大黃素對潑尼松致大鼠脂代謝異常的預(yù)防作用研究

1、大黃素對潑尼松致大鼠脂代謝異常的預(yù)防作用研究 08-05-15 15:20:00 作者：劉鈺瑜 崔燎編輯：studa20【摘要】 目的觀察不同濃度大黃素對潑尼松致大鼠脂代謝異常的預(yù)防作用。方法3月齡大鼠給予潑尼松和藥物90 d。觀察血清生化指標(biāo)、器官指數(shù)和骨髓基質(zhì)細(xì)胞體外的成脂能力。結(jié)果給予潑尼松和藥物90 d后大鼠高密度脂蛋白膽固醇降低，骨髓基質(zhì)細(xì)胞體外成脂能力增強(qiáng)。大黃素90 mgkg- 1d- 1和大黃素270 mgkg- 1d- 1可升高高密度脂蛋白膽固醇和骨髓基質(zhì)細(xì)胞體外成脂能力。結(jié)論大黃素對潑尼松引起的脂代謝異常有預(yù)防作用。 【關(guān)鍵詞】 大黃素 糖皮質(zhì)激素 血脂 骨髓基質(zhì)細(xì)胞 大鼠

2、Abstract:ObjectiveTo determine whether emodin can completely prevent dyslipidemia in rats treated with prednison. MethodsThirty-five Sprague-Dawley male rats at age of 3 months were divided into five groups and treated for 90 days as follows: intact rats were given with vehicle as control; Prednison

3、e was given orally to the rats at dose of 3.0 mg/kg/d as the model group; Emodin at dose of 90mg/kg/d or 270 mg/kg/d were plus to the prednison treated rats and Integrated medicine (Calcium 375 mg/kg/d+VitD3 250 U/kg/d ) were plus to the prednison treated rats. The blood serum was separated for test

4、ing biochemistry indices. the MSCs were isolated by density-gradient centrifugation and cultured.ResultsRats treated with GC decreased serum HDL-Cholesterol and significantly increased serum sulfur compared with vehicle controls. Treatment with emodin markedly increased in the serum HDL-Cholesterol

5、level and decreased serum sulfur. Emodin prevented adipogenic differentiation of MSCs from prednisone-treated rats.ConclusionEmodin shows effect of prevention against Glucocorticoid -induced dyslipidemia in rats.Key words:Emodin; Glucocorticoid; Dyslipidemia; Marrow stromal cells; Rats 糖皮質(zhì)激素在臨床上應(yīng)用極為

6、廣泛，但長期大劑量使用可造成一系列嚴(yán)重的不良反應(yīng)，脂代謝異常便是糖皮質(zhì)激素長期應(yīng)用的嚴(yán)重不良反應(yīng)之一。脂代謝異?？梢詫?dǎo)致許多心血管疾病發(fā)生，如冠脈粥樣硬化和中風(fēng)等，同時(shí)也可能是糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松的重要發(fā)病機(jī)制之一。大黃素(emodin)化學(xué)名為1,3,8-三羥基-6-甲基蒽醌(1,3,8-trihydroxy-6- methylan-thraquinone)，屬于羥基蒽醌類。有降血脂作用1；能抑制3T3 L1小鼠前脂肪細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞，以及抑制脂肪酸合成酶的活性2。本實(shí)驗(yàn)觀察大黃素對長期用糖皮質(zhì)激素大鼠的脂蛋白水平和骨髓基質(zhì)細(xì)胞的成脂分化能力的影響，為闡明糖皮質(zhì)激素對脂代謝的影響和大黃素對

7、此的對抗作用提供進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1 材料與方法1.1 材料DMEM（L）培養(yǎng)基購自Gibco公司；Percoll液購自amersham pharmacia公司；大黃素對照品由陜西省物資產(chǎn)業(yè)集團(tuán)總公司提供；醋酸潑尼松（浙江仙琚制藥股份有限公司，批號(hào)030605）；碳酸鈣（廣州化學(xué)試劑二廠，批號(hào)2002041201）；維生素D3（上海第九制藥廠，批號(hào)020903，30萬單位/ml）。高密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒購自寧波市慈城生化試劑廠；總膽固醇測定試劑盒購自中生北控生物科技股份有限公司；堿性磷酸酶測定試劑盒購自中生北控生物科技股份有限公司。1.2 儀器酶標(biāo)儀（Bio-ELx-800型，美國）；電

8、感偶合等離子體直讀光譜儀（日本島津公司）；752紫外光柵分光光度計(jì)（上海第三分析儀器廠）；AE240電子天平（Mettler-Toledo instr.shanghai Ltd）。NAPCO二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱：5420-1， Precision Scientific USA；XD-101倒置相差顯微鏡，江南光電股份有限公司。1.3 動(dòng)物及其分組3月齡雄性SD大鼠（廣東醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）35只，普通級(jí)；分籠飼養(yǎng)，飼養(yǎng)于室溫23，相對濕度80%的清潔環(huán)境中，自由攝食和攝水；使用標(biāo)準(zhǔn)飼料，其中鈣含量1.33%，磷含量0.95%。隨機(jī)分成5組，1組（對照組，7只）；2組（模型組，7只）；3組（陽

9、性對照組，7只）；4組（大黃素低劑量組，7只）；5組（大黃素高劑量組，7只）。1組每天上、下午灌胃給予含0.1%吐溫80的生理鹽水（溶劑對照）；，2組每天上午灌胃給予含0.1%吐溫80的生理鹽水，下午灌胃給予潑尼松3 mg/kg，其余3組每天下午以醋酸潑尼松3 mg-1kgd-1灌胃，上午給予下列藥物：3組灌胃碳酸鈣375 mg/kg +VitD3250 U/kg，4組灌胃大黃素90 mg/kg，5組灌胃大黃素270 mg/kg。所有動(dòng)物給藥時(shí)間為90 d。1.4 標(biāo)本的制備和處理用戊巴比妥鈉麻醉后心臟抽血處死，分離血清，用電感偶合等離子體直讀光譜儀測定鈣、磷、硫含量；分別采用連續(xù)監(jiān)測法、磷鎢

10、酸-鎂沉淀法、酶比色法(CHOD-PAP法)測定血清中堿性磷酸酶、高密度脂蛋白膽固醇和總膽固醇的含量。取出肝臟、胸腺、脾、左腎、左腦稱濕重。1.5 大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞的制備及培養(yǎng)在1，2，3，5組動(dòng)物中每組隨機(jī)選取4只動(dòng)物，分離股骨收集骨髓基質(zhì)細(xì)胞。具體步驟：在無菌條件下分離大鼠股骨，切除股骨兩端。用4C的DMEM(L)培養(yǎng)液從股骨上端往下沖出骨髓，8根股骨沖出的骨髓收集于同一燒杯中，混勻吹散細(xì)胞，2 000 r/min離心10 min，棄上清。沉淀用DMEM(L)培養(yǎng)液充分混勻，制成細(xì)胞懸液，輕輕疊加到等體積的密度為1 073 g L-1的4的Percoll分離液上，2 000 r/min離心

11、30 min后收集界面層細(xì)胞，用不含血清的DMEM(L)培養(yǎng)液離心洗滌后重懸，吹打均勻后以4105cm-2密度接種，37，5%CO2，飽和濕度的CO2孵箱靜置培養(yǎng)。細(xì)胞融合后用0.25%胰酶消化傳代。1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量資料以 表示。SPSS11.0軟件行方差分析并行Bonferroni組間比較，雙側(cè)P0.05為統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)顯著性標(biāo)準(zhǔn)。2 結(jié)果2.1 大黃素對糖皮質(zhì)激素大鼠內(nèi)臟指數(shù)的影響大鼠處死后取下各器官稱其濕重，以器官濕重除以體重得器官重量指數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示各組動(dòng)物的內(nèi)臟指數(shù)無明顯變化。表1 大黃素對糖皮質(zhì)激素大鼠內(nèi)臟指數(shù)的影響g(略)2.2 大黃素對糖皮質(zhì)激素大鼠血清微量元素含量的影響給予

12、潑尼松90 d后，大鼠血清中硫含量明顯升高。大黃素對此有預(yù)防作用，高、低劑量組可使血硫降低（P0.05），而復(fù)方鈣組對此無預(yù)防作用，血硫含量與模型組相當(dāng)。給予潑尼松90 d后，大鼠血清中鈣、磷含量無明顯變化。表2 大黃素對糖皮質(zhì)激素大鼠血清微量元素含量的影響(略）2.3 大黃素對糖皮質(zhì)激素大鼠血清生化指標(biāo)的影響給予潑尼松90 d后，大鼠高密度脂蛋白膽固醇含量降低，堿性磷酸酶含量有下降的趨勢。大黃素和復(fù)方鈣均可升高高密度脂蛋白膽固醇(HDL)含量和堿性磷酸酶含量，高密度脂蛋白膽固醇含量和堿性磷酸酶含量與對照組相當(dāng)。表3 大黃素對糖皮質(zhì)激素大鼠血清生化指標(biāo)的影響(略）2.4 大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞自發(fā)成脂能力比較骨髓基質(zhì)細(xì)胞傳代后對照組和加藥組梭形或三角形細(xì)胞較多，且細(xì)胞胞核較大，胞漿豐富。只看到小部分細(xì)胞自發(fā)分化為脂肪細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)脂滴。激素組除了成纖維樣細(xì)胞外，還有部分細(xì)胞變圓變大，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)密布的脂滴，細(xì)胞聚集處可見較多代謝產(chǎn)物堆積。見圖14。圖14為體內(nèi)灌胃給予潑尼松和藥物90 d后的各組大鼠的骨髓基質(zhì)細(xì)胞傳代培養(yǎng)時(shí)的細(xì)胞形態(tài)。3 討論3.1 長期給予糖皮質(zhì)激素可致大鼠脂代謝異常給予潑尼松90 d后，大鼠高密度脂蛋白膽固醇(HDL)含量降低。總膽