白細(xì)胞介素13在原發(fā)性腎小球腎炎腎組織中的表達(dá)及意義

1、白細(xì)胞介素13在原發(fā)性腎小球腎炎腎組織中的表達(dá)及意義         【關(guān)鍵詞】  原發(fā)性腎小球腎炎   作者簡介：尹愛萍(1956)，女(漢族)，副主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，主要從事腎臟病及血液凈化的臨床及科研. 摘要：目的  探討白細(xì)胞介素13(IL13)在幾種常見病理類型的原發(fā)性腎小球腎炎(PGN)患者腎組織中的表達(dá)及其意義。方法  采用免疫組織化學(xué)法檢測81例PGN患者及10例對照組腎組織中IL13的表達(dá)情況，并與各項臨床指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果  P

2、GN患者腎組織中IL13表達(dá)均較對照組明顯增強(qiáng)；IL13在PGN患者腎組織中的表達(dá)與血尿素氮、肌酐水平、24h尿蛋白定量以及腎小球新月體形成呈正相關(guān)(r分別為0.325，0.275，0.291，0.231)，而與腎小球?yàn)V過率(GFR)、血清白蛋白水平呈負(fù)相關(guān)(r分別為0.448，-0.296)。結(jié)論  IL13參與PGN患者腎組織的炎癥反應(yīng)及腎小球新月體的形成過程，并與腎功能進(jìn)展及尿蛋白嚴(yán)重程度密切相關(guān)。關(guān)鍵詞：白細(xì)胞介素13；原發(fā)性腎小球腎炎；免疫組織化學(xué)ABSTRACT: Objective  To study the expression of interleukin

3、13(IL13) in renal tissues of several common pathologic types of primary glomerulonephritis (PGN). Methods  Immunohistochemistry was used to examine the expression of IL13 in renal tissues of 81 patients with PGN and 10 normal control cases. The correlation analysis was performed with biochemica

4、l and pathological indicators. Results  Extensive expression of IL13 was found in renal tissues of patients with PGN. The expression of IL13 in renal tissues was positively correlated with the concentration of blood urea nitrogen, serum creatinine, the quantitation of urine protein and the cres

5、cent formation in glomerular (r=0.325, 0.275, 0.291, 0.231, respectively). It was negatively correlated with glomerular filtration rate and serum albumin (r=-0.448, -0.296, respectively). Conclusion  IL13 participates in the process of inflammation reaction and crescent formation in the renal t

6、issues in patients with PGN, and is correlated with the progression of renal function and the level of urea protein.KEY WORDS: interleukin13; primary glomerulonephritis; immunohistochemistry白細(xì)胞介素13(interleukin13, IL13)是主要由活化的Th2細(xì)胞分泌的具有免疫抑制作用的細(xì)胞因子，具有多種生物學(xué)效應(yīng)，在機(jī)體免疫應(yīng)答中的主要效應(yīng)是對單核/巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的炎癥因子有抑制作用。由于IL13具有

7、強(qiáng)大的抗炎特性，因此人們開始重視并推測其可能在腎小球腎炎的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要作用。本研究通過檢測IL13在幾種常見病理類型的原發(fā)性腎小球腎炎(primary glomerulonephritis, PGN)腎組織中的表達(dá)情況，探討其與PGN病理特征之間的關(guān)系。1  材料與方法1.1  一般資料  PGN患者81例，由我校病理教研室于2004年6月至12月收集腎組織活檢標(biāo)本并進(jìn)行病理診斷。其中男性47例，女性34例，年齡9-72歲，平均(35.63±15.82)歲。   PGN診斷依據(jù)實(shí)用內(nèi)科學(xué)第10版PGN的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并按WHO

8、(1982年)制定的腎小球病病理學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理診斷。其中局灶性節(jié)段性腎小球硬化(FSGS)9例；膜性腎病(MN)12例；系膜增生性腎小球腎炎(MsPGN)47例；硬化性腎小球腎炎(SGN)13例。詳細(xì)收集全部患者的腎功、肝功、24h尿蛋白定量、血常規(guī)、尿常規(guī)資料以及糖皮質(zhì)激素使用情況，并依據(jù)MDRD研究方程，在線計算腎小球?yàn)V過率(glomerular filtration rate, GFR)。正常對照組10例，其中男性6例，女性4例，年齡19-65歲，平均(42.60±18.54)歲，與病例組年齡相匹配。對照組中7例為因腎癌切除的遠(yuǎn)離腫瘤部位的腎組織，3例為因腦死亡的尸體腎組織

9、。對照組腎組織取材時間均在離體后12h內(nèi)，經(jīng)光鏡及免疫熒光檢查均未見異常。1.2  方法1.2.1  免疫組織化學(xué)染色  新鮮腎活檢組織以O(shè)CT包埋，在恒冷切片機(jī)內(nèi)切成4m厚的冰凍切片。鼠抗人IL13抗體為Biolegend公司產(chǎn)品，購自深圳晶美；即用型第二代免疫組化ElivisionTM plus廣譜試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，按說明書進(jìn)行操作；顯色劑為DAB。每次染色均以PBS液代替一抗及不加二抗分別作為陰性對照。PGN組及對照組腎組織均行光鏡(HE、PAS及Masson染色)及免疫熒光(IgA, IgG, IgM, C3, Fb)檢查，綜合進(jìn)行病

10、理診斷。1.2.2  陽性結(jié)果判定  腎小球及腎小管間質(zhì)區(qū)域見到淡黃色或棕黃色染色為陽性。1.2.3  半定量判定  按著色細(xì)胞面積占整個組織切片的面積計算，10%為0，10%-25%為1，25%-50%為2，50%為3。1.2.4  病理評分標(biāo)準(zhǔn)  腎小球硬化：硬化腎小球數(shù)30%評2分，10%-30%評1分，10%評0分；新月體形成：50%腎小球有新月體形成評2分，50%但至少有一個新月體形成評1分，無新月體記評0分；間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤程度：無炎細(xì)胞浸潤或輕度浸潤范圍10%評0分，浸潤范圍10%-50%評1分，浸潤范圍50%評2分；間質(zhì)

11、纖維化：有間質(zhì)纖維化記1分，無間質(zhì)纖維化記0分；腎小管萎縮：無萎縮或灶性輕度萎縮記0分，灶性或大片灶性中、重度萎縮記1分。1.3  統(tǒng)計學(xué)處理  采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。數(shù)據(jù)以(±s)表示，兩均數(shù)間的比較采用t檢驗(yàn)，多組均數(shù)間比較采用方差分析(ANOVA)，兩變量之間的相互關(guān)系采用Pearson相關(guān)分析。2  結(jié)   果2.1  兩組IL13的表達(dá)情況  正常對照組腎組織腎小球無IL13表達(dá)，腎小管間質(zhì)區(qū)有極少量的表達(dá)(圖1A)；PGN組腎組織IL13的表達(dá)主要位于腎小管間質(zhì)區(qū)域(圖1B)，在腎

12、小球系膜區(qū)域及壁層上皮細(xì)胞也可以見到明顯表達(dá)(圖1C)。圖1  IL13在正常對照組和PGN組腎組織中的表達(dá)情況（略）2.2  兩組臨床指標(biāo)的比較  PGN組尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、以及24h尿蛋白定量(UTP)均明顯高于對照組，而血白蛋白(ALB)則明顯低于對照組(表1)。表1  兩組臨床生化指標(biāo)結(jié)果（略）2.3  PGN各病理類型組腎組織中IL13表達(dá)比較  與對照組相比，腎組織IL13表達(dá)在FSGS，MN，MsPGN及SGN患者均顯著增加，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；腎組織IL13表達(dá)在PGN各病理類型組間相比均無

13、明顯差別(P0.05)。2.4  IL13表達(dá)與臨床生化指標(biāo)的相關(guān)性  PGN患者腎組織IL13表達(dá)與BUN、Scr、UTP及腎小球新月體形成呈正相關(guān)(r分別為0.325，0.275，0.291，0.231)，與GFR、ALB呈負(fù)相關(guān)(r分別為-0.448,-0.296)，與腎小球硬化數(shù)、間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤、間質(zhì)纖維化及腎小管萎縮無關(guān)(P0.05)。         3  討   論IL13除主要由活化的Th2細(xì)胞分泌外，活化的單核細(xì)胞、CD8+細(xì)胞、B細(xì)胞等也可以分泌

14、。IL13 mRNA主要表達(dá)于活化的Th2細(xì)胞與單核細(xì)胞。本研究結(jié)果顯示，IL13在正常對照組腎組織的腎小球無表達(dá)，而在腎小管間質(zhì)區(qū)有極少量的表達(dá)；在PGN患者腎組織中的表達(dá)主要位于腎小管間質(zhì)區(qū)域，在腎小球系膜區(qū)域和壁層上皮細(xì)胞也可以見到。統(tǒng)計結(jié)果顯示，與對照組相比，IL13表達(dá)在FSGS，MN，MsPGN，SGN患者均增加，但在PGN個病理類型組間的比較并無統(tǒng)計學(xué)意義。表明IL13可能是正常人腎組織內(nèi)的一種生理性防御機(jī)制, 參與腎小球腎炎患者腎組織的炎癥反應(yīng)過程。腎小球腎炎的發(fā)展和預(yù)后不僅與腎小球本身的損害有關(guān)，而且與腎小管間質(zhì)病變的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。腎小管間質(zhì)病變對腎功能的影響正受到越來越

15、多的重視?，F(xiàn)在的觀點(diǎn)認(rèn)為，決定腎小球腎炎轉(zhuǎn)歸的因素最重要的是間質(zhì)病變，而不單純是腎小球病變。腎皮質(zhì)中間質(zhì)的空間約占7%-9%，而內(nèi)髓質(zhì)則多達(dá)30%-40%，腎小球所占的空間只是整個腎臟的5%，可以想象腎小管間質(zhì)對腎功能影響之大。因此，并發(fā)于腎小球腎炎的間質(zhì)炎癥對于長期腎功能來說是更為重要的病變。單核巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞是腎小管間質(zhì)浸潤的主要炎癥細(xì)胞，能釋放大量的促炎細(xì)胞因子、趨化因子及活性氮如NO，造成腎小管間質(zhì)的持續(xù)性損傷和腎小球系膜細(xì)胞增殖。同時，單核巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞在各種炎癥介質(zhì)的刺激下被活化，使IL13分泌增多。作為腎臟局部的自我防御機(jī)制，IL13分泌的增加在一定范圍內(nèi)可減少已增加

16、的促炎細(xì)胞因子對腎臟的損害作用，同時抑制炎癥的擴(kuò)散，促炎與抗炎的平衡決定腎小球腎炎向硬化或好轉(zhuǎn)的方向發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，PGN患者腎組織IL13表達(dá)與血BUN、Scr水平呈正相關(guān)，而與GFR呈負(fù)相關(guān)，提示PGN患者腎組織IL13表達(dá)與腎功能進(jìn)展有關(guān)，推測IL13可能抑制腎小球腎炎的發(fā)生、發(fā)展。有研究表明，腎小球所形成的細(xì)胞性新月體中存在大量的單核巨噬細(xì)胞浸潤。目前認(rèn)為，積聚在Bowmans囊壁并且可能構(gòu)成新月體的細(xì)胞成分有單核細(xì)胞、上皮細(xì)胞、纖維母樣細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞。除上皮細(xì)胞外，這些細(xì)胞主要有兩種來源：一是來源于腎小球毛細(xì)血管病變，包括毛細(xì)血管襻壞死、外周血單核巨噬細(xì)胞由血管內(nèi)向Bowma

17、ns囊腔遷移；二是可能起源于Bowmans囊壁的病變，包括Bowmans囊壁的斷裂、球周或間質(zhì)炎細(xì)胞和纖維母樣細(xì)胞浸入Bowmans囊腔。后者是新月體纖維化過程的重要步驟，也是新月體病變成為不可逆損害的標(biāo)志。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PGN患者腎組織IL13的表達(dá)在Bowmans囊壁比較明顯，并與腎小球新月體形成呈正相關(guān)，且具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義。目前還沒有見到類似的報道。我們推測IL13參與腎小球新月體的形成過程，但在此過程中是抑制新月體的形成還是促進(jìn)新月體的形成，目前尚不清楚。正如前所述，IL13由活化的單核巨噬細(xì)胞分泌，具有抑制炎癥的作用，因此推測IL13能夠抑制腎小球新月體的形成，從而延緩腎功進(jìn)展

18、。   本研究結(jié)果沒有顯示出PGN患者腎組織IL13表達(dá)與腎小球硬化數(shù)、間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤、間質(zhì)纖維化及腎小管萎縮之間有相關(guān)性，這一點(diǎn)與張肇、劉海燕等的研究結(jié)果不一致。這可能是對腎小管間質(zhì)病變的量化標(biāo)準(zhǔn)不同所致。由于目前對腎小管間質(zhì)病理改變的半定量積分還沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，因此，我們期待此標(biāo)準(zhǔn)的早日統(tǒng)一，以便應(yīng)用于今后的科學(xué)研究中。張肇等研究發(fā)現(xiàn)，腎病綜合征患者IL13血漿水平與蛋白尿和血尿程度呈負(fù)相關(guān)，且蛋白尿伴肉眼血尿的腎病綜合征患者IL13血漿水平較單純蛋白尿組明顯降低。同樣的研究發(fā)現(xiàn)，患者血清IL13水平與24h尿蛋白排泄量呈負(fù)相關(guān)。但關(guān)于腎組織IL13表達(dá)與尿蛋白之間的相關(guān)性研究較少。由于尿蛋白程度不僅與腎小球病變有關(guān)，同時還與腎小管間質(zhì)病變密切相關(guān)，腎小管間質(zhì)病變可導(dǎo)致腎小管重吸收及排泌功能的紊亂,從而使尿蛋白增多，由此推測腎組織中IL13的表達(dá)也可能與尿蛋白的排泄有關(guān)。而本研究結(jié)果顯示PGN患者腎組織中IL13水平與24h尿蛋白定量呈正相關(guān)，與血清白蛋白水平呈負(fù)相關(guān)，證明了這一點(diǎn)。慢性炎癥在腎小球腎炎的發(fā)生、發(fā)展過程中起著不可忽視的作用，抗炎因子參與其中，因此，我們希望通過對抗炎因子的研究為抑制腎小球腎炎的發(fā)生、發(fā)展提供一條新的思路。&