàn)組數(shù)量(含對(duì)照組)：每組重復(fù)數(shù)：每個(gè)重復(fù)動(dòng)物數(shù)：試驗(yàn)動(dòng)物總數(shù)：日糧中有效成分添加量日糧中有效成分含量試驗(yàn)組1試驗(yàn)組2試驗(yàn)組3對(duì)照物質(zhì)名稱：(適用時(shí)) 對(duì)照物質(zhì)在日糧中添加量對(duì)照物質(zhì)在日糧中含量試驗(yàn)日糧日糧組成(營養(yǎng)素和能值)計(jì)算