葛根芩連袋泡劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

1、    葛根芩連袋泡劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究        【提要】目的探討測(cè)定葛根芩連袋泡劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的方法.方法本實(shí)驗(yàn)采用薄層層析法對(duì)葛根芩連袋泡劑的主要中藥葛根、黃芩及黃連進(jìn)行了定性分析，并通過(guò)熒光淬滅薄層掃描法測(cè)定了君藥葛根中葛根素的含量結(jié)果袋泡劑中葛根素平均含量為0.0776%（g/100g）；加樣提取平均回收率為99.49%，RSD=1.57%；精密度RSD為2.57%；穩(wěn)定性RSD為0.56%；回歸方程：Y=132.500X-58.242，線性范圍是1.0610.60g.

2、結(jié)論該方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可作為葛根芩連袋泡劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法【關(guān)鍵詞】袋泡劑葛根素薄層色譜法(TLC)中號(hào)R 283.6文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)1008-634X(2000)03-0190-03Study on Quality Standard of “Ge Gen Qin Lian” Pocket PreparationLUO JianHAN Xiao-liZENG Hui-fen et al.（Pharmaceutical Research Institute of Guangdong College of Pharmacy,Guangzhou 510224 China）【Abs

3、tract】ObjectiveTo investigate the quality standard method of “Ge Gen Qin Lian”pocket preparation.MethodsThe qualitative analyses of Kudzuvine root,Large-flowered skullcap root and Chinese goldthread of “Ge Gen Qin Lian” pocket preparation were finished.The reseachers analysed them with TLC method. T

4、hen they determined puerarin content of Kudzuvine root by TLC scan.ResultsThe Puerarin content of the pocket was 0.0776%(g/100g);The pick-up recovery was 99.49% and RSD=1.57%;The precision was RSD=2.57% and the stability was RSD=0.56%(within 4h).The regression equation was Y=132.500X-58.242 with cor

5、relation coefficient r=0.9960 and the Linear range was 1.0610.60g.ConclusionsThis method was simple,precision and good repeat. It was a quality standard method of “Ge Gen Qin Lian”pocket preparation.【Key Words】Pocket preparationPuerarinThin layer chromatography葛根芩連袋泡劑是由葛根、黃芩、黃連、甘草等四味中藥材制成，“葛根解表，黃連清里

6、”1，具有解肌、清熱、止瀉止痢之功效2，用于急性胃腸炎、菌莉、對(duì)胃熱口瘡、風(fēng)火上炎之目赤腫痛等癥，亦有良好的效果3該袋泡劑中的君藥葛根系亞科植物的野葛堿或甘葛藤的干燥根4，葛根素是葛根的主要有效成分,本實(shí)驗(yàn)對(duì)袋泡劑中葛根、黃芩、黃連進(jìn)行了薄層定性鑒別，并用薄層掃描法對(duì)葛根素作了定量分析51實(shí)驗(yàn)儀器與試藥1.1儀器島津公司CS-9301PC薄層掃描儀(日本），薄層自動(dòng)鋪板器PBQ-型（重慶南岸新力實(shí)驗(yàn)電器廠），定量毛細(xì)管點(diǎn)樣器（Rrummond Scientific USA），20*20cm大層析缸（95版中國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)層析缸），ZF-I型紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠），H66025T型超聲清洗

7、器（無(wú)錫超聲電子設(shè)備廠）1.2試藥葛根芩連袋泡劑（自制品），各單味中藥材（購(gòu)自廣東藥學(xué)院門診部），葛根對(duì)照藥材，葛根素對(duì)照品，黃芩對(duì)照藥材，黃芩甙對(duì)照品，黃連對(duì)照藥材，鹽酸小檗堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所），羥甲基纖維素鈉（上海化學(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站試劑廠），硅膠GF254（青島海洋化工廠），其它試劑均為分析純2方法與結(jié)果2.1定性分析2.1.1葛根的薄層色譜(TLC)鑒別2.1.1.1供試品溶液及對(duì)照品溶液的制備精密稱取葛根芩連袋泡劑4.0179g，加入95%乙醇30ml，超聲處理30min，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至干，殘?jiān)眉状既芙?、定容?ml,制成供試品溶液稱取葛根對(duì)照藥材粗粉4g，加入

8、甲醇30ml，超聲處理30min,濾過(guò)，濾液濃縮至干，甲醇溶解，定容成5ml，制成葛根陽(yáng)性對(duì)照藥材溶液按處方組成，摸擬工藝制成缺葛根的陰性對(duì)照袋泡劑，稱取該陰性藥粉4g，按供試品溶液制備方法制成葛根陰性對(duì)照溶液另精密稱取葛根素對(duì)照品5mg，用甲醇溶解、定容成5ml，制成葛根素對(duì)照品溶液2.1.1.2TLC層析條件與結(jié)果吸取上述供試品溶液10l，陽(yáng)性對(duì)照藥材溶液5l，陰性對(duì)照藥材溶液5l及葛根素對(duì)照品溶液10l，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254板上，以氯仿-甲醇-醋酸乙酯-水（8.19.4264）展開(kāi)，展距約17cm，取出，自然晾干，UV光下（254nm）檢視，結(jié)果(見(jiàn)1)1葛根的TLC鑒別譜（UV光

9、254nm下）Fig.1TLC identify chart of kudzuvine root(UV254nm)2.1.2黃芩的TLC鑒別2.1.2.1供試品溶液及對(duì)照品溶液的制備按2.1.1.1項(xiàng)方法制成供試品溶液稱取黃芩對(duì)照藥材粗粉1g，加入50%乙醇10ml，置索氏提取器提取至無(wú)色，濃縮蒸干，以甲醇定容成5ml，制成黃芩陽(yáng)性對(duì)照藥材溶液按處方組成，摸擬工藝制成缺黃芩的陰性對(duì)照藥材袋泡劑，稱取該袋泡劑4g，按供試品液制備方法制成黃芩陰性對(duì)照藥材溶液另準(zhǔn)確稱取黃芩甙對(duì)照品1.03mg，加入甲醇溶解、定容成5ml，制成黃芩對(duì)照品溶液2.1.2.2TLC層析條件與結(jié)果吸取上述黃芩的供試品溶液1

10、0l，陽(yáng)性對(duì)照藥材溶液5l，陰性對(duì)照藥材溶液5l及黃芩甙對(duì)照品溶液10l，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以正丁醇-冰醋酸-水（712）為展開(kāi)劑，上行展開(kāi)約18cm,取出,晾干,噴以2%FeCl3乙醇液顯色，熱風(fēng)吹干，可見(jiàn)光下檢視，結(jié)果(見(jiàn)2)2黃芩的TLC鑒別譜（可見(jiàn)光下）Fig.2TLC identify chart of large-flowered skullcap(daylight)2.1.3黃連的TLC鑒別2.1.3.1供試品溶液及對(duì)照品溶液的制備按2.1.1.1項(xiàng)方法制備供試品溶液另取黃連對(duì)照藥材粗粉0.2g，加入甲醇10ml，超聲處理5min，濾過(guò)，濾液濃縮至干，以甲醇定容成5ml，制

11、成黃連陽(yáng)性對(duì)照藥材溶液稱取缺黃連的陰性對(duì)照藥材制劑粗粉4g，按供試品溶液制備方法制得黃連陰性對(duì)照藥材溶液同時(shí)準(zhǔn)確稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品5mg，加入甲醇定容至5ml，即得鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液2.1.3.2TLC層析條件與結(jié)果吸取上述供試品溶液、黃連陽(yáng)性對(duì)照藥材溶液、陰性對(duì)照藥材溶液及鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液各5l，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以苯醋酸乙酯甲醇異丙醇濃氨水（126331）展開(kāi)，展距18cm，取出，晾干，可見(jiàn)光下檢視，結(jié)果(見(jiàn)3)3黃連的TLC鑒別譜（可見(jiàn)光下）Fig.3TLC identify chart of goldthread root(daylight)1.供試品溶液,點(diǎn)樣量5l2.

12、黃連陽(yáng)性對(duì)照藥材液,點(diǎn)樣量5l3.黃連陰性對(duì)照藥材液，點(diǎn)樣量5l4.鹽酸小檗堿對(duì)照品液，點(diǎn)樣量5l2. 2定量分析2.2.1供試品溶液及對(duì)照品溶液的制備精密稱取葛根芩連袋泡劑4.0178g，加入95%乙醇30ml，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液濃縮至干，殘?jiān)约状既芙狻⒍ㄈ葜?ml，制成供試品溶液另精密稱取葛根素對(duì)照品5.30mg，加入甲醇定容成5ml，制得葛根素對(duì)照品溶液2.2.2線性關(guān)系考察精密吸取葛根素對(duì)照品溶液1、2、3、4、5、6、7、8、9、10l，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254板上，按2.1.1項(xiàng)TLC方法展開(kāi)，掃描測(cè)定（掃描波長(zhǎng)s=260nm,R=370nm）,以葛根素含量為橫坐標(biāo)

13、，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=132.500X-58.242，相關(guān)系數(shù)r=0.9960，葛根素在1.0610.06g范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系2.2.3精密度試驗(yàn)在同一硅膠GF254薄層板上分別點(diǎn)8個(gè)5l的葛根素對(duì)照品溶液，展開(kāi)，掃描測(cè)定，結(jié)果葛根素的RSD=2.57%，表明本法精密度良好2.2.4穩(wěn)定性試驗(yàn)在同一硅膠GF254板上點(diǎn)5l的葛根素對(duì)照品液2-4個(gè)點(diǎn)，展開(kāi)，晾干（約15min），選擇其中一點(diǎn)間隔一定時(shí)間掃描測(cè)定，掃描4h，測(cè)得RSD=0.56%，表明在4h內(nèi)葛根素穩(wěn)定性好2.2.5提取回收率的測(cè)定準(zhǔn)確稱取2份相同重量的袋泡劑約4g，其中1份加入葛根素對(duì)照品2.0

14、mg，按上述供試品溶液提取方法制備，甲醇定容至5ml，作為回收率提取液，然后準(zhǔn)確吸取葛根素對(duì)照品溶液2l、10l以及回收率提取液10l，分別交叉點(diǎn)于薄層板上，展開(kāi)，掃描測(cè)定，得平均回收率為99.49%，結(jié)果(見(jiàn)表1)表1葛根素提取回收率測(cè)定結(jié)果（n=4）Tab.1Recovery's determine results of puerarin(n=4)測(cè)定 次數(shù)樣品已知量(mg)葛根素加入量(mg)實(shí)測(cè)總量(mg)回收率(%)(%)SDRSD(%)13.102.05.0999.5423.102.05.14101.6833.102.05.0798.1899.491.561.5743.10

15、2.05.0898.582.2.6樣品含量測(cè)定 準(zhǔn)確吸取葛根素對(duì)照品溶液2l和10l及供試品溶液10l，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠GF254板上，展開(kāi)，掃描測(cè)定，計(jì)算含量，結(jié)果(見(jiàn)表2) 表2樣品中葛根素含量測(cè)定結(jié)果（n=5）Tab.2Puerarin's content determine results of the pocket preparation(n=5)編號(hào)葛根素含量%（g/100g）平均含量%SDRSD(%)10.080220.080130.07550.07760.002353.0240.075650.07683討論 3.1溫度和濕度的影響該實(shí)驗(yàn)溫度對(duì)其影響不甚大，展開(kāi)、掃描

16、結(jié)果基本一致，但受濕度的影響較大，在濕度6070%時(shí)，展開(kāi)斑點(diǎn)圓整、清晰、掃描譜峰形理想， 而濕度在80%以上時(shí)，則斑點(diǎn)擴(kuò)散、不均勻、拖尾，影響掃描，故在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)控制濕度在80%以下，以保證展開(kāi)結(jié)果3.2展開(kāi)劑飽和程度的影響實(shí)驗(yàn)中黃芩、黃連對(duì)薄層板是否預(yù)飽和，展開(kāi)結(jié)果基本一致，沒(méi)什么影響，但在葛根的TLC鑒別及定量分析中，點(diǎn)了樣品液的薄層板則需放入層析缸中預(yù)飽和約2030min，然后再放入展開(kāi)劑中直立上行展開(kāi)，否則出現(xiàn)板易受沖擊、前沿線彎曲不直、斑點(diǎn)模糊、難于分離等現(xiàn)象3.3薄層板的影響實(shí)驗(yàn)使用購(gòu)買的預(yù)制板（青島海洋化工廠生產(chǎn)）、自制的自動(dòng)鋪板器鋪的板以及不用自動(dòng)鋪板器手工鋪的板，這三種板進(jìn)行反復(fù)比較，結(jié)果表明購(gòu)買的預(yù)制板為最佳，重現(xiàn)性最好，但價(jià)格較昂貴，不宜大量使用；自動(dòng)鋪板器鋪的板結(jié)果尚好，符合要求，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，適宜實(shí)驗(yàn)研究使用；但手工鋪板則重現(xiàn)性、斑點(diǎn)圓整性均差，板薄厚不一致，拖尾較嚴(yán)重，影響準(zhǔn)確判定結(jié)果3.4本文建立的葛根、黃芩、黃連的薄層特征鑒別方法，其陰性對(duì)照試驗(yàn)均無(wú)干擾，可作為葛根芩連袋泡劑的定性指標(biāo)而制訂的熒光淬滅薄層掃描法測(cè)定制劑中葛根素的含量，方法簡(jiǎn)便，不需用顯色劑，重現(xiàn)性好，可作為葛根芩連袋泡劑的質(zhì)量控制指標(biāo)之一羅?。◤V東藥學(xué)院藥物研究所廣州 510224）韓曉莉（廣東藥學(xué)院藥物研究所廣州 510224）曾惠芬（廣東藥學(xué)院藥物研究所廣州 5102