免疫學檢驗總結(jié)表格(共9頁)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上第一部分：基本理論抗原抗體反應(yīng)抗原抗原的兩種特性：免疫原性、免疫反應(yīng)性共同抗原、交叉反應(yīng)、異嗜性抗原、超抗原等抗原的分類依據(jù)性能：完全抗原、不完全抗原依據(jù)抗體產(chǎn)生是否要T cell刺激：胸腺依賴性抗原（TD-Ag）、 胸腺非依賴性抗原（TI-Ag）絲裂原刀豆蛋白A（ConA）T細胞有絲分裂原植物凝集素T細胞有絲分裂原美洲商陸絲裂原T細胞和B細胞有絲分裂原脂多糖（LPS）B細胞有絲分裂原葡萄球菌A蛋白（SPA）B細胞有絲分裂原抗體結(jié)構(gòu)與功能：略IgG單體分子、血清和細胞外液中含量最高IgM五聚體、分子量最大、不能透過胎盤、宮內(nèi)感染指標IgA有兩種類型（血清型和分泌型）、

2、對新生兒早期抗感染十分重要IgD單體分子、膜結(jié)合型IgD是Bcell分化成熟的標志IgE單體分子、含量最少、特異性過敏和寄生蟲感染中有意義抗原抗體反應(yīng)原理結(jié)合力、親和力與親合力抗原抗體反應(yīng)特點特異性；比例問題：等價帶、前帶、后帶；可逆性影響因素反應(yīng)物抗原理化性質(zhì)、抗原表位等抗體來源：R型血清和H型血清特異性與親和力反應(yīng)條件電解質(zhì)、酸堿度、溫度、比例抗原抗體的制備免疫原的制備顆粒性免疫原的制備較簡單、分離或純培養(yǎng)可溶性抗原的制備粗抗原制備：搗碎組織、破碎細胞、粗提取分離與純化、濃縮與保存人工免疫原的制備將半抗原與載體結(jié)合，常用蛋白質(zhì)作為載體合成肽抗原的制備合成肽屬于半抗原的一種，所以·

3、····基因工程抗原的制備獲得目的抗原的基因編碼，然后擴增純化抗體的制備多克隆抗體制備使用免疫原免疫動物獲得抗體、又叫抗血清；弗氏完全佐劑（CFA，石蠟油+羊毛脂+卡介苗）和弗氏不完全佐劑（IFA，石蠟油+羊毛脂）大致過程：獲取、鑒定、純化、保存單克隆抗體（McAb）制備原理：雜交瘤技術(shù)等親本細胞的選擇與融合：無菌取脾HAT培養(yǎng)基的選擇作用陽性克隆選擇與克隆化制備單克隆抗體：在小鼠腹腔誘生出腫瘤并產(chǎn)生含McAb的腹水鑒定、保存、應(yīng)用基因工程抗體的制備抗原抗體的純化離心分離差速離心粗分離；會有共沉；分離分子量相差大的物質(zhì)；動力學方法密度梯度離心用于分離密度

4、相近大小不同；常用介質(zhì)為蔗糖、甘油；離心分離的物質(zhì)密度一定要大于密度梯度介質(zhì)的最大密度；有共沉等密度梯度分離大小相同密度不同的物質(zhì)；介質(zhì)常用銫鹽；銫鹽對鋁有腐蝕，防止濺出；不會有共沉沉淀分離鹽析法原理：鹽的存在減弱了蛋白分子周圍的水化膜，導(dǎo)致蛋白發(fā)生聚集而沉降有機溶劑沉淀優(yōu)：分辨率高、溶劑易除；缺：有毒、可能會是蛋白失活非離子聚合物沉淀常用聚乙二醇離子交換層析凝膠層析常用凝膠：葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠、Superdex親和層析利用欲分離物質(zhì)和它們的特異性配體間具有特異性親和力電泳有支持體紙電泳醋酸纖維薄膜薄層電泳（薄膜或薄板）非凝膠性支持體區(qū)帶電泳（淀粉、纖維素粉、硅膠等）凝膠支

5、持體區(qū)帶電泳（淀粉液、聚丙烯酰胺凝膠）無支持體Tiselius移界電泳顯微電泳等點聚焦電泳等速電泳密度梯度電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳與SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳區(qū)別第二部分：免疫檢驗技術(shù)1. 沉淀反應(yīng)可溶性抗原；多克隆抗體更適合；R型血清首選液相沉淀試驗環(huán)狀沉淀試驗：定性絮狀沉淀試驗抗體稀釋法、棋盤格法（找出Ag、Ab最佳比例）凝膠沉淀試驗單向擴散試驗定量試驗；兩個曲線雙向免疫擴散試驗(定性)沉淀線數(shù)目：抗原或抗體不純；沉淀線彎向分子量大的；沉淀線靠近濃度低的；可以測定效價(半定量)免疫電泳對流免疫CIEP雙擴+電泳；Ag向正極泳動、Ab向負極泳動火箭電泳單擴+電泳；定量免疫電泳先蛋白區(qū)帶電泳、再

6、雙擴免疫濁度測定（定量）透射濁度測定、散射濁度測定免疫速率抑制濁度測定用一定量的已知半抗原-載體與限量特異性抗體反應(yīng)，測定生成的半抗原-載體-抗體所造成的散色速率2. 凝集反應(yīng)顆粒性抗原或帶有可溶性抗原的載體定性試驗直接凝集試驗玻片凝集定性；多用于紅細胞ABO血型試管凝集半定量、多用于Ab；外斐試驗、肥達試驗間接凝集試驗將抗原與某一載體結(jié)合；常用載體：人O型RBC、SRBC、SPA等間接凝集試驗正向間接凝集試驗用抗原致敏顆粒檢測抗體反向間接凝集試驗用已知抗體檢測抗原間接凝集抑制試驗用已知抗原致敏顆粒和相應(yīng)抗體，檢測樣本中是否有與致敏顆粒相同的抗原，有正向和反向間接血凝試驗載體顆粒為紅細胞其它凝

7、集試驗抗球蛋白試驗（Coombs試驗）是抗球蛋白參與的間接血凝試驗直接Coombs檢測已粘附在RBC的不完全抗體；新生兒溶血、自身免疫溶血性貧血間接Coombs血清中游離抗體；多用于檢測母體Rh(D)協(xié)同凝集試驗載體顆粒為SPA的間接凝集試驗冷凝集試驗檢測冷凝集素的方法，04最明顯自身紅細胞凝集試驗主要試劑為抗人O型紅細胞MCAb，可以與各型RBC結(jié)合卻不引起凝集；樣本為全血特點是排除由于紅細胞凝集可能引起的假陽性3. 補體試驗系統(tǒng)：緩沖液PBS補體SRBC溶血素補體測定試驗血清總補體活性(CH50)測定活化經(jīng)典途徑；為么要50%溶血作為終點測定；意義旁路活化途徑(AP-H50)測定EGTA螯

8、合Ca2+，封閉Cl，阻斷經(jīng)典途徑補體結(jié)合試驗分為直接(不溶血為陽性)和間接(溶血為陽性)兩類實驗結(jié)果要對照眾多對照實驗觀察4. 酶免疫技術(shù)(E)定量或定性固相載體最常用聚苯乙烯酶和底物最常用辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(AP)；還有-半乳糖胺酶分類雙抗體(原)夾心檢測抗原最常用；只適用于二價或二價以上大分子抗原雙位點一步法雙抗夾心時，待測樣品和酶標物一起加入間接法檢測抗體最常用競爭法既可測抗原，又可測抗體；參考管和待測管對照觀察5. 熒光免疫技術(shù)(F)*陽性細胞數(shù)量和熒光強度可以作為定量或半定量指標常用熒光物質(zhì)異硫氰酸熒光素(FITC)最常用、最廣泛；黃色或橙黃色粉末；激發(fā)后發(fā)出黃綠

9、色四乙基羅丹明(RB200)橘紅色粉末；激發(fā)后為橘紅色熒光四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)紫紅色粉末，激發(fā)后有橙紅色熒光；猝滅速度慢藻蛋白類藻紅蛋白PE(此類最常用)、藻青蛋白PC、別藻青蛋白APC；多呈現(xiàn)橙色或紅色物質(zhì)熒光顯微技術(shù)光源短波光；波長連續(xù)或不連續(xù)；濾板隔熱濾板、激發(fā)濾板、吸收濾板；光路透射光或落射光分類直接染色法熒光標記抗原(抗體)直接檢測抗體(抗原)間接染色法酶聯(lián)免疫+熒光標記補體結(jié)合免疫熒光Ag,Ab結(jié)合激活補體；熒光素標記抗補體的抗體；雙標記染色標記不同抗體檢測同一樣品流式熒光免疫技術(shù)定量分析或純化；流式細胞儀與熒光免疫結(jié)合6. 放射免疫技術(shù)(R)*精確測定各種微量物質(zhì)放

10、射免疫分析(RIA)原理：標記抗原(可以為半抗原)Ab*和非標記抗原Ab對特異性抗體Ag(一定量)的競爭結(jié)合反應(yīng)計數(shù)儀射(131I,125I)線用晶體閃爍計數(shù)儀射線(57Cr,60Co)用液體閃爍計數(shù)儀免疫放射分析(IMRA)原理以過量標記的抗體與待測抗原進行非競爭性免疫結(jié)合反應(yīng)，時間段，靈敏度較RIA高，操作較簡單分類單位點IRMA直接用放射標記物質(zhì)檢測另一個雙位點IRMA同時與待測抗原的兩個抗原位點結(jié)合；靈敏度高間接IRMA雙抗夾心結(jié)合間接法再結(jié)合IRMARIA與IRMA的比較 P1697. 金免疫技術(shù)快速診斷膠體金特性膠體特性電解質(zhì)可以使之水化膜破壞而聚集沉淀呈色性和光吸收顆粒直徑520

11、nm：葡萄酒紅色；顆粒直徑2040nm：深紅色；顆粒直徑60nm：藍紫色等分類斑點金免疫滲濾試驗(DIGFA)（可以定性）將特異性抗原或抗體固定在硝酸纖維素膜上，其下面有吸水材料，形成滲濾裝置；陽性有紅色出現(xiàn)有間接法和雙抗夾心法斑點金免疫層析試驗雙抗夾心法較大分子抗原；質(zhì)控線紅色且T區(qū)顯紅為陽性競爭法小分子抗原或半抗原；質(zhì)控線紅色且T區(qū)顯紅為陰性8. 化學發(fā)光免疫分析技術(shù)高靈敏高特異性發(fā)光原理分子或原子中的電子吸收能量躍遷后回到基態(tài)會發(fā)出光子，從而發(fā)光化學發(fā)光常溫下，伴隨化學反應(yīng)過程所產(chǎn)生的光的發(fā)射現(xiàn)象發(fā)光標記物直接參與發(fā)光反應(yīng)的標記物標記物本身就是化學發(fā)光中的能量轉(zhuǎn)移載體，發(fā)光底物；如魯米諾

12、類、吖啶酯類、苯酚類以催化反應(yīng)或能量傳遞參與發(fā)光的酶標記物即作催化劑，又參與化學發(fā)光反應(yīng)HRP對魯米諾和H2O2起催化作用ALP以能量傳遞參與氧化反應(yīng)的非酶標記物不直接參與化學發(fā)光反應(yīng)；三聯(lián)吡啶釕具體技術(shù)化學發(fā)光免疫分析(CLIA)以化學發(fā)光物質(zhì)(如吖啶酯)直接標記Ag或Ab，發(fā)生免疫反應(yīng)后，直接引發(fā)化學發(fā)光進行檢測化學發(fā)光酶免疫技術(shù)(CLEIA)采用催化某一發(fā)光反應(yīng)的酶標記Ag或Ab，形成酶標記抗原-抗體化合物；加入了催化發(fā)光的酶，使發(fā)光速度加快生物發(fā)光免疫分析(BLIA)利用生物發(fā)光物質(zhì)標記Ag或Ab微粒子化學發(fā)光免疫分析順磁性微粒子為載體、用ALP標記；以AMPPD作為發(fā)光劑電化學發(fā)光免

13、疫分析三聯(lián)吡啶釕是電化學發(fā)光免疫分析用的發(fā)光劑；檢測廣泛；持續(xù)時間長；信號強；靈敏度高等第三部分：具體物質(zhì)的檢測免疫細胞的檢測細胞分離法外周血WBC的分離自然沉降法和高分子聚合物沉降法外周血單個核細胞分離密度梯度離心法；淋巴細胞分離玻璃器皿吸附；媳婦過濾；磁鐵吸引淋巴細胞亞群的分離純化E玫瑰花結(jié)分離：T細胞能結(jié)合SRBC結(jié)合尼龍分離：T細胞表面絨毛短少，B則多長、易吸附在在尼龍毛上親和板結(jié)合法：單抗與不同亞群的淋巴細胞結(jié)合在板上不易被洗掉流式細胞儀分選法磁性激活細胞分離器分離法：用于T細胞亞群分離T細胞檢測表面標志檢測用間接免疫熒光、酶免疫技術(shù)等檢測T細胞表面的表面標志，如CD分子和MHC等T

14、細胞受體檢測E受體檢測人T細胞有SRBC抗體，可形成玫瑰花環(huán)IL-2受體檢測雙抗體夾心、ELISA等T細胞功能檢測T細胞增殖試驗3H-TdR摻入法MTT比色法T細胞介導(dǎo)的細胞毒性試驗形態(tài)學檢查51Cr釋放法CTL介導(dǎo)的細胞凋亡檢測法抑制性T細胞功能檢測利用ConA誘導(dǎo)Ts細胞，比較誘導(dǎo)與未經(jīng)誘導(dǎo)的T對B抗體產(chǎn)生的抑制，評價T市功能B細胞檢測表面抗原檢測檢測CD19、CD20、CD22等B細胞受體檢測SmIg標志的檢測花環(huán)形成試驗檢測B細胞表面的Fc受體B細胞功能檢測體內(nèi)檢測免疫球蛋白測定血清中血型抗體的測定體外檢測反向溶血空斑形成實驗等自然殺傷細胞的檢測、吞噬細胞檢測細胞因子及其受體的檢測（具

15、體細胞因子檢測見課本）生物學測定法細胞因子調(diào)節(jié)的細胞增殖和增殖抑制試驗3H-TdR摻入法MTT法染料染色法直接計數(shù)法：直接計數(shù)活細胞集落形成實驗細胞因子介導(dǎo)的細胞毒性試驗4小時51Cr釋放法乳酸脫氫酶釋放法3H-TdR釋放法細胞因子抗病毒活性的檢測方法趨化活性得到測定免疫學測定ELISA雙抗體夾心法競爭法Western印跡單個細胞分泌細胞因子的測定反向反向溶血空斑實驗RHPA酶聯(lián)免疫斑點試驗ELISPOT細胞內(nèi)細胞因子的測定分子生物學方法Southern印跡Northern印跡RT-PCR基因芯片人類白細胞抗原分型檢測技術(shù)血清學分型微量淋巴細胞毒試驗：原理、陽陰性細胞學分型雙向混合淋巴細胞培養(yǎng)

16、；單向混合淋巴細胞培養(yǎng)基因分型限制性片段長度多態(tài)性-聚合酶鏈反應(yīng) PCR-RFLP特異性寡核苷酸探針-聚合酶鏈反應(yīng) PCR-SSOP序列特異性引物-聚合酶鏈反應(yīng) PCR-SSP單鏈構(gòu)象特異性-聚合酶鏈反應(yīng) PCR-SSCP基于基因測序的HLA分型 基因芯片超敏反應(yīng)及其檢驗超敏類型型發(fā)作快、消退快；有明顯的個體和遺傳傾向；不引起嚴重的組織細胞損傷；主要由于IgE的產(chǎn)生和介導(dǎo)過敏性休克、呼吸道過敏、消化道過敏、皮膚過敏型細胞溶解型或細胞毒型；有IgG和IgM等其他介導(dǎo)，然后再補體和吞噬細胞的作用下引起細胞溶解或組織損傷輸血反應(yīng)；新生兒溶血反應(yīng)；自身免疫溶血性貧血；肺-腎炎綜合征；藥物過敏引起的血細

17、胞減少；甲狀腺功能亢進型抗原抗體(IgM、IgG或IgA)形成免疫復(fù)合物IC并沉積于全身多處實驗性局部過敏；人類局部ICD；血清?。患毙悦庖邚?fù)合物性腎小球；系統(tǒng)性紅斑狼瘡；類風濕性關(guān)節(jié)炎型由T細胞與抗原作用后，引起單個核細胞侵潤；遲發(fā)型，屬于細胞免疫應(yīng)答傳染性遲發(fā)型超敏反應(yīng)(結(jié)核病、病毒和某些真菌感染)；接觸性皮炎超敏反應(yīng)免疫學檢驗(皮膚試驗假陽性和假陰性原因*)變應(yīng)原皮膚試驗皮內(nèi)試驗I型；青霉素和破傷風；需稀釋挑刺實驗I型；刺破皮膚不出血，滴加抗原；可以同時檢測多個抗原斑貼試驗型；實驗抗原貼皮膚，敏感度低，假陽性少血清總IgE檢測放射免疫吸；附酶聯(lián)免疫；化學發(fā)光特異性IgE測定放射變應(yīng)原吸附試驗；酶聯(lián)免疫測定；化學發(fā)光免疫分析免疫復(fù)合物檢測補體相關(guān)測定法C1q結(jié)合試驗液相法固相法C1q偏離實驗抗補體實驗?zāi)z固素結(jié)合試驗抗球蛋白測定mRF固相抑制試驗mRF凝膠擴散試驗細胞技術(shù)檢測Raji細胞試驗免疫預(yù)防與計劃免疫1.特異性與非特異性的大條2.滅活疫苗和減毒疫苗的特征比較3.人工被動免疫疫苗的種類4.新型疫苗5.兒童免疫程序兩個沒地方寫HAT培養(yǎng)基選擇作用HAT成分H：次黃嘌呤，和T提供核酸合成的前體A：氨基蝶呤葉酸拮抗物，即阻斷DNA合成主要途徑T：胸腺嘧啶核苷酸，和H提供核酸合成的前體選擇作用由于A的存在，阻斷DNA合成的