抗體檢測知識點抗體檢測方法

1、抗體檢測知識點抗體檢測方法（一）中和反應中和反應不僅測定抗體是否存在，而且測定抗體是否具有免疫保護作用，因而,盡管這種方法復雜費時，影響因素眾多而且不穩(wěn)定，在預防醫(yī)學領域特別是病毒性 疾病中，仍然是不可取代的抗體檢測方法。中和試驗的基本方法是，將待檢物質(zhì)與活的致病微生物混合，感染實驗動物或 敏感的細胞，然后觀察實驗動物是否發(fā)病、死亡，或細胞是否發(fā)生病變。早期中和實驗主要利用疾病的動物模型進行，目前，在病毒性疾病領域，通常 利用培養(yǎng)病毒的細胞進行。在結(jié)果的解釋中應當注意，細胞的中和試驗通常只反應 抗體阻斷病毒進入細胞的能力，這只是病毒致病過程中的一小部分。（二）沉淀反應血清蛋白質(zhì)、細胞裂解液或組

2、織浸液等可溶性抗原與相應抗體結(jié)合出現(xiàn)沉淀物，這類反應稱為沉淀反應。該類反應可檢測到202mg / ml水平的抗體。較常用的檢測方法有：1. 單向免疫擴散將一定量已知抗原混于瓊脂中制成瓊脂板，在適當位置打孔后將抗體加入孔中 擴散，抗原抗體在擴散過程中形成以抗體孔為中心的沉淀環(huán)，可用于檢測血清中的 IgG、IgM、IgA 和補體 C3等的含量。2. 雙向免疫擴散將抗原與抗體分別加于瓊脂凝膠中，二者自由向四周擴散，在相遇處形成沉淀 線?？捎糜诳贵w的定性、定量檢測。（三）凝集反應細菌、紅細胞等顆粒性抗原與相應抗體結(jié)合后形成凝集團塊，這一類反應稱為 凝集反應，該類反應可檢測到1 ug/ml 。1 直接凝

3、集將細菌或紅細胞與相應的抗體直接反應，出現(xiàn)細菌或紅細胞凝集現(xiàn)象。檢測方 法有兩種：一是玻片凝集試驗，用于定性測抗原，多用于快速診斷；二是試管凝集 試驗，在試管種系列稀釋待檢血清，加入已知顆?？乖ㄋ谰蚧罹嘤盟谰?， 進行的血清反應，用于定量檢測抗體。溫箱中放24小時后取出反應管在室溫放 2個小時再判斷為宜，判定凝集滴度以凝集程度為+而定。2 間接凝集將可溶性抗原包被在紅細胞或乳膠顆粒表明，與相應抗體反應出現(xiàn)顆粒凝集的 現(xiàn)象。如用丫球蛋白包被的乳膠顆粒， 檢測病人血清中的一種抗 丫球蛋白的抗體（類 風濕因子）。（四）補體參加的反應利用抗體與紅細胞上的抗原結(jié)合，激活反應體系中的補體， 導致紅

4、細胞的溶解，用溶血現(xiàn)象作為指示系統(tǒng)幫助結(jié)果判定。常用的方法有補體結(jié)合試驗和溶血空斑試 驗。（五）用標記抗原進行的抗原抗體反應利用熒光素、酶或放射性核素等標記物標記抗原或抗體，進行的抗原抗體反應。靈敏度高、快速，可定性或定量，甚至定位等優(yōu)點。1 .免疫熒光將已知細菌、感染病毒的細胞等顆?？乖裙潭ㄓ谳d玻片，加待檢血清反應后，再加熒光素標記的抗抗體，置熒光顯微鏡下觀察判定，用于檢測抗體。2 .酶免疫測定是用酶標記的抗體進行的抗原抗體反應?？捎媚繙y定性，也可用酶標測定儀測、/.定光密度（OD ）值以反應抗體的含量，敏感度可達ng /ml甚至標記的酶有辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等。常用的方法有酶聯(lián)免疫吸附試驗（ 采用雙抗體夾心法或間接法檢測特異抗體。3 放射免疫測定法用放射性的核素（125 I和131 I）標記抗原，檢測抗體，靈敏度達4 .免疫印跡法將凝膠電泳與固相免疫結(jié)合，把電泳區(qū)分的蛋白質(zhì)抗原轉(zhuǎn)移置 膜pg