發(fā)酵工程實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)1ppt課件

1、1Xin ZhangSchool of Marine Science Department of Food Science & TechnologyNingbo University發(fā)酵工程實(shí)驗(yàn)張張 鑫鑫寧波大學(xué)寧波大學(xué) 海洋學(xué)院海洋學(xué)院 食品科學(xué)與工程系食品科學(xué)與工程系6251862乳酸菌的功能與應(yīng)用價(jià)值乳酸菌的功能與應(yīng)用價(jià)值抗菌，防腐，抗氧化，微生態(tài)益生菌等）發(fā)酵保健食品酸奶）；發(fā)酵代謝產(chǎn)物：有機(jī)酸，胞外多糖，抗菌肽，等；果蔬發(fā)酵酸菜等）；環(huán)境廢物轉(zhuǎn)化，環(huán)境保護(hù)；等。乳酸菌的應(yīng)用乳酸菌的功能3發(fā)酵工程的研究?jī)?nèi)容構(gòu)成發(fā)酵工程的研究?jī)?nèi)容構(gòu)成 工業(yè)微生物生產(chǎn)菌株的分離與篩選； 菌株改造菌

2、種選育） 培養(yǎng)基制備技術(shù)； 發(fā)酵過(guò)程控制與優(yōu)化； 產(chǎn)物的分離與純化4第一部分：乳酸菌的分離、篩選與保藏第一部分：乳酸菌的分離、篩選與保藏第二部分：乳酸菌的培養(yǎng)與發(fā)酵測(cè)定第二部分：乳酸菌的培養(yǎng)與發(fā)酵測(cè)定附上：實(shí)驗(yàn)原始記錄附上：實(shí)驗(yàn)原始記錄 實(shí)驗(yàn)一：實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)一：實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 實(shí)驗(yàn)二：乳酸菌的分離與篩選實(shí)驗(yàn)二：乳酸菌的分離與篩選 實(shí)驗(yàn)三：菌種培養(yǎng)與保藏實(shí)驗(yàn)三：菌種培養(yǎng)與保藏 實(shí)驗(yàn)四：乳酸菌的發(fā)酵培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)四：乳酸菌的發(fā)酵培養(yǎng) 實(shí)驗(yàn)五：乳酸菌發(fā)酵測(cè)定與產(chǎn)物分析實(shí)驗(yàn)五：乳酸菌發(fā)酵測(cè)定與產(chǎn)物分析一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c意義及原理等一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c意義及原理等二、材料與方法或步驟）二、材料與方法或步驟）三、結(jié)果與分析三、

3、結(jié)果與分析問(wèn)題回答問(wèn)題回答實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫(xiě)基本格式實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫(xiě)基本格式撰寫(xiě)完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告上交材料）撰寫(xiě)完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告上交材料）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容設(shè)計(jì)5實(shí)驗(yàn)二時(shí)間安排周XX培養(yǎng)基制備；分別：劃線(xiàn)分離；稀釋分離選菌落，接入斜面培養(yǎng)基標(biāo)志），培育；保管6實(shí)驗(yàn)乳酸菌菌株斜面移接活化細(xì)胞生長(zhǎng)測(cè)定產(chǎn)酸變化注意點(diǎn)：新保存的菌株可直接接種，不必再活化。菌種移接至發(fā)酵三角瓶，培育(E2)（細(xì)胞生物量g/L：離心測(cè)菌體重量； 混濁度描述） （測(cè)定pH變化：酸度計(jì)）發(fā)酵產(chǎn)物乳酸定性分析(E3)（薄層層析法）總實(shí)驗(yàn)流程總實(shí)驗(yàn)流程采樣分別(E1)乳酸菌菌株7實(shí)驗(yàn)一：培養(yǎng)基制備與器材準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)一：培養(yǎng)基制備與器材準(zhǔn)備每組內(nèi)容每人

4、倒1個(gè)平板用于劃線(xiàn)分離做一套稀釋倒平板，1個(gè)稀釋度倒平板1個(gè)斜面培養(yǎng)基每人1支，第一部分第一部分MRS培養(yǎng)基200ML，營(yíng)養(yǎng)瓊脂30ML，無(wú)菌水試管4支9ML），無(wú)菌移液管5支1ML），留意：碳酸鈣按比例混合MRS培養(yǎng)基200ML加5克）；培養(yǎng)基可幾個(gè)組合并配制。發(fā)酵模塊：共6個(gè)組，每3個(gè)組配600ML，營(yíng)養(yǎng)瓊脂一個(gè)班配1瓶。8分離得到的乳酸菌菌株編號(hào)）菌落觀(guān)察生理生化特性（略）形態(tài)鑒定（略）采樣稀釋倒平板編號(hào)，斜面培養(yǎng)與保存（通過(guò)產(chǎn)酸特性直接鑒定）實(shí)驗(yàn)二：乳酸菌的分離與培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)二：乳酸菌的分離與培養(yǎng)第一部分第一部分9實(shí)驗(yàn)三實(shí)驗(yàn)三 乳酸菌菌種的培養(yǎng)與保藏乳酸菌菌種的培養(yǎng)與保藏分離得到的乳酸菌菌

5、株編號(hào)）斜面移接與培養(yǎng)(每一株）1株保藏1株待以下實(shí)驗(yàn)用注意點(diǎn)：注明菌種編號(hào)與日期；如Lcd131,Lcd132；（例：陳丹，第一組第3位同學(xué)）第一階段結(jié)束，總結(jié)安排一周完成10時(shí)間安排 （制藥班級(jí)，21人）周三培養(yǎng)基制備；分別：劃線(xiàn)分離；稀釋分離周五選菌落，接入斜面培養(yǎng)基標(biāo)志），培育；配制發(fā)酵培養(yǎng)基；（每個(gè)菌株接種2瓶平行實(shí)驗(yàn)）下周一下周三接種發(fā)酵培養(yǎng)基標(biāo)志），每個(gè)菌株接種2瓶。開(kāi)始記錄時(shí)間。（16至24h內(nèi)檢測(cè)一次）發(fā)酵結(jié)束，樣品檢測(cè)，乳酸薄層層析法測(cè)定。（周二）（周四）（周四）11實(shí)驗(yàn)乳酸菌菌株斜面移接活化細(xì)胞生長(zhǎng)測(cè)定自選）產(chǎn)酸變化注意點(diǎn)：新保存的菌株可直接接種，不必再活化。實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)四

6、 乳酸菌培養(yǎng)與發(fā)酵測(cè)定乳酸菌培養(yǎng)與發(fā)酵測(cè)定菌種移接至發(fā)酵三角瓶，培育（細(xì)胞生物量g/L：離心測(cè)菌體重量； 混濁度描述） （測(cè)定pH變化：酸度計(jì)）發(fā)酵產(chǎn)物乳酸定性分析E3）（薄層層析法）總實(shí)驗(yàn)流程總實(shí)驗(yàn)流程第二部分第二部分12發(fā)酵培養(yǎng)基的配制發(fā)酵培養(yǎng)基的配制接種3環(huán)培養(yǎng)瓶包扎方法闡明闡明13細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定細(xì)胞濕密度：?jiǎn)挝惑w積細(xì)胞濕密度：?jiǎn)挝惑w積(ml)發(fā)酵液菌體的重量發(fā)酵液菌體的重量g濕重）濕重）; 方法：取一定量方法：取一定量(ml)發(fā)酵液，經(jīng)離心去除上清液，菌發(fā)酵液，經(jīng)離心去除上清液，菌體稱(chēng)重。體稱(chēng)重。細(xì)胞濃度：?jiǎn)挝惑w積細(xì)胞濃度：?jiǎn)挝惑w積(ml)活細(xì)胞數(shù)活細(xì)胞數(shù)(cfu)，單位

7、，單位:cfu/ml 方法：取一定量方法：取一定量(ml)發(fā)酵液，經(jīng)適當(dāng)稀釋后。倒平板培養(yǎng)發(fā)酵液，經(jīng)適當(dāng)稀釋后。倒平板培養(yǎng)計(jì)數(shù)，再由菌落數(shù)與稀釋倍數(shù)的積。計(jì)數(shù)，再由菌落數(shù)與稀釋倍數(shù)的積。光密度光密度OD）：反映細(xì)胞的混濁度；）：反映細(xì)胞的混濁度； 方法：由分光光度計(jì)在一定波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值。方法：由分光光度計(jì)在一定波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值。14分析結(jié)束以后每一組清洗各自的分析結(jié)束以后每一組清洗各自的實(shí)驗(yàn)物品，包括斜面菌種等。實(shí)驗(yàn)物品，包括斜面菌種等。請(qǐng)同學(xué)注意：請(qǐng)同學(xué)注意：發(fā)酵液預(yù)處理可直接取發(fā)酵清液，調(diào)發(fā)酵液預(yù)處理可直接取發(fā)酵清液，調(diào)pH至至3左右左右因培養(yǎng)結(jié)束；因培養(yǎng)結(jié)束；最后一次分析檢測(cè)不用無(wú)菌操

8、作！最后一次分析檢測(cè)不用無(wú)菌操作！15實(shí)驗(yàn)五實(shí)驗(yàn)五 乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)物乳酸的定性分析乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)物乳酸的定性分析 -薄層層析法薄層層析法方法流程方法流程1.發(fā)酵液預(yù)處理可直接取發(fā)酵上清液，調(diào)發(fā)酵液預(yù)處理可直接取發(fā)酵上清液，調(diào)pH至至3，另用自然，另用自然pH做對(duì)照；做對(duì)照；2.劃線(xiàn)及點(diǎn)樣時(shí)，不可將薄層刺破，點(diǎn)樣斑點(diǎn)直徑不超過(guò)劃線(xiàn)及點(diǎn)樣時(shí)，不可將薄層刺破，點(diǎn)樣斑點(diǎn)直徑不超過(guò)2mm，重復(fù)點(diǎn)樣時(shí)要在同一位置。每次點(diǎn)樣后適當(dāng)吹干。重復(fù)點(diǎn)樣時(shí)要在同一位置。每次點(diǎn)樣后適當(dāng)吹干。 3.顯色時(shí)，注意噴霧均勻。顯色時(shí)，注意噴霧均勻。4.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理：記錄顯色點(diǎn)與點(diǎn)樣點(diǎn)間的距離。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理：記錄顯色點(diǎn)與點(diǎn)樣點(diǎn)間的距

9、離。發(fā)酵液預(yù)處理展開(kāi)系統(tǒng)飽和點(diǎn)樣展開(kāi)顯色操作注意事項(xiàng)操作注意事項(xiàng)記錄計(jì)算，等16展層溶劑：正丁醇：甲酸：水展層溶劑：正丁醇：甲酸：水=80：15：5V/V/V）；）；展開(kāi)系統(tǒng)的飽和：展開(kāi)系統(tǒng)的飽和：預(yù)先取適量配制好的展開(kāi)劑注入層析缸一邊，將已點(diǎn)樣的的薄板也放入層析預(yù)先取適量配制好的展開(kāi)劑注入層析缸一邊，將已點(diǎn)樣的的薄板也放入層析缸的另一邊，密閉層析缸缸的另一邊，密閉層析缸1520min，使展開(kāi)液蒸汽飽和層析系統(tǒng)，使展開(kāi)液蒸汽飽和層析系統(tǒng) 展開(kāi)：將薄板移至有適量展開(kāi)液的層析缸一邊展開(kāi)；展開(kāi)：將薄板移至有適量展開(kāi)液的層析缸一邊展開(kāi)； 顯色：顯色： 3%的溴甲酚綠酒精溶液噴霧，再用熱風(fēng)吹干，的溴甲酚綠酒精溶液噴霧，再用熱風(fēng)吹干， 留意：顯色液噴霧要足夠。顯色時(shí)間要充分。留意：顯色液噴霧要足夠。顯色時(shí)間要充分。1、描述分離效果作圖或照片顯示）； 2、計(jì)算Rf值； 3、分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果及誤差原因。（請(qǐng)記錄以下（請(qǐng)記錄以下3個(gè)問(wèn)題）個(gè)問(wèn)題）四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論具體操作步驟按照實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書(shū)具體操作步驟按照實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書(shū)實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容格式參照下頁(yè)；報(bào)告統(tǒng)一提