某HPLC分析方法的驗證方案(7.5改后)

1、XXX 產 品 HPLC 分 析 方 法確認方案XXX制藥確認方案審批表確認方案名稱：XXX產品HPLC分析方法確認方案確認方案編號：KY-ZL-YZ-FF-00400審批程序部門簽名日期起草檢驗室審核檢驗室主任質量保證部批準人質量負責人1概述2確認目的3確認圍4確認小組成員與職責5確認方案的審核與批準6進度計劃7確認容8變更與偏差9確認結果與評價報告10確認合格證書1 概述我公司產品XXX產品采自中國藥典2010年版二部，含量及有關物質、A、B C的檢驗均使用高效液相色譜儀進行檢驗，兩個檢驗項目檢驗參數(shù)等條件完全相同，且 我公司未對中國藥典2010年版二部中的方法進行過任何改變， 因此按照2

2、010新版 GMP要求，需要進行分析方法確認。本確認方案使用 LC-2010AH型高效液相色譜儀對 XXX產品采用中國藥典2010年版二部“含量”、“有關物質”及“ A、B、C的檢驗 方法進行確認，證明此方法在本公司實驗室的適用性。根據(jù)藥品 GMP旨南（質量控 制實驗室與物料系統(tǒng)）分冊要求，“含量”、“有關物質”及“ A、B C項需確認項 目如下：確認項目準確度精密度專屬性定量限含量是是是否有關物質否是是是A、B、C否是是是“是”代表該項容需確認，“否”代表該項容不需要確認2確認目的通過對XXX產品含量及有關物質 A、B、C的檢驗方法的確認，證明此方法在本公 司實驗室的適用性。3確認圍本確認方

3、案適用于XXX產品含量及有關物質A、B、C、的檢驗方法進行確認。4確認小組成員與職責部門及職務確認工作中職責檢驗員確認執(zhí)行人：負責起草確認方案，執(zhí)行確認方案，負責驗 證過程中相關的檢驗操作，收集整理數(shù)據(jù)，起草確認報告。質量保證部負責確認方案、確認報告審核；審核確認過程中發(fā)生偏差的解 決方案，以及米取糾正行動。檢驗室主任確認小組組長：組織確認實施，負責確認方案的審核、組織起 草確認報告并審核。質量負責人確認總負責人：負責確認方案、報告的批準5確認方案的起草與審批5.1 確認方案的起草與審批：確認方案由檢驗室起草，確認小組會審，質量負責人批 準實施。5.2 確認方案的培訓：確認方案經批準后，實施前

4、由確認方案的起草部門組織確認方 案的參與者進行培訓。5.3 確認方案的修改：確認方案如需修改，由質量負責人批準實施，在確認報告中體現(xiàn)。6 進度計劃整個確認活動實施時間：確認時間：從 年_月_日 至年 _ 月_ 日；起草報告：從 年_月_日 至年 _ 月_ 日；7 確認容7.1 確認前儀器及材料檢查7.1.1 確認前，對下列試驗用儀器和材料進行檢查7.1.1.1 島津 高效液相色譜儀7.1.1.2 TG-332A 型分析天平7.1.1.3 色譜柱：C18 ( 4.6*250 伽)對照品和試劑：產品X二醇物對照品、對硝基苯甲醛對照品、產品 X對照品、 羥苯甲酯對照品、羥苯乙酯對照品、羥苯乙酯對照品

5、、庚烷磺酸鈉，乙腈(色譜級) ， 甲醇(色譜級)，磷酸二氫鉀、三乙胺、磷酸、蒸餾水7.1.1.5 其他一些輔助的玻璃儀器(如量瓶、移液管等)7.1.2 可接受標準：儀器和用具經校驗且在效期；對照品、試液、試劑與試藥符合驗證 要求且在效期；色譜柱使用狀態(tài)正常。7.1.3 結果記錄：將結果記錄在附件 1確認前儀器及材料檢查表 中。7.2 確認涉及文件檢查7.2.1 確認前，對與此次確認相關的文件進行檢查產品成品檢驗操作規(guī)程( KY-ZL-SOP-CP-00400)7.2.1.2 型高效液相色譜系統(tǒng)標準操作及維護保養(yǎng)規(guī)程( KY-SB-SOP-JY-03700)KY-WS-SOP-JY-0370)0

6、型分析天平標準操作規(guī)程( KY-SB-SOP-JY-02300)型分析天平維護保養(yǎng)及清潔標準操作規(guī)程( KY-WS-SOP-JY-023007.2.1.6 高效液相色譜法標準操作規(guī)程 (KY-ZL-SOP-ZK-03300)產品HPLC分析方法的驗證方案(KY-YZ-SOP-JY-OO4O0產品生產工藝規(guī)程( KY-SC-JB-GY-00400)檢驗方法驗證(確認)管理程序(KY-ZL-SMP-O58OO)7.2.2 可接受標準：所有文件都應為現(xiàn)行版本，且經過批準。7.2.3 結果記錄：將結果記錄在附件 2確認前文件檢查表中。7.3 人員培訓確認7.3.1 檢查并確認所有參與執(zhí)行確認的人員是否

7、已得到培訓，并在培訓記錄上簽字。7.3.2 可接受標準：驗證小組成員均已經過培訓，并在培訓記錄上簽字。7.3.3 確認結果：將確認結果填入附件 3人員培訓、參與情況確認記錄中。7.4 確認項目7.4.1 “含量”項確認7.4.1.1 重復性/準確度741.1.1 空白基質的制備：精密稱定硼酸：13.125g硼砂：0.6g玻璃酸鈉：1g羥苯 乙酯：0.5g按照XXX產品生產工藝規(guī)程(KY-SC-JB-GY-00400配制加注射用水至 1OOOml。7.4.1.1.2 對照液制備：稱取產品X對照品用注射用水配制成1ml含2.5mg的溶液，取 本品用流動相定量稀釋制成每 1ml中含0.1mg的溶液搖

8、勻，作為對照液備用。對照液 平行制備2份，標識為S-1、S-2 (濃度為標示量的100%。7.4.1.1.3 樣品制備：稱取產品X對照品用空白基質水溶解后定容，搖勻，備用。 平行 制備濃度梯度為標示量 80%、 100%、 120%的樣品各 3份，標識為 A-1、 A-2、 A-3、 A-4、 A-5 、 A-6、 A-7 、 A-8、 A-9。7.4.1.1.4 照高效液相色譜儀標準操作規(guī)程測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相 A 為0.01mol/L庚烷磺酸鈉緩沖溶液(取磷酸二氫鉀 6.8g，用0.01mol/L庚烷磺酸鈉溶液溶解并稀釋至1000ml,再加

9、三乙胺5ml，混勻，用磷酸調節(jié)PH值至2.5 )，流動相B為 甲醇；檢測波長為277nm按下表進行線性梯度洗脫。另取產品 X對照品、產品X二醇 物對照品、對硝基苯甲醛對照品、羥苯甲酯、羥苯乙酯與羥苯丙酯對照品各適量，加 甲醇適量（產品X每10mg加甲醇1ml）使溶解，用流動相定量稀釋成每 1ml中含產品X0.5mg產品X二醇物40ug與對硝基苯甲醛3ug、羥苯甲酯40ug、羥苯乙酯50ug和 羥苯丙酯20ug的混合溶液。精密吸取該溶液10卩l(xiāng)注入色譜儀，作為系統(tǒng)適用性溶液。 記錄色譜圖。各相鄰峰間的分離度均應符合要求）（應大于1.5 ）。時間（分鐘）流動相A（%）流動相B（%）06832156

10、832403565506832606832測定：精密量取上述 A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9 溶液 用流動相定量稀釋制成每1ml中含0.1mg的溶液，搖勻，精密量取10ul，注入液相色 譜儀，記錄色譜圖。1） 取S-1精密量取10ul，注入液相色譜儀記錄色譜圖，該溶液連續(xù)進樣2針。2） 取S-2精密量取10ul，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，該溶液連續(xù)進樣1針。3） 分別精密量取稀釋后的 A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9 溶液各 10ul， 注入液相色譜儀，記錄色譜圖。4） 計算S-1和S-2的F值，相對標準偏差應w

11、2.0%,以外標法計算稀釋后的 A-1、A-2、 A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9 溶液的含量。結果計算含量（ex） =CF Ax/ARex 為供試品的濃度；CR 為對照品的濃度；Ax 為供試品的峰面積；AR 為對照品的峰面積。7.4.1.1.6 可接受標準：稀釋后的 A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9 各 濃度的含量均應在標示量的土 3%且各濃度樣品含量的 RSD值應w 2.0%。7.4.1.1.7 確認記錄和數(shù)據(jù)確認數(shù)據(jù)和結果記錄于附件 4含量精密度 / 準確度確認數(shù)據(jù)和結果中。7.4.1.2 專屬性7.4.1.2.1 測試方法：7

12、.4.1.2.1.1 取空白基質進樣 1 針，記錄色譜圖。7.4.1.2.1.2 精密量取樣品（用成品即可）用流動相 A-B（68： 32）定量稀釋制成每 1ml 中含產品 X0. 1mg 的溶液，作為供試品溶液，精密量取 10ul ，注入液相色譜儀， 進樣1針，記錄色譜圖，獲得產品X的保留時間。74121.3 取產品X對照品用流動相定量稀釋制成每1ml中含產品XO. 1mg的溶液， 作為對照品溶液，注入液相色譜儀，進樣 1針，記錄色譜圖，獲得產品X的保留時間。7.4.1.2.1.4 可接受標準：溶劑空白相應的峰對樣品測定有無明顯的干擾； 供試品圖譜 中產品X主峰保留時間與對照品圖譜中產品 X

13、主峰保留時間一致。7.4.1.2.1.5 確認記錄和數(shù)據(jù)確認數(shù)據(jù)和結果記錄于附件 5專屬性確認數(shù)據(jù)和結果中。7.4.2 “有關物質”及“ A B、C”項確認7.4.2.1 專屬性7.4.2 .1 .1精密量取樣品（用成品即可）用流動相A-B（68: 32）定量稀釋制成每1ml中含產品X0.5mg的溶液，作為供試品溶液。7.4.2 .1 .2對照溶液；取產品X對照品、產品X二醇物對照品、對硝基苯甲醛對照品、 羥苯甲酯、羥苯乙酯與羥苯丙酯對照品各適量，加甲醇適量（產品X每10mg加甲醇1ml） 使溶解，用流動相定量稀釋成每1ml中含產品X0.5mg產品X二醇物40ug與對硝基苯 甲醛3ug、羥苯甲

14、酯40ug、羥苯乙酯50ug和羥苯丙酯20ug的混合溶液。作為對照溶 液；照含量項下的色譜條件，取對照品溶液 10ul ，注入液相色譜儀，調節(jié)檢測靈敏度， 使產品X二醇物的峰高約為滿量程的64%7.4.2 .1.3 精密量取供試品溶液與對照品溶液各 10ul ，分別注入液相色譜儀，進樣 1 針，記錄色譜圖。7.4.2 .1 .4可接受標準：供試品圖譜中產品 X、產品X二醇物、對硝基苯甲醛、羥苯甲 酯、羥苯乙酯和羥苯丙酯各峰的保留時間 與系統(tǒng)適用性圖譜中相對峰的保留時間一致 。 溶劑空白相應位置無峰的干擾。7.4.2 .1.5 確認記錄和數(shù)據(jù)確認數(shù)據(jù)和結果記錄于附件 5專屬性確認數(shù)據(jù)和結果中。7

15、.4.2.2 精密度7.4.2.2.1 測試程序74221.1 取含量項下系統(tǒng)適用性溶液作為對照溶液D-1;另按同法制備一份對照品作為對照溶液 D-2。7.4.2.2.1.2 取樣品用含量測定項下的流動相 A-B（ 68: 32）定量稀釋制成每1ml中含產品X0.5mg的溶液，配制6分平行樣品作為供試品溶液分別為B-1B-6。7.4.2.2.1.3 D-1 進樣2針，D-2進樣1針，然后B-1B-6分別進針，記錄色譜圖。7.4.2.2.1.4 各相鄰峰之間的分離度應1.57.4.2.2.1.5 計算D-1和D-2的F值，相對標準偏差應W 2.0%，以外標法計算B-1、B-2、 B-3、B-4、

16、B-5、B-6 溶液中各有關物質的含量。計算：產品X二醇物（% =S二醇物x C二醇物對照/ S二醇物對照x C供試品x 100%對硝基苯甲醛（ %）=S 對硝基苯甲醛 xC 對硝基苯甲醛對照 / S 對硝基苯甲醛對照 xC 供試品 x 100% 羥苯甲酯（ %） =S 羥苯甲酯 xC 羥苯甲酯醛對照 / S 羥苯甲酯對照 xC 供試品 x 100% 羥苯乙酯（% =S羥苯乙酯x C羥苯乙酯對照/ S羥苯乙酯對照x C供試品x 100% 羥苯丙酯（% =S羥苯丙酯x C羥苯丙酯對照/ S羥苯丙酯對照x C供試品x 100%7.4.2.2.1.2 可接受標準：6個樣品B-1、B-2、B-3、B-

17、4、B-5、B-6含量的RSD值應 2.0%。7.4.2.2.1.3 確認記錄和數(shù)據(jù)確認數(shù)據(jù)和結果記錄于附件 6有關物質及A、B、C精密度確認數(shù)據(jù)和結果中。7.4.2.3 定量限在上述色譜條件下取產品X二醇物對照品用流動相稀釋成每1ml中含產品X 二醇物40ug的溶液，進樣，再逐步稀釋置適當?shù)臐舛?，進樣，直至當待測組分的信噪 比約為10倍時（即產品X二醇物峰高為噪音峰高約10倍時），對應的濃度為該組分的 最小定量濃度（Cm），重復進樣3次，記錄色譜圖。在上述色譜條件下取對硝基苯甲醛對照品用流動相稀釋成每1ml中含對硝基苯甲醛3ug的溶液,進樣，再逐步稀釋置適當?shù)臐舛?，進樣，直至當待測組分的信噪

18、比 約為 10倍時（即對硝基苯甲醛峰高為噪音峰高約 10倍），對應的濃度為該組分的最小定量濃度(Cm2)，重復進樣3次，記錄色譜圖。742.3 .3因本公司產品中加入的是羥苯乙酯， 故只做羥苯乙酯的定量限，上述色譜條 件下取對硝基苯甲醛對照品用流動相稀釋成每1ml中羥苯乙酯50ug的溶液,進樣，再逐步稀釋置適當?shù)臐舛?，進樣，直至當待測組分的信噪比約為10倍時(即對硝基苯甲醛峰高為噪音峰高約10倍)，對應的濃度為該組分的最小定量濃度(Cm2)，重復進樣3 次，記錄色譜圖。742.3.2 計算公式信噪比=坐晉式中：hi :測試溶液中產品X二醇物、對硝基苯甲醛的峰高；h b：基線噪聲的峰高；h :空

19、白溶液的色譜圖中基線的峰高。742.3.3 可接受標準：上述雜質的定量限應小于產品中各類雜質限度標準的10%742.3.4 確認記錄和數(shù)據(jù)確認數(shù)據(jù)和結果記錄于附件7定量限確認數(shù)據(jù)和結果中。8變更與偏差若確認方案需要變更，須按方案制定時的審批程序進行批準；若系統(tǒng)發(fā)生重大變更，應重新制定確認方案。確認過程中應嚴格按照本確認方案執(zhí)行，出現(xiàn)個別項目不符合標準結果時，應按偏差管理規(guī)程進行處理，有異常事項未解決時，不得進行下一步的工作。所有偏差、異常情況處理過程均應記錄備案，并登記到附件8中。9確認的結果與評價報告由質量保證部和檢驗室主任對分析方法確認的結果進行審核，檢查所有測試項目 已經完成；變更和偏差

20、都已經得到解決和批準；每個項目均應符合它們的確認可接受 標準；確認記錄完整。由檢驗室填寫確認報告，由確認小組長在報告中簽署評審結論， 提交確認總負責人進行批準。附件 9中。10確認合格證書確認的結果與評價報告經批準人批準簽字后，質量受權人簽發(fā)驗證合格證書。附件10附件目錄附件附件名稱附件1確認前儀器及材料檢查表附件2確認前文件檢查表附件3人員培訓、參與情況確認記錄附件4含量精密度/準確度確認數(shù)據(jù)和結果附件5專屬性驗證數(shù)據(jù)和結果附件6有關物質及A、B、C精密度確認數(shù)據(jù)和結果附件7定量限確認數(shù)據(jù)和結果附件8變更偏差情況確認記錄附件9確認結果與評價報告附件10確認合格證書附件1確認前儀器及材料檢查表

21、序號名稱儀器編號試液、試藥批號證書編號有效期至確認標準確認結果確認所用的儀器經過校驗且在有 效期，試藥、試液均在有效期， 標準滴定 液經過標定且在有效 期。確認結論：檢查人/日期復核人/日期附件2確認前文件檢查表文件名稱文件編號是否現(xiàn)行文本檢驗方法驗證（確認）管理程序KY-ZL-SMP-05800TG -332A型分析天平標準操作規(guī)程KY-SB-S0P-JY-02300TG-332A型分析天平維護保養(yǎng)及清潔標準操作規(guī)程KY-WS-S0P-JY-02300LC-2010AHT型高效液相色譜系統(tǒng)標準操作規(guī) 程KY-SB-SOP-JY-03700LC-2010AHT型高效液相色譜系統(tǒng)維護保養(yǎng)及清潔標

22、準操作規(guī)程KY-SB-SOP-JY-03700咼效液相色譜法標準操作規(guī)程KY-ZL-SOP-ZK-03300XXX產品成品檢驗操作規(guī)程KY-ZL-SOP-CP-00400XXX產品生產工藝規(guī)程KY-SC-JB-GY-00400XXX產品HPLC分析方法的確認方案KY-YZ-SOP-JY-00400檢杳人檢查日期檢查結果附件3人員培訓、參與情況確認記錄授課地點日期授課容部門職務培訓人檢驗室檢驗室主任部門職務受培訓并參與方案頭施人員檢驗室檢驗員檢驗室檢驗員質量保證部質監(jiān)處處長質量保證部質量授權人確認標準確認結果確認所有參與執(zhí)行本確認的人員已經得到培訓，并在培訓記錄中簽字。確認結論：檢查人/日期復核人/日期附件4含量精密度/準確度確認數(shù)據(jù)和結果1 S-1No123平均值RSD產品X峰面積2 S-2No12平均值RSD產品X峰面積3 80%濃度NoA-1A-2A-3平均值RSD含量產品X峰面積4 100%濃度NoA-4A-5A-6平均值RSD含量產品X峰面積5 120%濃度NoA-7A-8A-9平均值RSD含量產品X峰面積6確認結論可接受標準驗證結果是否符合各濃度含量的RSD值應w 2.0%各濃度的含量均應在標示量的土 3%確認結論：檢查人/日期復核人/日期附件5專