倉鼠胰腺癌原位模型的建立及生物學(xué)特性(1)

1、    倉鼠胰腺癌原位模型的建立及生物學(xué)特性(1)    】目的： 建立倉鼠胰腺癌原位模型，并研究其生物學(xué)特性. 方法： 將倉鼠胰腺癌細(xì)胞株pGHAM1接種于倉鼠胰腺背膜下，分別于第7, 14, 21, 28日各剖殺10只，肉眼及光學(xué)顯微鏡下觀察原位腫瘤的生長、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及肝轉(zhuǎn)移，同時觀測腹水量. 結(jié)果： 倉鼠胰腺癌原位模型成活率達(dá)95%，生長迅速. 接種后第7， 14， 21， 28日原位腫瘤大小分別為（16±6），（173±44），（369±87），（974±226） m

2、m3. 第21日，毛細(xì)淋巴管內(nèi)可見癌細(xì)胞團(tuán)，部分淋巴結(jié)有癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移，可見少量淡血性腹水. 第28日，淋巴結(jié)陽性率進(jìn)一步增加，可見血性腹水，量明顯增多；部分倉鼠發(fā)生了肝轉(zhuǎn)移. 結(jié)論： 倉鼠胰腺癌細(xì)胞株 pGHAM1原位模型建立方法簡便，易復(fù)制，而且腫瘤保持了胰腺癌的生物學(xué)特性，是理想的胰腺癌研究模型.【關(guān)鍵詞】 胰腺腫瘤；疾病模型，動物；金倉鼠0引言胰腺癌是一種惡性程度高、預(yù)后極差的腫瘤1. 其原因是胰腺癌發(fā)病隱匿，很難早期診斷，而即便早期診斷，部分患者也已經(jīng)發(fā)生肝臟轉(zhuǎn)移、腹膜播散或者局部復(fù)發(fā)2. 基于為胰腺癌研究提供一個腫瘤的試驗系統(tǒng)目的，已有大量胰腺癌動物模型建立，但很多是裸鼠模型. 在腫瘤

3、研究方面，由于裸鼠沒有正常的免疫系統(tǒng)，其發(fā)病機制可能與人有所不同3. 而敘利亞金色倉鼠在形態(tài)學(xué)、生物學(xué)以及免疫學(xué)等方面與人相似. 我們擬建立倉鼠胰腺癌原位模型，并研究其生物學(xué)特性.1材料和方法1.1材料雌性敘利亞金黃倉鼠40只，45周齡，純近交系，體質(zhì)量4050 g，購自中國蘭州生物制品研究所. 飼養(yǎng)條件：溫度（22±3），相對濕度為（40±5）%，光/暗周期為12 h/12 h，按照標(biāo)準(zhǔn)食物喂養(yǎng)，自由飲水；DMEM培養(yǎng)液為Gibcol BRL產(chǎn)品；胎牛血清購自杭州四季青生物工程公司.1.2方法1.2.1倉鼠胰腺癌細(xì)胞株pGHAM1的建立用甲硝二胺誘導(dǎo)敘利亞金黃色倉鼠胰腺導(dǎo)

4、管癌4. 腫瘤組織用剪刀剪成1 mm×1 mm×1 mm并用套針植入倉鼠肩胛區(qū)皮下，68 wk后處死動物，切除腫瘤自治后反復(fù)繼代種植，第8次種植后切除腫瘤組織，用0.5 g/L的胰蛋白酶消化，37下EDTA處理10 min, 1000 r/min離心10 min，收集細(xì)胞，于含100 mL/L胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)，并加 100 U/L青霉素鏈霉素，100 mg/L卡那霉素以及100 mg/L兩性霉素B，反復(fù)傳代培養(yǎng)60代，建立pGHAM1細(xì)胞株.1.2.2倉鼠胰腺癌原位模型的建立PGHAM1細(xì)胞株于DMEM培養(yǎng)液中穩(wěn)定傳代56代. 觀察細(xì)胞增殖旺盛時終止培養(yǎng)，用無

5、血清DMEM培養(yǎng)液制備細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度至1×1010/L，備用. 以60 mg/kg腹腔注射戊巴比妥鈉，取腹部正中切口，牽出胰腺，于脾門較寬大處胰腺背膜下注射1×106/L PGHAM1細(xì)胞懸液后常規(guī)關(guān)腹. 于術(shù)后7, 14, 21, 28 d分別剖殺10只. 切除原位腫瘤，用測徑器測量腫瘤大小，按公式V=/6×長×寬×高計算腫瘤體積，同時觀察腹水的質(zhì)與量、有無淋巴結(jié)、大網(wǎng)膜、壁層腹膜及肝臟轉(zhuǎn)移.1.2.3病理學(xué)檢查切除大網(wǎng)膜，平鋪在蠟片上，“卷席法”處理大網(wǎng)膜標(biāo)本；40/L甲醛固定原位腫瘤、壁層腹膜、肝臟及可疑淋巴結(jié)，石蠟包埋切片，HE

6、染色，光學(xué)顯微鏡觀察.    2結(jié)果2.1原位腫瘤及轉(zhuǎn)移情況接種后第7日，可見胰內(nèi)原發(fā)灶大?。?6±6） mm3,侵至背膜，10只倉鼠中有5只管狀斑處有癌細(xì)胞團(tuán)；壁腹膜鏡檢顯示間皮細(xì)胞部分正常（Fig 1A），而部分間隙增寬；肝臟及淋巴結(jié)未見轉(zhuǎn)移，無腹水. 第14日，胰腺內(nèi)原發(fā)灶大小（173±44） mm3,侵至背膜；10只倉鼠中9只管狀斑處可見癌細(xì)胞團(tuán)，且較原來增大；壁腹膜間皮細(xì)胞開始增生脫落（Fig 1B）；未檢測到淋巴結(jié)和肝臟轉(zhuǎn)移，未見腹水. 第21日，腫瘤進(jìn)一步增大至（369±87） mm3，侵至背膜；有少量淡血性腹

7、水；10只倉鼠管狀斑均可見癌細(xì)胞團(tuán)，同時毛細(xì)淋巴管中亦可見癌細(xì)胞團(tuán)；壁腹膜間皮細(xì)胞大片脫落；10只倉鼠有4只檢測到淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；肝臟未見轉(zhuǎn)移. 第28日，原位腫瘤大小為（974±226） mm3，與周圍臟器或組織粘連（Fig 1C）；腹水呈血性，量較大；10只倉鼠有1只死亡，8只檢測到淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；5只肝臟表面出現(xiàn)大小較一致的多發(fā)轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié).2.2病理學(xué)特征原位移植瘤呈圓形或橢圓形，表面凹凸不平，外觀呈粉紅色（Fig 1C），切面呈灰白色，部分中心有壞死，腫瘤組織質(zhì)地較脆；鏡下可見腫瘤細(xì)胞呈多角形、梭形或不規(guī)則形，胞質(zhì)淡染，胞核大而圓，異形性明顯，核分裂相多見，腫瘤細(xì)胞結(jié)節(jié)狀生長，排列成實

8、性巢狀，內(nèi)有小的血竇，無腺腔樣結(jié)構(gòu)，與低分化胰腺腺癌一致（Fig 1D）. 轉(zhuǎn)移肝臟表面可見多發(fā)結(jié)節(jié)，部分已經(jīng)發(fā)生融合（Fig 1E）；鏡下可見肝小葉結(jié)構(gòu)遭破壞，取而代之的為癌細(xì)胞團(tuán)，癌細(xì)胞特征與胰腺原位腫瘤細(xì)胞特征一致（Fig 1F）.            【關(guān)鍵詞】,胰腺腫瘤Establishment of orthotopic model of hamster pancreatic cancer and its biologic cha  

9、0;      本篇論文是由3COME文檔頻道的網(wǎng)友為您在網(wǎng)絡(luò)上收集整理餅投稿至本站的，論文版權(quán)屬原作者，請不用于商業(yè)用途或者抄襲，僅供參考學(xué)習(xí)之用，否者后果自負(fù)，如果此文侵犯您的合法權(quán)益，請聯(lián)系我們。3討論近年來，胰腺癌的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈明顯上升趨勢5. 同時，也是我國人口死亡的十大惡性腫瘤之一. 由于其惡性度高，發(fā)病隱匿，易早期轉(zhuǎn)移，加上對放化療不敏感等特性，使得即使成功地進(jìn)行了手術(shù)切除，術(shù)后5 a生存率也不到20%6，7. 裸鼠是最多用來建立腫瘤模型的動物，由于裸鼠缺乏胸腺，不具備T細(xì)胞免疫力，故對異種移植不產(chǎn)生排斥反應(yīng)，成活率高，容

10、易建立胰腺癌動物模型8. 但是，由于其缺乏免疫功能，使得裸鼠胰腺癌模型的發(fā)病機制可能與人有所不同. 除此之外，許多裸鼠胰腺癌模型是將癌細(xì)胞接種在皮下建立的，它的優(yōu)點是便于觀察，但是這樣做卻改變了解剖與生理條件. 由于裸鼠胰腺癌模型存在以上不足，因此它并不是最理想的研究模型.敘利亞金色倉鼠在形態(tài)學(xué)、生物學(xué)以及免疫學(xué)等方面與人有相似之處3. 例如，人大網(wǎng)膜上廣泛分布著管狀斑，網(wǎng)膜上的管狀斑是腹腔淋巴系統(tǒng)的末梢吸收裝置，與毛細(xì)淋巴管相連，在生理情況下，其主功能是吸收腹水和腹水中的有形成分9. 而當(dāng)腹水中有癌細(xì)胞時，可能就會被網(wǎng)膜管狀斑吸收，導(dǎo)致腫瘤的早期淋巴轉(zhuǎn)移和隨后的血行轉(zhuǎn)移. 倉鼠網(wǎng)膜上的管狀斑

11、與人的大網(wǎng)膜上的管狀斑解剖結(jié)構(gòu)相似.我們利用高惡性度的倉鼠胰腺癌細(xì)胞株建立的胰腺癌原位模型，經(jīng)過35 d潛伏期后逐漸增大；第21日，鏡下可檢測到淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；第28日，部分肝臟表面有大小較一致的轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié). 但是在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之前，首先檢測到的是網(wǎng)膜管狀斑有癌細(xì)胞團(tuán)，隨后毛細(xì)淋巴管中可檢測到癌細(xì)胞團(tuán)，最后才檢測到淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移. 這一現(xiàn)象說明網(wǎng)膜管狀斑與胰腺癌的轉(zhuǎn)移關(guān)系密切. 該模型的特點是潛伏期短、生長迅速、轉(zhuǎn)移早且轉(zhuǎn)移率高，同時還保持了胰腺癌的生理和解剖特性. 因此，倉鼠胰腺癌原位模型是體內(nèi)研究的理想模型.【參考文獻(xiàn)】1 Alexakis N, Halloran C, Raraty M, et al

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