陰離子交換柱使用手冊

1、陰離子交換柱使用手冊Chrompack HPLC IonoSpher A Columns注意Chrompack IonoSpher A 色譜柱填充的是改性硅膠材料。向柱內(nèi)導入堿性溶劑（pH6.5）或酸性溶劑（pH2.5）會溶解硅膠材料導致柱子損壞。在使用這個柱子之前，你要充分地熟悉這本手冊講述的內(nèi)容。1 簡介Chrompack IonoSpher A 柱填充硅膠基質(zhì)的強陰離子交換材料，含有季胺功能團。特別設計用于使用常規(guī)HPLC分析有機和無機陰離子。2 色譜柱老化在開始分析工作以前，柱子必須經(jīng)過正確的老化。一個沒有正確老化的柱子可能會帶來問題，諸如很差的柱效或者分離情況發(fā)生變化等等。要老化這類

2、柱子，首先要使用甲醇淋洗，然后使用去離子水。再用你選用的洗脫液進行平衡。在發(fā)貨以前，每根柱子都已經(jīng)測試過并進行了老化。因此沒有必要在第一次使用時用水沖洗）。3 洗脫液推薦在這類柱上使用的洗脫液要求低電導，或者UV吸收的緩沖液，例如磷酸緩沖液，pH范圍從2.5到6.5。絕對不能使用水楊酸緩沖液，因為水楊酸分解產(chǎn)物會改變固定相的性質(zhì)。另外，硝酸銨（1mM）可以改善峰型，而且不會明顯影響保留時間，檢測或定量結(jié)果。洗脫液在使用以前要脫氣，并用0.45微米濾膜過濾，防止發(fā)生檢測和泵送問題。一定要在開始使用系統(tǒng)以前檢查有否微生物生長，否則你的柱子會堵塞，柱壓會升高到無法接受的水平。4 流量和壓力柱內(nèi)徑（毫

3、米）流速（ml/min）最佳最高2.00.21.03.00.42.04.61.04.010.04.718.0注意：最高壓力：不銹鋼柱：4500psi；玻璃柱：3000psi增加流速或者降低流速要采取小的間隔變化以防止填充床的擾動。如果你想更換柱子，要降低流量至0，等待洗脫液完全流出柱子為止（2分鐘）。拆除柱子而沒有等待壓力的降低會損壞柱子。高柱壓的產(chǎn)生一般是由于不正確地使用柱子的結(jié)果。使用保護柱（見第6節(jié)）會防止污染物沉積在分析柱上。5 樣品準備保持柱子長壽的關鍵是進樣前適當?shù)牡臉悠诽幚?。你必須防止將疏水?與流動相極性差別很大的化合物泵入色譜柱， 不管是來自流動相還是樣品。特別地，要禁止導入

4、顆粒雜質(zhì)。這些最終都會造成操作壓力的增高而且非常困難或者不可能去除。6 保護柱一定要使用保護柱，因為樣品和洗脫液污染可能會造成柱壓力的增高而且影響選擇性。對于ChromSep 柱我們建議使用ChromSep Anion 交換保護柱。當柱壓增高的或者觀察到柱效降低的時候就需要更換保護柱了。對于常用不銹鋼柱，我們建議使用Chromguard Anion exchange High Efficiency（高效）柱(10X3.0mm) 或High Capacity（高容量）柱(50X3.0mm)。7 進樣量和濃度柱尺寸長度*內(nèi)徑最大樣品體積2502.0mm10l2003.0mm15l2504.6mm5

5、0l25010.0mm250l當樣品的洗提強度比洗脫液低（在柱樣品預濃縮）的時候，更高的樣品量也可以注射。8 溫度Chrompack IonoSpher A 柱可以在室溫環(huán)境使用。為了提高柱子的穩(wěn)定性，建議不要在40C以上使用。9 貯存在貯存柱子以前，建議先用去離子水，然后用甲醇沖洗。一定不要在柱子內(nèi)充滿緩沖液或者其他含鹽類的洗脫液的情況下貯存色譜柱。10 檢測靈敏度對于使用鄰苯二甲酸緩沖液作為洗脫液的陰離子的檢測，以下幾種方法可用：折光檢測電導檢測紫外檢測鄰苯二甲酸緩沖液對所有三種檢測方法都是特別好的，因為鄰苯二甲酸緩沖液具有高的折光性，相對低的電導率和紫外吸收性質(zhì)。檢測波長取決于要檢測的離

6、子。11 系統(tǒng)峰當你使用Chrompack IonoSpher A 柱的時候，系統(tǒng)峰可能會出現(xiàn)。通常一個餾分既溶劑在前面，第二個餾分應當是硫酸鹽。方向（正峰或負峰）取決于樣品的pH。位置取決于流動相的Ph。較低pH會使系統(tǒng)峰向前移動。在我們的實驗中pH值在3.8-4.3之間最佳。12柱效損失的可能原因1 額外的峰展寬。要保證管路的長度和內(nèi)徑都保持最小。2 洗脫的平衡時間不夠。3 不正確的洗脫液pH或洗脫液的離子強度。4 洗脫液中存在不正確離子。5 固定相污染。a. 高柱壓伴隨分辨率降低。1 顆粒物積聚在燒結(jié)物或者填充物床上。（a） 樣品來源-過濾或離心（b） 洗脫液來源-過濾洗脫液，封閉洗脫液

7、容器。（c） 系統(tǒng)來源-沖洗整個系統(tǒng)管路和泵；安裝在線系統(tǒng)過濾器。2 蛋白質(zhì)類物質(zhì)的積聚（a） 微生物在樣品中生長。3 微生物在洗脫液中生長。b. 正常柱壓伴隨柱效降低1 有機污染（a） 樣品中有脂肪，油脂，脂質(zhì)。固定相的表面被覆蓋。（b） 從樣品中帶來的不確切的有機物或未正確制備的洗脫液。（c） 在洗脫液制備完成以后帶入洗脫液中的非特定有機物，例如在運輸時從大氣中帶來。13.對于糾正污染問題的可能有效的操作1 準備新鮮的洗脫液在很多情況下，柱效的喪失可以歸結(jié)為洗脫液的污染。所以，要在使用柱子以前準備新鮮的洗脫液，沖洗所有液體管路。洗脫液應當用0.2到0.4微米的濾膜過濾，在使用以前要脫氣。2 色譜柱再生要進行色譜柱的再生工作a 首先使色譜柱反向b 以0.4ml/min的流速用1M硝酸銨洗脫30ml。c 以0.4ml/min的流速用40：60 （v：v）的甲醇/水洗脫30ml。d 以0.4ml/min的流速用異丙醇洗脫30ml。e 以0.4ml/min的流速用水洗脫30m