苯磺酸氨氯地平片在健康人體的藥動(dòng)學(xué)及生物等效性評價(jià)

1、苯磺酸氨氯地平片在健康人體的藥動(dòng)學(xué)及生物等效性評價(jià)    論文論文參考網(wǎng)                                         

2、60;      作者：張琰，楊蕾，劉梅，覃華，陳笑艷，張逸凡，鐘大放【關(guān)鍵詞】  苯磺酸氨氯Assessment of pharmacokinetics and bioequivalence of amlodipine besylate in healthy volunteers【Abstract】 AIM: To study the pharmacokinetics parameters and bioavailability of amlodipine besylate tablets. METHODS:  An op

3、en, randomized and twoperiod crossover study with a twoweek washout interval was performed in 18 healthy volunteers. Concentrations of amlodipine besylate in plasma were assayed by liquid chromatographicmassmass spectrometric method after a single oral dose of 10 mg of the tested or the referenced t

4、ablets. The pharmacokinetics parameters, AUC, Tmax and Cmax were analyzed by two oneside t test and (12) 90%. RESULTS:  The main pharmacokinetics of the tested and referenced tablets were: Tmax: (8.9±2.5) and (8.2±2.2)  h; Cmax: (5.1±2.3) and (5.0±2.2) g/L; T1/2: (45

5、77;10) and (48±24) h; AUC（0-120 h）: (191±69) and (196±53) g/（Lh）. The relative bioavailiability of amlodipine besylate was (99±23)%. CONCLUSION:  The results of the statistical analysis show that the two formulations are bioequivalent.【Keywords】 amlodipine besylate;  ph

6、armacokinetics;  biological availability; liquid chromatography; spectrum analysis, mass【摘要】  目的： 研究苯磺酸氨氯地平片在健康人體的藥代動(dòng)力學(xué)特征及其生物等效性評價(jià). 方法： 18名健康志愿受試者，口服苯磺酸氨氯地平試驗(yàn)品和參比品10 mg，用標(biāo)準(zhǔn)二階段交叉設(shè)計(jì)自身對照試驗(yàn)方法，以液相色譜質(zhì)譜質(zhì)譜聯(lián)用法測定服藥后120 h內(nèi)不同時(shí)刻的血藥濃度，計(jì)算主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，并采用方差分析和雙單側(cè)t檢驗(yàn)（12）90%置信區(qū)間進(jìn)行生物等效性評價(jià). 結(jié)果： 受試者分別口服受試品和參比品后，其主要

7、藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Tmax, Cmax, t1/2和AUC（0-120 h）分別為： （8.9±2.5）和（8.2±2.2） h；（5.1±2.3）和（5.0±2.2）  g/L；（45±10）和（48±24）  h；（191±69）和（196±53）  g/(Lh). 受試品的相對生物利用度為 (99±23)%. 結(jié)論： 結(jié)果表明，兩種制劑具有生物等效性. 【關(guān)鍵詞】 苯磺酸氨氯地平片；藥代動(dòng)力學(xué)；生物利用度；液相色譜；光譜分析，質(zhì)量0引言   苯磺酸

8、氨氯地平片（Amlodipine besylate），臨床上主要用于高血壓和心絞痛的治療1. 與同類型的其他藥物相比，該藥有服藥量低、藥效維持時(shí)間長等特點(diǎn). 由于氨氯地平的血藥濃度低，我們采用精確度和靈敏度更高的液相質(zhì)譜聯(lián)用法測定血漿中氨氯地平濃度.為確保用藥質(zhì)量，我們評價(jià)苯磺酸氨氯地平在人體內(nèi)的生物效應(yīng)，并對苯磺酸氨氯地平片和絡(luò)活喜片在健康志愿者體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)和生物等效度進(jìn)行了比較，旨在為臨床合理用藥2-5提供理論依據(jù).1材料和方法1.1材料1.1.1儀器TSQ型液相色譜質(zhì)譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，配有大氣壓化學(xué)電離源（APCI源）以及Xcalibur 1.4數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，Surveyor輸液泵（

9、美國Finnigan公司）. 色譜柱ZorbaxXBDC18柱，5 m粒徑，150×4.6 mmI.D（美國Agilent公司）.1.1.2藥品和試劑受試制劑： 苯磺酸氨氯地平片（陜西正康醫(yī)藥化工有限公司，批號 20030819， 5 mg/片）；參比制劑： 絡(luò)活喜片(輝瑞制藥有限公司生產(chǎn)，批號 45805012， 5 mg/片)；苯磺酸氨氯地平對照品（寧波大紅鷹藥業(yè)，含量>99.0%）；內(nèi)標(biāo)為鹽酸苯海拉明（中國藥品生物制品檢定所，含量>99.4%）；甲酸（分析純，天津市博迪化工有限公司）和乙腈（色譜純，天津康科德科技有限公司）；二氯甲烷和乙醚（分析純，天津市博迪化工有限

10、公司）；磷酸鈉（分析純，沈陽化學(xué)試劑廠）；空白人血漿（沈陽中心血站）.1.1.3色譜條件流動(dòng)相為乙腈水甲酸（80200.5, V/V/V）,流速為 0.5 mL/min,柱溫為室溫.1.1.4質(zhì)譜條件檢測方式為正離子檢測，離子源為APCI源；電暈放電電流4.0 A；加熱毛細(xì)管溫度為280；氣化室溫度450；鞘氣（N2）壓力30 Arb；輔助氣（N2）流量3 Arb；碰撞氣（Ar）壓力1.5 mTorr；碰撞誘導(dǎo)解離（CID）電壓分別為15 eV（氨氯地平）和25 eV（苯海拉明）；掃描方式為選擇反應(yīng)監(jiān)測（SRM），用于定量分析的離子反應(yīng)分別為 m/z 409m/z 238（氨氯地平）和m/z

11、256m/z 167（內(nèi)標(biāo)苯海拉明）；掃描時(shí)間為0.3 s.1.2方法1.2.1研究對象與給藥方案以標(biāo)準(zhǔn)二階段交叉自身實(shí)驗(yàn)法，將18名健康男性志愿者隨機(jī)分為兩組. 試驗(yàn)第一階段第一組口服受試制劑10 mg，第二組口服參比制劑10 mg. 經(jīng)2 wk清洗期后，兩組交換服藥品種進(jìn)行第二階段試驗(yàn). 受試者于每次試驗(yàn)前日20：00開始禁食，于試驗(yàn)當(dāng)日07：00空腹按規(guī)定的劑量及方法給藥，服藥后4 h 和10 h進(jìn)食統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)午餐.服藥前抽取空白血樣4 mL，服藥后2， 4， 6， 8， 10， 14， 24， 36， 48， 72， 96和120 h采集靜脈血4 mL, 立即移入經(jīng)肝素處理的試管中離心1

12、0 min,分離血漿,置于無菌干燥塑料管中, 于-20冰箱保存待測. 由于氨氯地平對光不穩(wěn)定,因而采血過程避光操作，血漿樣品均避光保存.1.2.2血漿樣品的處理與測定取血漿1.0 mL,加甲醇水（5050， V/V）100 L,內(nèi)標(biāo)溶液（200 g/L鹽酸苯海拉明）100 L，磷酸鈉緩沖液（10 mmol/L,  pH 12）500  L,混勻；加提取試劑乙醚二氯甲烷（21， v/v）3.0 mL,渦流1 min,往復(fù)振蕩10 min, 離心5 min,取上層有機(jī)相于40空氣流下吹干，殘留物于100 L流動(dòng)相中溶解，取20 L進(jìn)行LC/MS/MS 分析.1.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的

13、制備取空白血漿1.0 mL，加氨氯地平標(biāo)準(zhǔn)系列溶液100 L，配制成相當(dāng)于濃度為0.2， 0.5， 1.6， 4.0， 8.0和16.0 g/L的血漿樣品，每種濃度做兩份樣品，按1.2.2操作，記錄各色譜峰的峰面積. 以待測物濃度為橫坐標(biāo)，待測物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值為縱坐標(biāo)，用加權(quán)最小二乘法6進(jìn)行回歸運(yùn)算，求得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程，氨氯地平的線性范圍為0.216.0 g/L.論文參考網(wǎng) 1.2.4方法的精密度與準(zhǔn)確度取空白血漿加入適量氨氯地平標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別配制成0.2， 4.0， 16.0 g/L的低、中、高三個(gè)濃度的質(zhì)量控制（QC）樣品各兩份，在1日內(nèi)測3次，并以同法配制濃度連續(xù)測定3 d，1次

14、/d，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線同時(shí)進(jìn)行，與配制溶液對照，求得本法的日內(nèi)精密度和日間精密度.1.2.5提取回收率取空白血漿3份，加入適量氨氯地平標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別配制成0.2， 4.0， 16.0 g/L的低、中、高3個(gè)濃度的樣品，按樣品測定法各測定含量6次，種濃度下樣品的提取回收率分別為： 84.0%， 77.2% 和81.2%.1.2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)文獻(xiàn)7-8報(bào)道，氨氯地平血漿樣品-20避光放置6 mo穩(wěn)定，日照4 h，即有30%以上的分解產(chǎn)物. 所以，全部試驗(yàn)過程均要求避光操作. 本試驗(yàn)考察了經(jīng)液液萃取處理后的氨氯地平血漿樣品室溫放置24 h以及血漿樣品經(jīng)歷3 次冷凍解凍循環(huán)的穩(wěn)定性. 每一種儲存條件的穩(wěn)定

15、性考察時(shí)，取空白血漿1.0 mL，配制氨氯地平低、高兩濃度的血漿樣品，每一濃度進(jìn)行三樣本分析，采用LC/MS/MS法測定，結(jié)果表明處理后的氨氯地平血漿樣品室溫放置24 h穩(wěn)定（RE為±6.3%）；經(jīng)過3次冷凍解凍循環(huán)后穩(wěn)定（RE為±12.7%）.    統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:  Tmax, Cmax采用實(shí)測值，以消除相血藥濃度對數(shù)與對應(yīng)點(diǎn)時(shí)間的線性進(jìn)行回歸求算苯磺酸氨氯地平的體內(nèi)消除半衰期，采用梯形法計(jì)算AUC（0-120 h）和AUC(0-)， 得到兩制劑的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù).  將AUC和Cmax參數(shù)進(jìn)行對數(shù)轉(zhuǎn)換后，以雙單側(cè)t檢驗(yàn)

16、和（12）%置信區(qū)間法評價(jià)兩種苯磺酸氨氯地平制劑在人體內(nèi)的相對生物等效性.2結(jié)果2.1方法的專屬性色譜圖見圖1. 在本試驗(yàn)所采用的色譜質(zhì)譜條件下，氨氯地平和內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間為2.67, 2.70 min,氨氯地平和內(nèi)標(biāo)的峰形良好，無雜質(zhì)干擾，基線平穩(wěn)，可確保分析的專一性.2.2方法的日內(nèi)、日間精密度見表1.表1血中苯磺酸氨氯地平測定方法的日內(nèi)、日間精密度(略)2.3藥代動(dòng)力學(xué)Tmax, Cmax采用實(shí)測值，以消除相血藥濃度對數(shù)與對應(yīng)點(diǎn)時(shí)間的線性回歸求算苯磺酸氨氯地平的體內(nèi)消除半衰期，采用梯形法計(jì)算AUC（0-120 h）,  AUC(0-), 所得的兩制劑的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表2.表

17、2分別口服苯磺酸氨氯地平兩制劑（10 mg）后的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)比較(略)2.4生物等效性的評價(jià) 兩種制劑中氨氯地平的AUC（0-120 h）, Cmax, Tmax和T1/2  ke無差異(表3). 進(jìn)一步采用雙單側(cè)t檢驗(yàn)和（12）置信區(qū)間法分析，AUC（0-120 h）, AUC(0-), Cmax均拒絕不等效假設(shè)(P<0.05，表4). 兩種分析方法表明，兩種制劑具有生物等效性.表318名受試者口服苯磺酸氨氯地平兩制劑后氨氯地平主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)方差分析結(jié)果（略）表418名受試者口服苯磺酸氨氯地平兩制劑后氨氯地平主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)雙單側(cè)t檢驗(yàn)（12）90%置信區(qū)間檢驗(yàn)結(jié)果（

18、略）3討論國內(nèi)外關(guān)于氨氯地平含量測定的方法多采用HPLCUV，但其靈敏度較低，而本研究采用的液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法檢測的線性范圍達(dá)到0.216.0 g/L. 其具有高度的檢驗(yàn)靈敏性，操作簡便，可確保測定血漿中的微量氨氯地平濃度的準(zhǔn)確性和可靠性.在流動(dòng)相的選擇上，選用乙腈水甲酸，甲酸為有機(jī)酸，可增加氨氯地平的溶解.從氨氯地平血藥濃度的測定結(jié)果可見，18例受試者服用受試制劑和參比制劑后，兩組之間各參數(shù)間均無顯著性差異，說明兩種苯磺酸氨氯地平片在18例健康受試者體內(nèi)的處置情況較為相似. 從兩種苯磺酸氨氯地平片的生物等效性分析結(jié)果可見，兩種苯磺酸氨氯地平片的Tmax（實(shí)測值）、Cmax（實(shí)測值）和以梯形法求得的AUC（0-120 h）間的配對雙單側(cè)t檢驗(yàn)和采用（12）置信區(qū)間法分析，結(jié)果均表明，兩種苯磺酸氨氯地平片在人體內(nèi)具有生物等效性，受試制劑相對于參比制劑的相對生物利用度為（98.6±23.3）%，兩種制劑在人體內(nèi)具有生物等效性.【參考文獻(xiàn)】1Meredith PA, Eilliott HL. Clinical pharmacokinetics of amlodipine J. ClinPharm, 1992,22(1):22-31.2文愛東，黃熙，蔣永培，等. 心力衰竭對地高