談血管活性腸肽（VIP）對(duì)單碘醋酸鈉誘發(fā)關(guān)節(jié)炎的影響

1、談血管活性腸肽（VIP）對(duì)單碘醋酸鈉誘發(fā)關(guān)節(jié)炎的影響摘要：關(guān)節(jié)炎性疾病有一個(gè)共同的特征就是白細(xì)胞遷移到關(guān)節(jié)滑膜組織。白細(xì)胞和滑膜細(xì)胞產(chǎn)生各種炎癥介質(zhì)，引起持久的慢性炎癥和組織損傷。關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射單碘醋酸鈉，可以誘發(fā)關(guān)節(jié)炎。研究發(fā)現(xiàn)血管活性腸肽（VIP）能抑制多種細(xì)胞因子的合成與分泌，但VIP在關(guān)節(jié)炎癥中的作用尚不清楚。 本研究的目的是要觀察VIP對(duì)單碘醋酸鈉引起關(guān)節(jié)炎模型及誘發(fā)疼痛的影響。研究結(jié)果表明10-9摩爾VIP注射入膝關(guān)節(jié)，可以緩解關(guān)節(jié)痛覺(jué)過(guò)敏，延長(zhǎng)后肢縮爪反射的潛伏期，增加對(duì)刺激足底表面機(jī)械壓力的耐受。關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射VIP可導(dǎo)致重量重新分布，減輕因疼痛所致的身體重量偏斜。關(guān)鍵詞：血管活性

2、腸肽；關(guān)節(jié)炎模型；痛覺(jué)過(guò)敏關(guān)節(jié)炎性疾病包括骨性關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，它們有一個(gè)共同的特征就是白細(xì)胞遷移到關(guān)節(jié)滑膜組織。白細(xì)胞和滑膜細(xì)胞生產(chǎn)各種炎癥介質(zhì)，例如細(xì)胞因子和基質(zhì)降解酶，可引起持久的慢性炎癥和組織損傷。血管活性腸肽是由神經(jīng)纖維和淋巴細(xì)胞釋放，在微環(huán)境中調(diào)節(jié)先天免疫和適應(yīng)性免疫。 一些研究表明VIP能顯著抑制多種細(xì)胞因子的合成與分泌1,抑制T細(xì)胞活化和抗原提呈,下調(diào)細(xì)胞免疫反應(yīng)24,這對(duì)于治療關(guān)節(jié)炎癥和延緩關(guān)節(jié)炎的破壞性進(jìn)程有利。已知，關(guān)節(jié)內(nèi)注射代謝抑制劑單碘醋酸鈉（MIA），可以誘發(fā)關(guān)節(jié)炎5。本研究的目的是要觀察VIP對(duì)單碘醋酸鈉引起骨關(guān)節(jié)炎模型及相關(guān)的疼痛的影響。 1材料與方法 動(dòng)

3、物:雄性Wistar大鼠40只，體重100-200克， 隨機(jī)分組， 每組10只。動(dòng)物被安放在室溫22的鼠籠內(nèi)，每日進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的光照和暗周期，保證飲用水和食物的充足。 藥品和試劑:單碘醋酸鈉（MIA）和血管活性腸肽（VIP）購(gòu)買于Sigma公司，藥物用新鮮的0.9生理鹽水溶解，備用。 關(guān)節(jié)炎疼痛模型:大鼠用異氟醚作吸入性深麻醉, 伴隨氧氣供應(yīng)。MIA（3 mg/50 l）的生理鹽水溶液（0.1ml）進(jìn)行右膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射。大鼠被飼養(yǎng)14天。 實(shí)驗(yàn)過(guò)程:MIA注射后第14天, 用雙足平衡法測(cè)痛儀和VonFrey測(cè)痛儀對(duì)大鼠進(jìn)行疼痛的敏感性測(cè)定。然后，動(dòng)物被異氟醚麻醉，將VIP（10-9 mol, 0.

4、1ml）注射進(jìn)右膝關(guān)節(jié)，左膝作為對(duì)照注射同劑量生理鹽水（0.1ml）。動(dòng)物被放回籠內(nèi)5分鐘，其活動(dòng)不受限制。注射后10，30，60，180分鐘，分別進(jìn)行痛覺(jué)敏感性測(cè)量。 2疼痛評(píng)估 雙足平衡法測(cè)痛儀（林頓儀表，英國(guó)）是由雙通道重量平衡器組成。用于測(cè)量同側(cè)（關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射VIP）和對(duì)側(cè)（關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射生理鹽水）后肢的重量分布。大鼠放在一個(gè)有斜度的有機(jī)玻璃室內(nèi), 每個(gè)后足掌挺立在一個(gè)單獨(dú)的壓力板上。每個(gè)后肢施加到平衡板的力（以克計(jì)算）均超過(guò)5秒時(shí)間。所讀的數(shù)據(jù)是測(cè)量三次的平均值。處理組（同側(cè)）和對(duì)照組（對(duì)側(cè)）所占重量的百分比的計(jì)算分別按下列公式進(jìn)行計(jì)算： 同側(cè)重量/（同側(cè)重量+對(duì)側(cè)重量） * 100

5、對(duì)側(cè)重量/（同側(cè)重量+對(duì)側(cè)重量） * 100 VonFrey測(cè)痛儀（PBC37400，美國(guó)）用來(lái)自動(dòng)記錄大鼠發(fā)生縮爪反射的時(shí)間（秒）和壓力值（克）。大鼠被放置在一個(gè)封閉的區(qū)域，操作者把力控制器置于動(dòng)物的爪下，向其趾面伸出一根Von Frey型針（直徑0.5毫米），單針逐漸地增加力度，直到大鼠因疼痛而發(fā)生縮爪反射，儀器分別記錄到處理組和對(duì)照組引起縮爪反射的潛伏期和壓力值。 所有數(shù)據(jù)表示為平均值S.E.M.用兩因素方差分析和t-檢驗(yàn)來(lái)檢測(cè)各組間的差異。所得的p值 0.05，n=10）。在MIA誘導(dǎo)產(chǎn)生的關(guān)節(jié)炎模型，大鼠MIA注射側(cè)膝關(guān)節(jié)（右側(cè)）疼痛感加劇，其后肢重量分布偏向于生理鹽水注射側(cè)（左側(cè)）

6、， 用雙足平衡法測(cè)痛儀測(cè)量, 注入MIA誘發(fā)膝關(guān)節(jié)炎側(cè)和生理鹽水側(cè)， 其重量分布百分比在第10分鐘, 30分鐘, 60分鐘時(shí)測(cè)定值分別為40.61.6比59.41.6，39.21.6比60.816，40.21.4比59.81.4。結(jié)果表明：大鼠因一側(cè)的膝關(guān)節(jié)疼痛（同側(cè)），將其全身重量轉(zhuǎn)移至另一側(cè)（對(duì)側(cè)）， 其重量分布有顯著性差異（p0.05, n=10）。VIP最大的效應(yīng)發(fā)生在注射后30分鐘, 其效應(yīng)維持直到3小時(shí)。 3.2用VonFrey測(cè)痛儀測(cè)量VIP對(duì)膝關(guān)節(jié)炎模型痛覺(jué)過(guò)敏的影響：VIP緩解了MIA誘導(dǎo)的膝關(guān)節(jié)炎機(jī)械性痛覺(jué)過(guò)敏，延長(zhǎng)后肢縮爪反射的潛伏期，增加對(duì)刺激足底表面機(jī)械壓力的耐受。

7、右膝關(guān)節(jié)內(nèi)注射MIA（0.1ml）后引起注射側(cè)后肢痛覺(jué)過(guò)敏。引起縮爪反射的潛伏期，在10分鐘，30分鐘，60分鐘時(shí)測(cè)量值分別為11.11.1秒比19.91.1秒（MIA側(cè)與生理鹽水側(cè)之比）， 11.31.2秒比19.4 1.0秒，11.20.9秒比20.01.4秒。其耐受單針刺激的壓力值在10分鐘、30分鐘、60分鐘時(shí)，分別為27.62.8克比47.11.1克(MIA側(cè)與生理鹽水側(cè)之比)、28.02.9克比45.91.4克、27.92.2克比45.61.6克。引起縮爪反射的潛伏期和對(duì)足底平面的單針刺激壓力值在MIA注射膝關(guān)節(jié)側(cè)和生理鹽水注射膝關(guān)節(jié)側(cè)之間有著顯著的差異(P0.05）。給予單針機(jī)械

8、刺激，在VIP注射后10分鐘、30分鐘、60分鐘時(shí), 分別測(cè)量其壓力的變化為39.92.9比46.71.6克（VIP側(cè)與生理鹽水側(cè)之比），39.72.1克比43.62.0克，35.42.2克比41.72.7克，無(wú)顯著性差異（p0.05, n=10）。VIP顯著減少了MIA引起的痛覺(jué)過(guò)敏，VIP發(fā)生的效應(yīng)在注射后10至60分鐘時(shí)間內(nèi)。 4討論 我們的研究結(jié)果表明，關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射VIP有利于降低關(guān)節(jié)炎疼痛的敏感性，改善MIA誘發(fā)的關(guān)節(jié)炎所致體重分布的變化，但VIP的影響是短暫的。 有兩種情況可增加關(guān)節(jié)疼痛的敏感性，一是組織損傷，二是炎癥介質(zhì)釋放。在關(guān)節(jié)內(nèi)，MIA誘導(dǎo)的持久炎癥引起組織損傷，允許更多的

9、炎癥介質(zhì)滲入到關(guān)節(jié)腔內(nèi)，關(guān)節(jié)腔內(nèi)的炎癥介質(zhì)增多，增加了關(guān)節(jié)傳入沖動(dòng)的敏感性6。VIP能抑制多種細(xì)胞因子，如IL-2、IL-4、IL-6、INF-等7的合成與分泌。避免大量的炎癥介質(zhì)釋放和劇烈的炎癥反應(yīng)，抑制T細(xì)胞的免疫功能，消除關(guān)節(jié)腫脹，減輕關(guān)節(jié)炎性疼痛。 參考文獻(xiàn) 1Xin Z, Jiang X, Wang HY, et al. Effect of vasoactive intestinal peptide (VIP) on cytokine production and expression of VIP receptors in thymocyte subsets. Regul Pept

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11、mun. 2008;22(8):1146-51 4David Pozo,Mario Delgado, The many faces of VIP in neuroimmunology: a cytokine rather a neuropeptide? FASEB J. 2004; 18, 1325-1334 5Oestergaard S, Chouinard L, Doyle N, et al. The utility of measuring C-terminal telopeptides of collagen type II (CTX-II) in serum and synovial fluid samples for estimation of articular cartilage status in experimental models of destructive joint diseases. Osteoarthritis Cartilage. 2006;14(7):670-9 6Schaible HG, Grubb BD. Afferent and spinal mechanism