紫外-可見吸收光譜法定性定量測定食用合成色素

1、紫外-可見吸收光譜法定性定量測定食用合成色素1實(shí)驗(yàn)部分1.1主要試劑及儀器紫外-可見分光光度計色素標(biāo)準(zhǔn)：胭脂紅、莧菜紅、檸檬黃、日落黃和亮蘭均為國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(GBW，由國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心生產(chǎn)、提供。標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱取各色素標(biāo)準(zhǔn)50mg，用pH=6的水溶解并定容至50ml。此溶液每毫升含色素1mg，作儲備液。用時取儲備液以水稀釋至每毫升含色素0.1mg，作標(biāo)準(zhǔn)工作液，亮蘭進(jìn)一步稀釋至每毫升含色素0.01mg。其它試劑同國標(biāo)法。1.2實(shí)驗(yàn)方法取標(biāo)準(zhǔn)溶液置于lcm石英比色皿中，以水為參比，于波長700nm190mn之間連續(xù)進(jìn)行吸收掃描。測量工作條件如下：測量方式：ABSI吸收度(峰高。掃描范圍：7

2、00nm190mm。(峰高記錄范圍：0-3.99A。掃描速度：Veryfast/很快掃描次數(shù)：1。顯示方式：Overlay/重疊2結(jié)果與討論2.1定性取標(biāo)準(zhǔn)溶液，在測量條件下進(jìn)行連續(xù)吸收掃描。即得標(biāo)準(zhǔn)譜圖。見圖1-5。從標(biāo)準(zhǔn)譜圖看，不同的色素具有不同的吸收波長及其譜圖，譜圖直觀易于區(qū)別。胭脂紅與莧菜紅的鑒別。由于胭脂紅與莧菜紅在332nm，及220nm處附近都有吸收，且峰強(qiáng)弱相似，兩者鑒別的要點(diǎn)如下：(1主色峰在508nm為胭脂紅，在522nm為莧菜紅。(2莧菜紅在370nm、332nm及280nm有明顯的逐級抬高的階梯峰；而胭脂紅在280nm處較332nm處的吸收為弱，故不形成階梯峰。(3莧

3、菜紅在350nm-410hm之間有一較寬(約有60nm的平臺，而胭脂紅的平臺較窄，在360nm390nm之間(僅有30nm左右。2.2定量不同的色素具有不同的吸收波長，且在一定濃度下，峰高與含量成正比，故可定量測定。2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制胭脂紅、莧菜紅、檸檬黃、日落黃分別吸取標(biāo)準(zhǔn)工作液005、010、050、100、200、400、500、600、700、800ml；亮蘭吸取(0.01mg/m1標(biāo)準(zhǔn)工作液0.20、0.50、1.00及(0.1mg/m1標(biāo)準(zhǔn)工作液020、050、100、200、400、600和800ml，分別置于10ml比色管中，用水稀釋至刻度，混勻后按方法進(jìn)行測量。標(biāo)準(zhǔn)系列一次

4、配制，在不同波長下，每種色素都可繪制出兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性范圍寬，高、低濃度差最大達(dá)100倍，在線性范圍內(nèi)。濃度與峰高呈非常顯著相關(guān)，r>09999。見表1。2.4方法檢出限、靈敏度及精密度按實(shí)驗(yàn)方法重復(fù)測定標(biāo)準(zhǔn)曲線6次，合并線性方程，見表1。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出峰高值0.02處的濃度值為方法檢出限，則各色素的方法檢出限為(ug/ml：胭脂紅0.51；莧菜紅0.58；檸檬黃0.46；日落黃0.40；亮蘭0.086。從標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率計算得各色素表觀摩爾吸光系數(shù)為(L·mol-1·cm-1：胭脂紅2.27 × 104；莧菜紅2.22 × 104；檸檬黃2.3

5、3 × 104；日落黃2.18 × 104；亮蘭1.23 × 104。重復(fù)測定各標(biāo)準(zhǔn)曲線6次，變異系數(shù)平均為2.84，范圍在1.764.01之間，各標(biāo)準(zhǔn)曲線變異系數(shù)見表1。2.5標(biāo)準(zhǔn)加標(biāo)回收實(shí)險據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍，取低、中、高濃度值的1/2作原含量，分別為C1、C2、C3；每個原含量再分別加入C1、C2、C3的量作加標(biāo)量，然后按方法進(jìn)行測定。結(jié)果五種合成色素的標(biāo)準(zhǔn)加標(biāo)回收率在96.2-102.5之間說明本方法準(zhǔn)確度高。2.6樣品測定及樣品加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)測定樣品時，樣品的處理及提取按國標(biāo)法進(jìn)行，提取液用本法及HPLC法測定，結(jié)果見表2。取1、2、4。、6樣作樣品加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表3。兩種方法的測定結(jié)果作配對t檢驗(yàn)，P>005。說明兩種方法測定結(jié)果無顯著性差異。從表3知，樣品加標(biāo)回收呈現(xiàn)系統(tǒng)負(fù)偏差。平均回收率僅為92.0，主要原因是在樣品處理、提取過程中，因吸附、提純、洗脫、轉(zhuǎn)容等多種步驟引起損失所致。3小結(jié)本文應(yīng)用紫外-可見吸收光譜法測定食