黃連解毒湯對內(nèi)毒素類炎癥模型小鼠血中白細胞介素2的影響

1、    黃連解毒湯對內(nèi)毒素類炎癥模型小鼠 血中白細胞介素2的影響         摘要：為進一步探討黃連解毒湯(黃連、黃柏、黃芩、梔子組成)對T細胞來源的細胞因子的調(diào)節(jié)作用，采用腹腔注射D-氨基半乳糖和脂多糖攻擊小鼠造成內(nèi)毒素類炎癥模型，用放射免疫法檢測觀察了黃連解毒湯對該模型小鼠血清白細胞介素2(IL-2)的影響。結果表明黃連解毒湯在2.5kg/L、1.25kg/L劑量時可有效提高IL-2水平。提示黃連解毒湯可升高T細胞來源的細胞因子IL-2水平。主題詞：黃連解毒

2、湯/藥理學；內(nèi)毒素類/拮抗劑和抑制劑；白細胞介素2/血液；動物實驗替代試驗中分類號：R285.5文獻標識碼：AEffect of Huanglian Jiedu Decoction on Serum Interleukin-2 in MiceAttacked by D-galactosamine and LipopolysaccharideKuang Zaoyan,LIU Qianxian(Dept. of Microbiology and Parasitology, Guangzhou University of TCM, Guangzhou 510405, China)Abstract:E

3、ffect of Huanglian Jiedu Decoction on serum interleukin-2 (IL-2) in model mice with hepatic injury was observed. Mouse model was set up by intraperitoneal injection of D-galactosamine and Lipopolysaccharide, and serun IL-2 was detected by radiommunoassay.The results showed that Huanglian Jiedu Decoc

4、tion at the concentrations of 2.5kg/L and 1.25kg/L increased the level of IL-2. It is concluded that Huanglian Jiedu Decoction can elevate the level of IL-2 produced by T lymphocytes.Key words: HUANGLIAN JIEDU DECOCTION/pharmocology;ENDOTOXINS/antag;INTERLEUKIN-2/blood;ANIMAL TESTING ALTERNATIVES黃連解

5、毒湯為外臺秘要引崔氏方，由黃連、黃柏、黃芩、梔子4味藥組成，被視為清熱解毒劑的代表方，適用于多種急、慢性炎癥。目前認為炎癥的發(fā)生與炎性細胞因子的釋放有密切的關系，作者先前的研究表明黃連解毒湯可降低脂多糖合D-氨基半乳糖(D-galactosamine,D-GALN)動物血清腫瘤壞死因子(TNF-)、白細胞介素6(IL-6)水平1，顯示了黃連解毒湯的免疫抑制作用。本研究繼續(xù)觀察黃連解毒湯對白細胞介素2(IL-2)的影響。1材料與方法1.1實驗材料1.1.1黃連解毒湯經(jīng)鑒定梔子為茜草科常綠灌木植物梔子Gardenia jasminoides Ellis的成熟果實；黃芩為唇科多年生草本植物黃芩Scu

6、tellaria baicalensis Georgi的根；黃連為毛莨科多年生草本植物黃連Copis chinensis Franch的根莖；黃柏為蕓香科落葉喬木植物關黃柏Phellodendron chinensis Schneid的除去栓皮的樹皮。取黃連、梔子、黃柏、黃芩4味藥(1.51.511)加水煮沸，合并3次藥液，恒溫100濃縮制成黃連解毒湯，每mL含生藥5g。1.1.2脂多糖大腸桿菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS B026:B6),Sigma公司產(chǎn)品，批號：38F-4060。1.1.3D-GALN重慶醫(yī)科大學化學系提供，批號：97-7-28。1.1.4動物N

7、IH小鼠，雌、雄各半，1822g，廣東省實驗動物研究所提供。1.1.5IL-2檢測放射性免疫法，藥盒由解放軍總醫(yī)院提供，批號9903。1.2實驗方法取NIH小鼠，隨機分為6組，正常組灌胃自來水每天0.5mL，連續(xù)4d；中藥組灌5kg/L、2.5kg/L、1.25kg/L高、中、低3劑量的黃連解毒湯4d，末次給藥后中藥組、模型組、地塞米松組腹腔注射D-GALN150mg/kg和脂多糖1mg/kg；地塞米松組皮下注射地塞米松50mg/kg，24h后眼眶取血分離血清，置-30冰箱，待測IL-2。2結果模型組小鼠IL-2水平降低，黃連解毒湯濃度在2.5kg/L、1.25kg/L時可有效升高IL-2水平

8、，而濃度為5kg/L時IL-2水平未改變。地塞米松組IL-2也未見改變。見表1。表1黃連解毒湯對IL-2的影響(組別N/只IL-2/(g.L-1)正常對照組11模型組10*地塞米松組9黃連解毒高劑量10黃連解毒中劑量10黃連解毒低劑量10 3討論小鼠注射D-GALN后，可造成肝損傷，并引發(fā)腸源性內(nèi)毒素血癥2，造成炎癥反應，注射LPS更加重了炎癥性損傷。該動物模型細胞因子的變化起著重要的作用，表現(xiàn)為動物血清IL-6、TNF-濃度的升高1和IL-2濃度的降低。按細胞因子來源的不同，細胞因子可分為兩大組：一組主要為T細胞產(chǎn)生的淋巴因子，包括IL-2、IL-4等；一組為單核巨噬細胞產(chǎn)生的單核因子，包括

9、IL-1、IL-6、TNF-等。目前大多數(shù)的研究較關注后一組在炎癥反應中的變化，而同時對前一組細胞因子的影響的研究報道較少。先前的研究發(fā)現(xiàn)，黃連解毒湯可有效減低該模型動物的IL-6、TNF-水平1，顯示黃連解毒湯對巨噬細胞來源的細胞因子有抑制作用。本研究結果表明黃連解毒湯對T細胞來源的細胞因子也有調(diào)節(jié)作用。徐叔云曾指出3“炎癥和免疫是緊密相連的，單獨使用抗炎或免疫抑制藥或免疫增強藥治療炎癥療效均不理想”。本研究顯示黃連解毒湯對炎癥反應中不同來源、不同變化細胞因子均有調(diào)節(jié)作用，說明該方具有較特殊的免疫藥理作用，是治療炎癥反應的理想復方。對內(nèi)毒素性疾病治療的研究，缺乏理想的陽性對照藥物。目前較普遍

10、使用的西藥對照藥物為地塞米松，它對TNF-、IL-6的抑制作用明確4。本研究顯示它對IL-2水平未見影響，正說明它在調(diào)節(jié)炎癥反應中的細胞因子的作用不及黃連解毒湯。本研究發(fā)現(xiàn)隨著黃連解毒湯用量的增加，對IL-2的作用有減弱趨勢，究其原因可能與該方過于苦寒有關。在實驗中還發(fā)現(xiàn)黃連解毒湯高、中劑量組小鼠在灌胃后均出現(xiàn)胃納減少、毛色失去光澤的癥狀，是否為該方的毒副作用，有待進一步研究。作者簡介：第一作者，女，講師，碩士；基金項目：廣東省中醫(yī)藥管理局課題，編號：96110作者單位：(廣州中醫(yī)藥大學微生物與寄生蟲學教研室，廣州510405)參考文獻：1鄺棗園，劉倩嫻.黃連解毒湯對細胞因子的影響J.遼寧中醫(yī)雜志，1999，26(8)：3742韓得王.肝功能衰竭發(fā)病機制的研究腸源性內(nèi)毒素血癥假說J.肝臟病雜志，1995，3(3)：1343徐叔云.抗炎免疫藥理學研究十年進展J.中國藥理學通報