代寫論文酸棗仁皂苷A對大鼠腦缺血海馬區(qū)氨基酸遞質水平及細胞凋亡的影響

1、代寫論文酸棗仁皂苷A對大鼠腦缺血海馬區(qū)氨基酸遞質水平及細胞凋亡的影響【摘要】 目的：觀察酸棗仁皂苷 A對大鼠腦缺血海馬區(qū)興奮性氨基酸及細胞凋亡的影響,探討酸棗仁皂苷 A對腦缺血損傷保護的作用機制。方法：建立大鼠大腦中動脈閉塞再灌注損傷模型,將健康SD大鼠隨機分為假手術組、缺血再灌注模型組、尼莫地平組、酸棗仁皂苷A組,四組于腦缺血再灌注后12、24、48小時、4天、7天,各取6只大鼠斷頭取腦，測定大鼠缺血側腦海馬區(qū)氨基酸遞質水平及細胞凋亡數(shù)。結果： 除假手術組外,與模型組比較,尼莫地平組和酸棗仁皂苷 A組各觀察時間點缺血側腦海馬區(qū)谷氨酸(Glu)及細胞凋亡均明顯降低(P0.05) ，而氨基丁酸(

2、GABA)在各時間點均明顯升高;與尼莫地平組比較,酸棗仁皂苷 A組大鼠缺血側海馬區(qū)Glu降低(P0.05)，酸棗仁皂苷 A組細胞凋亡數(shù)降低更顯著(P0.05)。結論：酸棗仁皂苷 A能調節(jié)腦缺血損傷后海馬區(qū)氨基酸水平的釋放，抑制細胞凋亡。【關鍵詞】 腦缺血 興奮性氨基酸 細胞凋亡 酸棗仁皂苷AEffects of Jujuboside A on Amino Acid Levels of Neurotransmitters and Apoptosis in Hippocampus Cerebral Ischemia in Rats WU Yunhu,et al.Affiliated Ruikang

3、 Hospital of Guangxi Chinese Traditional Collage, Nanning (530011), China.Abstract Objective:To observe the effect of jujuboside A (JuA) on amino acids levels and apoptosis in hippocampus cerebral ischemia in rats and to probe into the neuro-protection mechanism of mild hypothermia on cerebral ische

4、mic injury. Methods:Using the model of focal middle cerebral artery occluded, the healthy Wistar rats were randomly divided into sham group, cerebral ischemia model group, nimodipine group, and JuA treatment group. Every 6 rats in each group were sacrificed on 0.5d, 1d, 2d, 4d, and 7d after cerebral

5、 ischemia and reperfusion to determine amino acids and apoptosis levels in the brain. Results:Compared with the model group, the nimodipine and JuA groups had glutamic acid and apoptosis significantly decreased (P0.05) and Gamma aminobutyric acid(GABA) increased at each time point except the Sham gr

6、oup. Compared with the nimodipine group, the level of glutamic acid and apoptosis reduced more significantly in the JuA group(P0.05).Conclusion:JuA can regulate effectively the release of amino acid and decrease apoptosis in the hippocampus after cerebral ischemic injury.Key words jujuboside A cereb

7、ral ischemia amino acids apoptosis酸棗仁主要用于鎮(zhèn)靜安神。近年來發(fā)現(xiàn)其主要成分酸棗仁皂苷 A對缺血后腦損傷有神經(jīng)保護作用，但其具體機制目前尚不完全清楚。本實驗采用大鼠局灶性腦缺血模型，觀察腦缺血損傷海馬區(qū)氨基酸遞質水平變化及神經(jīng)元細胞凋亡的變化及酸棗仁皂苷 A對兩類指標的影響，旨在從細胞和分子水平進一步探討酸棗仁皂苷 A的可能作用機制。1 材料與方法1.1 實驗動物 雄性SD大鼠120只，體重200230g，由廣西藥品檢驗所實驗動物中心提供。1.2 模型制備及分組 手術組采用稍加改良的ZeaLonga 法，將SD大鼠制備為大腦中動脈閉塞再灌注損傷模型(MCAO

8、 ) ,操作方法：取SD大鼠，用10%水合氯醛腹腔麻醉(35mg/100g)，仰臥固定在手術臺上，頸部備皮，常規(guī)消毒鋪巾。行頸部正中切口，逐層分離并暴露右側頸總動脈(arteria carotis commun,CCA )，小心分離右側CCA、頸內動脈( arteria carotis interna,ICA ) 及頸外動脈(arteria carotis externa,ECA )，避免刺激迷走神經(jīng)。在CCA、ICA、ECA 上各置一根30 絲線，于ECA分出甲狀腺上動脈和枕動脈后的遠端(約距頸總動脈分叉處5mm 7mm)，結扎ECA。隨后于ICA和CCA處分別置顯微動脈夾，在距ICA、EC

9、A分叉3mm 的CCA 上剪一“V ”形切口。將尼龍線烤鈍的一端插入CCA 上的小口，放松ICA 上預置的動脈夾，將尼龍線由CCA 插入ICA 內，向前徐進1820mm，稍遇阻力即停止進入。將預置在ICA 上的絲線扎緊，防止出血和栓子滑出?？p合皮膚，術畢。隨機分為缺血再灌注模型組、尼莫地平組、酸棗仁皂苷A組，假手術組按上述方法麻醉后，切開皮膚后即縫合。1.3 給藥方法 酸棗仁皂苷A組給予酸棗仁皂苷A成都天福堂經(jīng)濟有限責任公司提供(純度98%)20mg/kg，尼莫地平組給予尼莫地平注射液1mg/kg，假手術組及模型組給予等體積生理鹽水，均作腹腔注射。各組于術前30min給藥1次，術后仍按上述劑量

10、給藥，1天1次。四組于缺血后12、24、48小時、4天、7天 ，各取6只大鼠斷頭取腦測定各項指標。1.4 檢測指標及方法1.5 統(tǒng)計學方法 實驗數(shù)據(jù)以(s)表示,用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，應用單因素方差分析，組間兩兩比較用t檢驗。2 結 果2.1 谷氨酸釋放情況 假手術組各時點無明顯變化。與模型組比較，尼莫地平組各時點谷氨酸釋放均減少，其中24、48小時差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);酸棗仁皂苷 A組與模型組比較，5個觀察時間點谷氨酸釋放均明顯降低，4天差異有統(tǒng)計學意義(P0.01);4天、7天谷氨酸釋放較尼莫地平組降低，差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。谷氨酸釋放時點分布：12

11、小時開始增高，48小時為高峰后呈下降趨勢，以第7天下降最明顯，見表1。表1 四組谷氨酸釋放量比較與模型組比較，P0.052.2 氨基丁酸釋放情況 與模型組比較，尼莫地平組各時點GABA釋放均升高，其中48小時、4天差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與模型組比較，酸棗仁皂苷A組5個觀察時間點GABA釋放均較模型組明顯升高，其中第4天差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。GABA釋放時點分布：12小時開始增高，4天為高峰，后呈下降趨勢，第7天下降最明顯，見表2。2.3 神經(jīng)細胞凋亡情況 假手術組在各個時間點腦組織切片未見陽性細胞;與模型組比較，尼莫地平組12、24小時陽性細胞明顯降低，但差異無統(tǒng)計學意義(

12、P0.05)，48小時、4天差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。酸棗仁皂苷 A組與模型組比較，12、24小時陽性細胞降低，但差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)，48小時、4天、7天差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);4天陽性細胞降低,但差異無統(tǒng)計學意義;7天差異有顯著性意義(P0.05)。凋亡細胞時點分布：12小時開始增高，24小時為高峰，后呈下降趨勢，第7天下降最明顯，見表3。表2 四組-氨基丁酸釋放量比較與模型組比較，P0.05表3 四組神經(jīng)細胞凋亡計數(shù)比較與模型組比較，P0.05;與尼莫地平組比較，P0.053 討 論腦缺血可以誘發(fā)一系列的損傷機制，其中興奮性氨基酸(excitatory amino

13、 acid,EAA )過度釋放，作用于突觸后膜受體，使EAA受體敏感性增高，引起突觸后神經(jīng)元過度興奮、潰變、壞死。當腦缺血缺氧時,EAA迅速升高,其中谷氨酸(Glutamate,Glu)是腦內最重要的EAA1。研究表明，抑制缺血缺氧時腦內EAA的增高，對減輕和延緩缺血神經(jīng)元損傷、保護缺血腦組織有重要作用25。本研究選擇尼莫地平做陽性對照，其通過調節(jié)氨基酸遞質水平的神經(jīng)保護作用已被肯定6。研究還發(fā)現(xiàn)，EAA升高的同時也會出現(xiàn)抑制性氨基酸(inhibitory amino acid,IAA)的釋放增加7，這一過程可以對抗 EAA 的過量釋放而發(fā)揮保護作用，其中 GABA參與這一抑制性作用。本實驗大

14、鼠腦缺血后采用酸棗仁皂苷 A干預治療可增強缺血腦組織 GABA 的表達，其神經(jīng)保護作用與增強 GABA 表達、抑制興奮毒性有關。腦缺血后，神經(jīng)細胞凋亡的發(fā)生既是凋亡相關基因表達的結果，又受許多內外因素的調節(jié)，主要有興奮性氨基酸、氧自由基、神經(jīng)元生存環(huán)境變化和凋亡基因的調控等因素對腦缺血細胞凋亡過程的調節(jié)。谷氨酸等氨基酸的興奮毒性作用和自由基的毒性作用在急性腦缺血細胞死亡、再灌注損傷和遲發(fā)性神經(jīng)元死亡中起重要作用。腦缺血時，GABA與Glu 同步增高，損傷進展時，GABA降低,加重缺血性腦損傷。另外，谷氨酸受體介導的興奮毒性作用也可通過凋亡機制實現(xiàn)。本實驗結果顯示，酸棗仁皂苷 A處理后的大鼠在腦

15、缺血后，細胞凋亡密度較模型組及尼莫地平治療組明顯降低，說明經(jīng)酸棗仁皂苷A處理可以抑制腦缺血后海馬區(qū)的細胞凋亡?！緟⒖嘉墨I】 1 Kaur J,Zhao Z,Geransar RM,et al.Prior deafferentation confers long term protection to CA1 against transient forebrain ischemia and sustains GluR2 expression.Brain Res,2006,1075(1):2012122 Ooboshi H,Ibayashi S,Takano K,et al.Hypothermia

16、inhibits ischemia-induced efflux of amino acids and neuronal damage in the hippocampus of aged rats.Brain Res，2000,884(12):23303 Maier CM,Sun GH,Kunis D,et al.Delayed induction and long-term effects of mild hypothermia in a focal model of transient cerebral ischemia: neurological outcome and infarct size.J Neurosurg，2001,94(1):90964 Dong H,MoodyCorbett F,Colbourne F,et al.Electrophysiological properties of CA1 neurons protected by postischemic hypothermia in gerbils.Stroke,2001,32(3):7887955 Fujisawa H,Koizumi H,Ito H,et al.Effects of