離子色譜法測定肝素鈉粗品中多硫酸軟骨素的含量

1、離子色譜法測定肝素鈉粗品中多硫酸軟骨素的含量摘要：目的:建立離子色譜法測定肝素鈉粗品中多硫酸軟骨素的含量的測定方法。方法:樣品溶解后，使用戴安AS11色譜柱分離，流動相A為0.04% 磷酸二氫鉀溶液（pH3.0），流動相B為含0.04% 磷酸二氫鉀和14% 高氯酸鈉的水溶液，梯度洗脫，流速1.0mL/min，紫外檢測器，檢測波長為225nm。結(jié)果:本方法檢出限為0.5%。結(jié)論:本方法簡便快捷,用于測定肝素鈉粗品中多硫酸軟骨素的含量,具有較低的檢出限。 關鍵詞 肝素鈉 粗品 多硫酸軟骨素 離子色譜法 肝素（heparin）是高度硫酸化的糖胺聚糖，由糖醛酸和葡萄糖胺以14 鍵連接起來的重復二糖單位

2、組成的多糖的混合物，含1030 個二糖單位不等。自從1937 年肝素在臨床上用作抗凝劑以來, 肝素一直是一種主要的抗凝藥物，它被廣泛用于臨床，包括腎透析，急性冠狀動脈綜合癥等。肝素主要從豬的腸粘膜中提取得到。我國是肝素生產(chǎn)大國，為肝素原料的主要出口國。肝素產(chǎn)品是一大類產(chǎn)品，包括肝素鈉（鈣）、低分子肝素鈉（鈣）、類肝素等等。2008年年初，美國百特公司生產(chǎn)的肝素鈉注射液在美國發(fā)生了嚴重的不良反應。它的原料由我國的一家美資化工企業(yè)常州凱普生物化學有限公司生產(chǎn)。百特肝素鈉不良反應事件后，中國藥品生物制品檢定所隨即對多個廠家多個批次的肝素鈉進行了質(zhì)量分析，通過多種不同分析測試手段的聯(lián)合應用，發(fā)現(xiàn)某些肝

3、素鈉中含有硫酸軟骨素、硫酸皮膚素及多硫酸軟骨素(OSCS)三種雜質(zhì)中的一種或幾種。肝素鈉粗品，除含有以上幾種物質(zhì)外，還含有蛋白等其他雜質(zhì)，成分復雜。 本文建立了離子色譜法測定肝素鈉粗品中多硫酸軟骨素含量的方法。通過樣品前處理方法和色譜條件的優(yōu)化，建立了一種較為完善的分離和檢驗方法。 1.實驗條件 1.1 儀器 Dionex ICS3000型離子色譜儀，Dionex AS11分析柱及保護柱，Dionex VWD紫外檢測器。 1.2 樣品前處理 準確稱取樣品0.1g，加水溶解后，加入2ml乙腈，充分混勻后，4放置沉降10min，取出后用10000 rpm高速離心機離心10min，取上層清液4ml，

4、用氮氣吹干后，用水定容至8ml，定容后的液體過0.22m尼龍濾膜，之后過Dionex RP柱，濾液上機分析。 1.3 色譜條件 流動相A：0.04%磷酸二氫鉀，pH3.0；流動相B：0.04% 磷酸二氫鉀/14% 高氯酸鈉，pH3.0.二元梯度：0min，80%A；60min，10%A；61-75min，80%A； 流速：0.22mL/min柱溫：30。 2. 結(jié)果與討論 2.1 樣品前處理 樣品中含有大分子蛋白，如去除不徹底，容易降低柱效，造成分離度下降、保留時間縮短。使用乙腈沉淀，Dionex RP柱過濾，可有效去除樣品中蛋白，延長色譜柱壽命，保證實驗重現(xiàn)性良好。 2.2 色譜柱的選擇 樣

5、品去除蛋白后，含有的雜質(zhì)與主成分均為硫酸化的多糖。硫酸化多糖在強電解質(zhì)溶液中，可電離成為陰離子。根據(jù)其硫酸化程度的不同，在陰離子交換柱上有不同的保留。在戴安AS11色譜柱上，肝素與多硫酸軟骨素及其他離子均有較好分離。分離色譜圖如圖1所示。 圖1 肝素鈉粗品中多硫酸軟骨素含量測定色譜圖3. 結(jié)論 該方法準確度、精密度均較高,且操作簡便,適合于聚明膠肽注射液中琥珀酸的測定。 參考文獻 1. GAO Ning-guo(高寧國),CHENG Xiu-lan(程秀蘭),YANG Jing(楊敬),et al. ,Progress in biotechnology(生物工程進展),1999, 19( 5):4 2.WEN Qiang(溫強),China pharmaceuticals(中國藥業(yè)),1998,8(8): 57 3.CHEN Rui(陳銳)，ZHOU Ling(周玲), Journal of snake(蛇志雜志),1997,9(3):4 4.PENG Jing-wei(彭晶瑋)，LI Zheng-bin(李正斌), Chinese Journal of hospital pharmacy(中國院藥學雜志),1998,18(6):259 5. XU Yi