生物芯片診斷系統(tǒng)應(yīng)用指南(系統(tǒng)篇)

1、生物芯片診斷系統(tǒng)應(yīng)用指南(系統(tǒng)篇)深圳欣康基因數(shù)碼科技有限公司 生物芯片技術(shù)的應(yīng)用是醫(yī)學(xué)發(fā)展的必然趨勢(shì)從生物信息角度看傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)是在下游信息即機(jī)體表型（癥狀、病理、生理）上獲得診斷信息的，而未來(lái)醫(yī)學(xué)是從DNA、RNA、蛋白質(zhì)這些上游信息中獲得診斷結(jié)果的，更具有確定性和預(yù)見(jiàn)性。未來(lái)的醫(yī)學(xué)是以生物信息為核心的分子醫(yī)學(xué)，DNA、RNA、蛋白質(zhì)稱(chēng)為生物信息大分子，其質(zhì)和量的異常變化與疾病直接相關(guān)，是一切疾病的根本原因。然而生物信息所包含的信息量十分巨大，根本無(wú)法用傳統(tǒng)的方法處理，為此, 生物芯片，一項(xiàng)將計(jì)算機(jī)芯片制作技術(shù)與生命科學(xué)研究相結(jié)合的新興技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生了！生物芯片是指采用光導(dǎo)原位合成或微量點(diǎn)樣等方

2、法，將大量生物大分子比如核酸片段、多肽分子甚至組織切片、細(xì)胞等生物樣品有序地固化于支持物（如玻片、生物膜等載體）的表面，組成密集二維分子排列，然后與已標(biāo)記的待測(cè)生物樣品中靶分子雜交，通過(guò)特定的儀器比如激光共聚焦掃描或電荷偶聯(lián)攝影像機(jī)（CCD）對(duì)雜交信號(hào)的強(qiáng)度進(jìn)行快速、并行、高效地檢測(cè)分析，從而判斷樣品中靶分子的數(shù)量。生物芯片技術(shù)是九十年代初應(yīng)人類(lèi)基因組計(jì)劃而在美國(guó)率先發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)高新技術(shù)。經(jīng)過(guò)十年的發(fā)展，該技術(shù)已顯示出極其廣闊的應(yīng)用前景。作為新一代生物技術(shù)，將從根本上改變目前生物學(xué)和生物技術(shù)的觀念和效率，它將是繼大規(guī)模集成電路之后的又一次具有深遠(yuǎn)意義的科學(xué)技術(shù)革命，它將改變生命科學(xué)的研究方式

3、，革新醫(yī)學(xué)診斷和治療?？梢韵嘈?，生物芯片技術(shù)應(yīng)用于臨床診斷是診斷技術(shù)的一次革命性進(jìn)步、是未來(lái)醫(yī)學(xué)發(fā)展的必然趨勢(shì)。欣康生物芯片診斷系統(tǒng)是深圳欣康公司依托第四軍醫(yī)大學(xué)開(kāi)發(fā)，國(guó)內(nèi)首批具有國(guó)家批準(zhǔn)資質(zhì)和自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的醫(yī)學(xué)臨床生物芯片檢測(cè)技術(shù)，其整合了生物技術(shù)、芯片技術(shù)、光機(jī)電技術(shù)、軟件和網(wǎng)絡(luò)技術(shù)等諸多高新技術(shù)，相當(dāng)于一個(gè)“流動(dòng)的臨床檢測(cè)中心”，可以覆蓋大多數(shù)臨床常見(jiàn)病、多發(fā)病、極大地提高醫(yī)院的診斷水平，為患者提供集成化、網(wǎng)絡(luò)化臨床分子診斷整體解決方案。應(yīng)用生物芯片診斷系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能欣康生物芯片診斷系統(tǒng)由生物芯片、生物芯片閱讀儀（XK-2100型）和生物芯片在線(xiàn)等三部分組成。欣康生物芯片目前主要為蛋白芯

4、片，采用基因工程表達(dá)、天然提純和人工合成待測(cè)微生物（或目標(biāo)蛋白）的特異性抗原（抗體），將抗原或抗體以微矩陣形式固定于硝酸纖維素膜（NC膜）上，待檢標(biāo)本中的特異性抗體（抗原）與之發(fā)生特異性免疫結(jié)合反應(yīng)，并在NC膜上形成抗原-抗體免疫復(fù)合物，再用金標(biāo)記或酶標(biāo)記的二抗與該復(fù)合物特異性結(jié)合，直接顯色或者催化相關(guān)底物顯色，最終產(chǎn)生生物芯片閱讀儀可捕捉和分析的信號(hào)。XK-2100型生物芯片閱讀儀集光學(xué)、機(jī)電、生物醫(yī)學(xué)、計(jì)算機(jī)、影像學(xué)等多學(xué)科技術(shù)于一體，配備MARA生物芯片分析軟件，將生物芯片產(chǎn)生的信號(hào)通過(guò)圖像采集、光電模數(shù)轉(zhuǎn)換和量化后形成數(shù)字化的圖像文件，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)生物信號(hào)定性和定量的分析。閱讀儀一次能讀

5、取6張芯片數(shù)據(jù)，自動(dòng)一鍵式取樣分析和出具檢測(cè)報(bào)告，大大縮短檢測(cè)時(shí)間；同時(shí)該軟件還具有芯片圖像儲(chǔ)存、分析、報(bào)告、統(tǒng)計(jì)和日常管理等多種功能，靈活的管理系統(tǒng)可幫助您建立一個(gè)豐富的芯片檢測(cè)結(jié)果和病歷資料數(shù)據(jù)庫(kù)。生物芯片在線(xiàn)作為生物芯片技術(shù)在線(xiàn)服務(wù)網(wǎng)絡(luò)，隨著生物芯片的推廣應(yīng)用，將成為一個(gè)具備芯片技術(shù)推廣與產(chǎn)品銷(xiāo)售、健康咨詢(xún)與教育、遠(yuǎn)程診斷與分析等多功能的大型醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和健康服務(wù)網(wǎng)絡(luò)。 生物芯片診斷芯片的應(yīng)用整體系統(tǒng)應(yīng)用流程圖解見(jiàn)下圖1，幽門(mén)螺桿菌(Hp)微矩陣抗體檢測(cè)試劑盒操作說(shuō)明書(shū)（舉例，部分）見(jiàn)圖2，閱讀儀和軟件操作（主要界面）見(jiàn)圖3樣品準(zhǔn)備和處理（膜片、血清）加血清反應(yīng)洗滌加標(biāo)記抗體或二抗洗滌顯色

6、（金標(biāo)或酶標(biāo)）送入生物閱讀儀輸入患者資料軟件計(jì)算分析檢測(cè)報(bào)告輸出（主要過(guò)程自動(dòng)完成）圖1：生物芯片診斷系統(tǒng)操作流程圖解幽門(mén)螺桿菌(Hp)微矩陣抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)?！臼褂媚康摹坑拈T(mén)螺桿菌Hp是引起慢性活動(dòng)性胃炎的主要病原菌，是消化性潰瘍病的主要致病因子，也是胃癌發(fā)生的一個(gè)重要協(xié)同因子。Hp微矩陣抗體檢測(cè)試劑盒可同時(shí)一次檢測(cè)Hp的多種血清學(xué)標(biāo)志（抗CagA、抗VacA、抗Ure、抗RdxA、抗Hsp60等抗體）。用于Hp感染的流行病學(xué)調(diào)查和臨床的輔助診斷?！驹囼?yàn)原理】幽門(mén)螺桿菌微矩陣采用基因工程技術(shù)表達(dá)Hp特異性抗原(CagA、VacA、Ure、RdxA、Hsp60)，將具有抗原性的蛋白以方陣形

7、式固定于硝酸纖維素膜(NC膜)上，待檢標(biāo)本中的特異性抗體與之發(fā)生特異性免疫結(jié)合反應(yīng)，并在NC膜上形成抗原抗體免疫復(fù)合物，再用膠體金標(biāo)記的葡萄球菌A蛋白(作為二抗)與該免疫復(fù)合物特異性結(jié)合，最終出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的紅色斑點(diǎn)?！局饕M成成份】Hp微矩陣 10片 洗滌液(8ml瓶) 1瓶標(biāo)記物(2.5ml) 1瓶 使用說(shuō)明書(shū) 1份【適用儀器】 XK-2100生物芯片閱讀儀（注冊(cè)號(hào)：粵藥管械（試）字2003第2050009號(hào)）【樣本要求】采集靜脈血1ml盛于干燥管中，離心分離血清。血清可以立刻進(jìn)行檢測(cè)試驗(yàn)；如不立刻作試驗(yàn)，可將分離的血清放置4保存(可放置3天)，或放置-20長(zhǎng)期保存。【試驗(yàn)方法】在微矩陣窗口

8、內(nèi)加洗滌液(約150l)，均勻濕潤(rùn)所有膜面；取待檢血清100ul，用移樣器均勻加入微矩陣檢測(cè)窗口內(nèi)所有膜面，待血清滲入后，再加洗滌液(300l)，洗去殘留的血清。將標(biāo)記物(200l)，均勻加入窗口內(nèi)所有膜面，待滲入后，再加洗滌液，洗去窗口膜面上殘留的標(biāo)記物。顯色后的微矩陣應(yīng)在30分鐘內(nèi)用閱讀儀進(jìn)行結(jié)果判定。圖2：幽門(mén)螺桿菌(Hp)微矩陣抗體檢測(cè)試劑盒操作說(shuō)明書(shū)（部分）資料輸入界面檢測(cè)界面報(bào)告界面圖3：閱讀儀和軟件運(yùn)行（主要界面）生物芯片操作要點(diǎn)：1、 根據(jù)臨床檢測(cè)需要選擇不同的生物芯片種類(lèi)，芯片的分類(lèi)和具體應(yīng)用請(qǐng)見(jiàn)生物芯片應(yīng)用指南。2、 目前芯片檢測(cè)的樣本為血清，但隨著芯片研發(fā)的深入和品種的需

9、求，樣本的種類(lèi)也將會(huì)不斷拓展。為保證反應(yīng)的特異性和免受過(guò)多干擾，建議使用新鮮血清，并在使用前離心，離心轉(zhuǎn)速5000rpm；如使用較長(zhǎng)時(shí)間存放的血清，離心轉(zhuǎn)速應(yīng)大于8000rpm。3、 為保證芯片上反應(yīng)的順暢進(jìn)行和減少非特異性反應(yīng)，在芯片操作過(guò)程中需要反復(fù)洗滌芯片數(shù)次。4、 目前大部分芯片會(huì)在10分鐘內(nèi)反應(yīng)完成并顯色，部分芯片需要時(shí)間在20分鐘左右。5、 欣康公司產(chǎn)品工程師將負(fù)責(zé)生物芯片閱讀儀及分析軟件的安裝、調(diào)試和培訓(xùn)工作，確保系統(tǒng)正常和正確使用。具體見(jiàn)生物芯片閱讀儀和軟件操作使用說(shuō)明書(shū)（隨機(jī)安裝于電腦中）。6、 軟件操作時(shí)需要輸入患者資料和檢測(cè)參數(shù)，患者資料包括姓名、年齡等；檢測(cè)參數(shù)將隨生物

10、芯片使用說(shuō)明書(shū)附上，主要包括cutoff值（用于界定陰陽(yáng)性）、kb系統(tǒng)值（用于定量分析標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)設(shè)定）、critical值（用于定量分析中分段函數(shù)界定等），每批芯片的參數(shù)可能均有變化，使用前請(qǐng)注意。檢測(cè)參數(shù)的具體含義和使用見(jiàn)下文。7、 輸入完成后，按檢測(cè)鍵，所有操作將可以自動(dòng)完成，包括自動(dòng)取樣攝像、自動(dòng)計(jì)算分析、自動(dòng)保存和自動(dòng)打印檢測(cè)報(bào)告。如不需自動(dòng)或者對(duì)某部分不需自動(dòng)操作，軟件提供了個(gè)性化設(shè)置界面，自行選擇。8、 軟件設(shè)有統(tǒng)計(jì)和數(shù)據(jù)庫(kù)功能，醫(yī)生可以使用統(tǒng)計(jì)功能根據(jù)所選擇的項(xiàng)目進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算，數(shù)據(jù)庫(kù)中存儲(chǔ)了所有檢測(cè)過(guò)的資料，方便進(jìn)行對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行定性定量化數(shù)據(jù)查詢(xún)和調(diào)用關(guān)于檢測(cè)參數(shù)的制定、使用和檢

11、測(cè)的定性、定量分析1、 cutoff值（本節(jié)簡(jiǎn)稱(chēng)cf）cf主要用于定性和半定量分析，在抗體檢測(cè)中經(jīng)常使用，通過(guò)比較檢測(cè)結(jié)果的數(shù)據(jù)和cf判斷檢測(cè)的陰陽(yáng)性，大于cf為陽(yáng)性，小于為陰性，在cf上下5范圍為臨界區(qū)域。見(jiàn)下圖示意cutoff臨界區(qū)域圖4：弓形蟲(chóng)抗體檢測(cè)及cutoff（示意）Cf按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)大量陰性血清檢測(cè)并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理獲得。Cf本質(zhì)和檢測(cè)結(jié)果的敏感性和特異性相關(guān)，并具備一定的調(diào)節(jié)范圍。如需檢測(cè)獲得更高的敏感性，則可以考慮適當(dāng)調(diào)低cf；如需嚴(yán)格控制檢測(cè)的特異性，則可以考慮適當(dāng)調(diào)高cf。具體應(yīng)用中一般不建議調(diào)節(jié)cf，如科研考慮或者特殊要求，請(qǐng)與公司客服部門(mén)和技術(shù)部門(mén)聯(lián)系。檢測(cè)項(xiàng)目

12、的檢測(cè)數(shù)據(jù)和cf的配合使用可以應(yīng)用于抗體的半定量分析，設(shè)定一個(gè)Y值，YX（檢測(cè)數(shù)據(jù)）cf）/cf，反應(yīng)抗體水平的相對(duì)高低，在檢測(cè)報(bào)表中的圖表上顯示，可以輔助醫(yī)生進(jìn)行縱向比較患者一個(gè)階段的抗體水平變化和橫向比較同類(lèi)患者的抗體水平，更好的判斷病情病程和治療預(yù)后方案。2、 kb系統(tǒng)值（本節(jié)簡(jiǎn)稱(chēng)kb）kb主要用于定量分析中標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制定，在蛋白定量檢測(cè)中經(jīng)常使用。定量分析蛋白水平，傳統(tǒng)上一般需要每次自行繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。使用本公司的蛋白芯片進(jìn)行定量分析，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)不需要每次自行繪制，而由本公司直接提供相關(guān)參數(shù)并存于電腦中，在檢測(cè)過(guò)程中自動(dòng)分析并轉(zhuǎn)化為蛋白的絕對(duì)濃度指標(biāo)顯示于檢測(cè)報(bào)告單中圖5：蛋白芯片定量檢測(cè)示

13、意為配套定量分析，本公司將使用國(guó)家或者國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品連續(xù)多次進(jìn)行測(cè)試并計(jì)算，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)并取得kb，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)一般均以直線(xiàn)模式提供，見(jiàn)示意圖。當(dāng)然，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)因檢測(cè)蛋白和方案不同可能有多種圖形，本公司將盡可能轉(zhuǎn)化為直線(xiàn)模型，轉(zhuǎn)化的程序也將內(nèi)含于軟件中而不需要檢測(cè)人員特別輸入。如有個(gè)別或特殊的無(wú)法以直線(xiàn)模型提供標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，公司提供的檢測(cè)參數(shù)將特別說(shuō)明。3、 critical值critical主要用于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中分段函數(shù)或者分點(diǎn)計(jì)算的界定。使用蛋白芯片定量分析蛋白水平，將有可能比傳統(tǒng)方案更大的擴(kuò)大檢測(cè)的范圍（幾倍、10倍、100倍），這種擴(kuò)大的實(shí)現(xiàn)，可能是通過(guò)分段函數(shù)和分點(diǎn)計(jì)算的模式，critical提供了界

14、限值，程序?qū)⒆詣?dòng)根據(jù)該值判斷計(jì)算。Critical的制定類(lèi)似于kb的制定。4、 其他在檢測(cè)過(guò)程中，軟件將顯示蛋白的3維分析圖形（見(jiàn)圖1的軟件顯示），有利于醫(yī)生更全面的把握生物芯片反應(yīng)和檢測(cè)結(jié)果。根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的個(gè)性化原因還存在一些其他參數(shù)，如唐氏檢測(cè)過(guò)程中的默認(rèn)中位值參數(shù)等，均已經(jīng)內(nèi)含于相關(guān)專(zhuān)用軟件之中，不需特別輸入。其他的檢測(cè)參數(shù)相信也會(huì)隨著蛋白研究的深入和生物芯片種類(lèi)的增多逐步出現(xiàn)，一般而言會(huì)采取內(nèi)含形式出現(xiàn)，從而幫助更為準(zhǔn)確的分析和判斷。關(guān)于檢測(cè)報(bào)告單的解讀1區(qū)2區(qū)3區(qū)1區(qū)2區(qū)3區(qū)圖6：生物芯片診斷報(bào)告單（舉例）生物芯片診斷系統(tǒng)由軟件安排出具和打印檢驗(yàn)報(bào)告單，格式根據(jù)檢測(cè)對(duì)象會(huì)略有變化，圖

15、4是報(bào)告單的典型格式的示意（性傳播疾病抗體檢測(cè)結(jié)果報(bào)告單和唐氏綜合征檢測(cè)結(jié)果報(bào)告單）。1區(qū)為信息區(qū)。如圖所示包括患者姓名、性別、年齡，檢測(cè)醫(yī)生和送檢醫(yī)生的姓名等信息，這些信息是由軟件中原輸入的資料所決定，不需重新輸入。2區(qū)為檢驗(yàn)結(jié)果區(qū)，顯示所操作的生物芯片中各項(xiàng)目的檢驗(yàn)結(jié)果。目前抗體的檢測(cè)結(jié)果采取定性方式顯示，包括“”（陽(yáng)性）、“”（陰性）、“”（臨界）3種結(jié)果，各項(xiàng)指標(biāo)均以該方式顯示，如上圖顯示梅毒抗體的檢測(cè)結(jié)果為陰性；定量分析中目標(biāo)蛋白的檢測(cè)結(jié)果，一般采取定量方式顯示，直接給出檢測(cè)的絕對(duì)數(shù)值，單位根據(jù)情況有多種形式，如ng/ml、IU/ml、MOM等，如上圖顯示AFP的檢測(cè)結(jié)果為20.21

16、IU/ml。3區(qū)為定性定量分析圖表，以圖表形式更深入詮釋和分析檢驗(yàn)結(jié)果。在抗體檢測(cè)的圖表中，以半定量結(jié)果分析為依據(jù)（具體模式見(jiàn)本文中cutoff一節(jié)），項(xiàng)目檢驗(yàn)數(shù)據(jù)小于cutoff代表陰性，不顯示計(jì)算數(shù)據(jù)；大于cutoff為陽(yáng)性，以半定量計(jì)算數(shù)據(jù)在曲線(xiàn)旁邊顯示，如上圖中CT半定量數(shù)據(jù)為0.5，UU半定量數(shù)據(jù)2.6。同時(shí)醫(yī)生也可以根據(jù)患者連續(xù)檢測(cè)中半定量數(shù)據(jù)的變化結(jié)合其他情況對(duì)病情綜合判斷。根據(jù)公司內(nèi)部技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)設(shè)定3處參考，臨界區(qū)代表檢測(cè)數(shù)據(jù)在cutoff上下5范圍內(nèi)的樣本，為臨界血清（樣本），其檢測(cè)結(jié)果可能會(huì)因檢測(cè)的重復(fù)性影響在cutoff值附近波動(dòng)，甚至引致重復(fù)檢測(cè)該樣本時(shí)，陰陽(yáng)結(jié)果交替出現(xiàn)

17、的現(xiàn)象，需謹(jǐn)慎處理。弱陽(yáng)線(xiàn)和強(qiáng)陽(yáng)線(xiàn)參考為判斷抗體強(qiáng)弱的依據(jù)，高于強(qiáng)陽(yáng)線(xiàn)為抗體數(shù)量高，反應(yīng)強(qiáng)烈；低于弱陽(yáng)線(xiàn)為抗體數(shù)量少，反應(yīng)微弱，甚至反應(yīng)可能為較強(qiáng)的非特異性反應(yīng)，處理結(jié)果應(yīng)帶有一定的謹(jǐn)慎性。這3處參考是公司根據(jù)大量的臨床檢測(cè)統(tǒng)計(jì)設(shè)定，作為醫(yī)生檢驗(yàn)時(shí)的臨床判斷參考，但不能作為絕對(duì)標(biāo)準(zhǔn)。在目標(biāo)蛋白的定量檢測(cè)中，直接在圖標(biāo)曲線(xiàn)旁顯示該蛋白的絕對(duì)定量數(shù)據(jù)或者標(biāo)識(shí)測(cè)試結(jié)果的計(jì)算結(jié)果，如上圖所示，HCG的MOM為1.98，唐氏綜合風(fēng)險(xiǎn)為1/1447；同時(shí)，也會(huì)在圖表上配置相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)，如唐氏風(fēng)險(xiǎn)的判斷閾值1/275即標(biāo)識(shí)于圖表中。生物芯片有關(guān)性能指標(biāo)的說(shuō)明準(zhǔn)確性芯片檢測(cè)的準(zhǔn)確性指標(biāo)是指標(biāo)檢測(cè)的敏感性和特

18、異性指標(biāo)的總稱(chēng)。準(zhǔn)確性的計(jì)算是隨機(jī)選擇血清標(biāo)本通過(guò)與國(guó)家國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品的對(duì)照，或者通過(guò)已經(jīng)審批通過(guò)的檢測(cè)試劑盒的對(duì)照，在此基礎(chǔ)上的測(cè)算。限于篇幅，僅舉例說(shuō)明方法和過(guò)程。分別使用德國(guó)RECI的優(yōu)生優(yōu)育系列ELISA試劑盒、美國(guó)ZEUS的優(yōu)生優(yōu)育系列ELISA試劑盒對(duì)收集的血清標(biāo)本進(jìn)行IgG抗體檢測(cè)，選取其中兩者結(jié)果相一致的血清200人份，再次使用TORCH生物芯片實(shí)施檢測(cè)，最后以ZEUS試劑盒檢測(cè)結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算生物芯片檢測(cè)的準(zhǔn)確性指標(biāo)，結(jié)果數(shù)據(jù)見(jiàn)下表：微矩陣（CMV）ZEUS ELISA試劑盒小計(jì)陽(yáng)性陰性陽(yáng)性1620162陰性142438合計(jì)17624200巨細(xì)胞病毒準(zhǔn)確性指標(biāo)：敏感性= 92%；特

19、異度=100%；YI指數(shù)=敏感性+特異度-1=0.92。微矩陣（RV）ZEUS ELISA試劑盒小計(jì)陽(yáng)性陰性陽(yáng)性1647171陰性92029合計(jì)17327200風(fēng)疹病毒準(zhǔn)確性指標(biāo)：敏感性= 94.8%；特異度=74.1%；YI指數(shù)=敏感性+特異度-1=0.689。微矩陣（TOX）ZEUS ELISA試劑盒小計(jì)陽(yáng)性陰性陽(yáng)性101陰性0199199合計(jì)1199200弓形蟲(chóng)準(zhǔn)確性指標(biāo)：敏感性= 100%；特異度=100%；YI指數(shù)=敏感性+特異度-1=1。微矩陣（HSV-）ZEUS ELISA試劑盒小計(jì)陽(yáng)性陰性陽(yáng)性591473陰性9118127合計(jì)68132200單泡病毒準(zhǔn)確性指標(biāo)：敏感性= 86.

20、8%；特異度=89.4%；YI指數(shù)=敏感性+特異度-1=0.762。表1：TORCH檢測(cè)芯片準(zhǔn)確性對(duì)照試驗(yàn)重復(fù)性（精密度）重復(fù)性是針對(duì)一份相同標(biāo)本血清同時(shí)多次檢測(cè)所得結(jié)果的差異而言，差異越小，重復(fù)性越好。定性檢測(cè)中可以使用陰性結(jié)果和陽(yáng)性結(jié)果的比率，也可以使用總比率表示；定量檢測(cè)中一般使用差異系數(shù)CV表示，CVS/X（S：多次檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)差，X：檢測(cè)平均值）。臨床檢測(cè)中重復(fù)性是和準(zhǔn)確性同樣重要的指標(biāo)。蛋白芯片的檢測(cè)重復(fù)性只與整體系統(tǒng)的性能相關(guān)，而與具體哪種芯片、哪種檢測(cè)項(xiàng)目沒(méi)有關(guān)系，是芯片平臺(tái)技術(shù)的直接體現(xiàn)。影響芯片重復(fù)性的因素包括生物芯片點(diǎn)樣、載體、標(biāo)記、芯片組裝、反應(yīng)和芯片閱讀儀圖像采集和數(shù)據(jù)

21、化性能。由于芯片系統(tǒng)具備數(shù)據(jù)化的突出能力，一般使用CV表示芯片的重復(fù)性。如上所述，我們采取一種蛋白抗體的檢測(cè)介紹芯片的重復(fù)性。選用幽門(mén)螺桿菌中的CagA抗體檢測(cè)指標(biāo)，生產(chǎn)3批該芯片，然后挑取10份已知陽(yáng)性血清，每份血清均從這3批芯片中每批隨機(jī)挑選6張芯片共18張芯片，同時(shí)檢測(cè)完成后使用芯片閱讀儀分析檢測(cè)結(jié)果，并分別計(jì)算每份血清的批間CV（3批綜合計(jì)算）和批內(nèi)CV（每一批分別計(jì)算），結(jié)果見(jiàn)下圖表。 批次血號(hào)批內(nèi)CV(%)批間CV(%)檢測(cè)平均值A(chǔ)BC13.24.64.35.4125.425.76.75.87.577.035.35.85.56.3106.547.43.88.48.762.654.5

22、5.14.45.7111.365.88.06.98.855.177.68.84.29.845.386.35.76.27.372.195.46.74.26.889.9107.67.46.28.350.4表2：Hp檢測(cè)芯片重復(fù)性試驗(yàn)圖7：生物芯片檢測(cè)的重復(fù)性（CagA,陽(yáng)性血清）經(jīng)多次反復(fù)使用上述模式（檢測(cè)指標(biāo)不同）測(cè)算，生物芯片平均CV<15，重復(fù)性強(qiáng)于大多數(shù)傳統(tǒng)檢測(cè)方法。同時(shí)可以看出：CV和批間批內(nèi)相關(guān)，批間CV大于批內(nèi)CV；CV和芯片讀值相關(guān)，讀值越高，CV越低。定量重復(fù)性的特點(diǎn)顯示，對(duì)于較明顯的陽(yáng)性和陰性血清，定性檢測(cè)結(jié)果的重復(fù)性是100；但對(duì)于比較接近c(diǎn)utoff值的血清，在定性檢

23、測(cè)中是可能出現(xiàn)陰陽(yáng)并存的，也是需要引起檢測(cè)人員特別注意和謹(jǐn)慎處理的。靈敏度主要用于項(xiàng)目的定量檢測(cè)。靈敏度是指抗體或者抗原蛋白的最低檢測(cè)量，一般使用質(zhì)量濃度或者效價(jià)表示，如ng/ml，1：512等。靈敏度不僅和生物芯片平臺(tái)技術(shù)相關(guān)，也和具體檢測(cè)的抗體和蛋白指標(biāo)相關(guān)。經(jīng)多次定量方面的研究，目前生物芯片診斷系統(tǒng)可以達(dá)到1ng/ml的檢測(cè)靈敏度，和ELISA方法相當(dāng)。產(chǎn)品設(shè)計(jì)中會(huì)根據(jù)檢測(cè)目標(biāo)的情況和要求去調(diào)節(jié)設(shè)定靈敏度。如心梗聯(lián)檢中肌鈣蛋白I的靈敏度為1ng/ml，肌紅蛋白的靈敏度為100ng/ml。線(xiàn)性范圍（檢測(cè)范圍）在項(xiàng)目的定量檢測(cè)中可能出現(xiàn)該指標(biāo)。因項(xiàng)目不同而不同。線(xiàn)性范圍是指檢測(cè)過(guò)程中對(duì)目標(biāo)能夠準(zhǔn)確定量的范圍，包括上限和下限。生物芯片由于實(shí)施多點(diǎn)組合和具備強(qiáng)大的數(shù)據(jù)分析計(jì)算能力，在某些項(xiàng)