活血熄風方對局灶性腦缺血大鼠內(nèi)皮素1和一氧化氮含量的影響

1、活血熄風方對局灶性腦缺血大鼠內(nèi)皮素1和一氧化氮含量的影響         11-05-04 14:57:00     編輯：studa20               作者：高紅莉,劉昭純,萬文菊,曲曉蘭,段瑞,蘇雪慧【摘要】  目的 觀察活血熄風方對局灶性腦缺血模型大鼠血液和腦組織中內(nèi)皮素1(ET-1)和一氧化氮(NO)含量的

2、影響,探討其腦保護的作用機制。方法 雄性Wistar大鼠40只隨機分為5組：假手術組、模型組及活血熄風方高、中、低劑量組,每組8只。采用光化學法建立局灶性腦缺血大鼠模型,造模前7 d灌胃給藥,活血熄風方高、中、低劑量組分別給予活血熄風方20、10、5 g/(kg·d),假手術組和模型組給予等體積蒸餾水灌胃,造模后24 h分別取血及腦組織,放射免疫法測定模型大鼠血漿及腦組織中ET-1含量,分光光度法測定血清及腦組織中NO的含量。結果 活血熄風方能降低模型大鼠血漿及腦組織中ET-1含量,降低腦組織中NO含量,升高血清中NO含量,與模型組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05或P0.01)。結

3、論 活血熄風方對局灶性腦缺血模型大鼠的保護作用可能與其降低血漿及腦組織中ET-1含量,降低腦組織中NO含量,升高血清NO含量,從而調(diào)節(jié)ET-1/NO比值有關。 【關鍵詞】  活血熄風方；內(nèi)皮素1 ；一氧化氮；局灶性腦缺血；大鼠    Abstract：Objective To observe the effects of Huoxue Xifeng Decoction (HXD) on endothelin-1 (ET-1) and nitric oxide (NO) levels in the blood and brain tissue of foc

4、al cerebral infarction (FCI) rats. Methods Forty male Wistar rats were randomized into 5 groups：sham-operation, FCI model and HXD-high, HXD-middle, HXD-low dose groups, with 8 rats in each group. The model of FCI rats was established by photo-chemistry method, and intragastric administration were co

5、ntinue 7 days before operation. HXD-high, HXD-middle, HXD-low dose groups were given HXD 20, 10, 5 g/(kg·d) respectively, and other groups were given the same volume distilled water. Blood and brain tissue samples were gotten 24 h after operation, and radio-immunity method was used to measure E

6、T-1 level, spectrophotometric method was used to measure NO level. Results Compared with FCI model group, HXD decreased ET-1 level in plasma and brain tissue after infarction, and decreased NO level in the brain tissue, increased NO level in serum (P0.05 or P0.01). Conclusion HXD has a marked protec

7、tive effect on FCI rats, which may be related to that HXD can decrease ET-1 levels in the plasma and brain tissue, decrease NO level in the brain tissue, increase NO level in serum and regulate the ratio of ET-1/NO.    Key words：Huoxue Xifeng Decoction；ET-1；NO；focal cerebral infarctio

8、n；rat     大量的臨床和實驗研究證明,一氧化氮(NO)與內(nèi)皮素(ET)參與多種腦血管病的病理生理過程,尤其與缺血性腦血管疾病的關系更為密切。NO和ET是兩種具有代表性的內(nèi)皮衍生因子,它們均能通過血管內(nèi)皮細胞、神經(jīng)細胞產(chǎn)生并釋放,在急性腦缺血時發(fā)揮其重要的生物活性。內(nèi)源性ET/NO失衡可加重大腦局部缺血的神經(jīng)元損傷。    活血熄風方是在“瘀血生風”假說1基礎上提出的治療中風的新組方。全方以活血化瘀為主,通過活血化瘀以求逐瘀熄風,經(jīng)臨床驗證療效滿意。已有實驗表明,活血熄風方具有腦保護作用2。本實驗主要探討局灶性腦缺血大

9、鼠血液和腦組織中ET-1、NO含量變化以及活血熄風方對其的影響,以探求其腦保護作用的機制。1  材料與方法1.1  藥物與試劑    玫瑰紅(Rose Bengal),分子量為1 017.60,購自美國Sigma公司。取玫瑰紅溶于0.9%氯化鈉溶液中,濃度為5.0%,經(jīng)0.45 m濾膜過濾后遮光低溫保存?zhèn)溆?。ET試劑盒(批號20071130)、抑肽酶、EDTA二鈉均購自北京東亞免疫技術研究所。NO試劑盒、考馬斯亮藍購自南京建成生物工程研究所,批號20070611?；钛L方由當歸、紅花、川芎、水蛭等藥物組成,蒸餾水浸泡1 h,水煎2次,每次30

10、 min,兩次煎液混勻,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀分別濃縮至2、1、0.5 g/mL,4 保存?zhèn)溆谩?.2  動物分組與給藥    清潔級健康雄性Wistar大鼠40只,體重200250 g,山東魯抗醫(yī)藥有限公司提供合格證號：SCXK(魯)20050017。隨機分為5組：假手術組(A組)、模型組(B組)及活血熄風方高(C組)、中(D組)、低(E組)劑量組,每組8只。各組均給予手術造模,A組股靜脈注射生理鹽水,其余操作同B組。各組造模前7 d灌胃給藥,C、D、E組分別給予活血熄風方20、10、5 g/(kg·d), A和B組給予等體積蒸餾水灌胃。每日1次,末次給

11、藥1 h后造模。1.3  儀器    冷光源,徐州恒發(fā)有限公司研制,型號為LG-150,金屬鹵化燈(150 W,24 V)為發(fā)光光源,濾去全部紫外線與紅外線,投射出單一綠色光束,波長(560±30)nm,光導纖維輸出口至照射區(qū)距離為1 mm,光束投射中心直徑為3 mm,光照強度為5.6×105 cd/m2,照射中心最高溫度為27 。立體定位儀,購自美國Stoelting公司。智能放免測量儀,SN-695B型,購自上海原子核研究所日環(huán)儀器一廠。紫外-可見分光光度計,購自北京普析通用儀器有限責任公司。電子分析天平AEG-220型,購自日本

12、島津公司。低溫高速離心機,型號Sigma3k30,購自德國Sigma公司。1.4  造模    采用Watson等3的方法建立光化學法誘導局灶性腦缺血大鼠模型。室溫25 條件下,雄性Wistar大鼠用10%水合氯醛按0.35 g/kg體重腹腔注射麻醉,立體定位儀固定大鼠頭部,常規(guī)消毒后,沿頭正中切口分離至暴露完整的顱骨。以矢狀縫右側(cè)3 mm、冠狀縫后3 mm為中心,用牙科平鉆鉆開直徑約6 mm骨窗,去除顱骨表層骨板,保留下層骨板及硬腦膜,經(jīng)股靜脈緩慢注入5%玫瑰紅80 mg/kg體重,時間為1 min。注射結束5 min后用冷光源照射骨窗20 min。光

13、照期間監(jiān)測心率及呼吸頻率。全過程中大鼠生命體征穩(wěn)定,平均心率(261±42)次/min,平均呼吸(68±24)次/min,無缺氧征象,肛溫36.837.2 ,照射局部顱骨表面溫度38.038.8 。1.5  觀測指標與方法    各組大鼠造模后24 h,水合氯醛(0.35 mg/kg)腹腔注射麻醉,腹主動脈采血4 mL,其中2 mL注入含7.5%EDTA二鈉30 L和抑肽酶40 L的離心管中,混勻,4 、3 000 r/min離心10 min,分離血漿,-70 保存?zhèn)溆么郎yET-1含量。其他2 mL血注入離心管中待凝固后,3 000 r/min離心10 min,分離血清,-70 保存?zhèn)溆?待測NO含量。    大鼠采血后,迅速斷頭,冰浴中取腦,取光照側(cè)半腦,去掉嗅球、小腦和低位腦干等,取大腦皮層,吸去血跡,用電子分析天平稱重,盡快加入預冷的生理鹽水中碾磨,制成10%的組織勻漿,4 、3 000 r/min離心15 min,取上清液-20 保存?zhèn)溆谩?#160