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1、土壤微生物分離純化及測數(shù) 作者:土壤微生物|分離純化及測數(shù) 來源:生物秀 時(shí)間:2008-5-28 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊? 了解土壤微生物的分離純化及測數(shù)的基本原理。2 學(xué)習(xí)并掌握微生物分離純化技術(shù)方法。3 學(xué)習(xí)并掌握微生物平板菌落計(jì)數(shù)的技術(shù)方法。二、基本原理土壤是微生物生活的大本營,其中含有大量不同類型的微生物,可按照一定的方法將各類微生物通過分離進(jìn)行純培養(yǎng),并能對特定類群進(jìn)行數(shù)量測定?;驹硎峭ㄟ^稀釋使菌體細(xì)胞充分分散,單細(xì)胞得以生長發(fā)育形成菌落,可使用稀釋法或平板劃線法進(jìn)一步純化,還可通過平板菌落計(jì)數(shù),推算單位重量土壤樣品含有微生物的數(shù)量。三、實(shí)驗(yàn)步驟(一)土壤樣品采集在待測田塊上,若田塊
2、面積小于50平方米則按對角線三點(diǎn)采樣,若田塊面積大于50平方米按對角線五點(diǎn)采樣。采樣一般定點(diǎn)于耕作層0-20cm,先除去表土1-2cm,以無菌鏟采土足量充分混勻后用無菌塑料袋分裝。(二)好氣性細(xì)菌的分離純化及測數(shù)1.制備土樣稀釋液吹吸三次混勻無菌操作另留一管不稀釋留作對照(CK)2.培養(yǎng)基的準(zhǔn)備融化牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,融化后保溫在48。并取6個無菌培養(yǎng)皿,分別在皿底貼好標(biāo)簽,注明10-5、10-6、CK(每個稀釋度要兩個平行皿,對照要兩個平行皿)。3.傾注法接種先按10-6,10-5的順序?qū)⒉煌♂尪染鷳乙航尤雽?yīng)平皿中(每個平皿接入1ml),再向每個平皿傾注約15 ml的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(48)待冷凝,混合均勻。4.保溫培養(yǎng)將已經(jīng)接種的平皿靜置10min后,放入溫箱倒置培養(yǎng)3-5日(30),觀察結(jié)果。5.分區(qū)劃線法純化平板劃線分離,其劃線方法有以下兩種:6.計(jì)數(shù)要求30300之間計(jì)數(shù)。CK除外。每克濕土樣細(xì)菌數(shù)量平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)土壤樣品水分系數(shù)1(1樣品水分百分?jǐn)?shù))土壤樣品細(xì)菌數(shù)量(個克干土)每克濕土樣細(xì)菌數(shù)量×樣品水分系數(shù)四實(shí)驗(yàn)報(bào)告及思考題1記錄計(jì)數(shù)結(jié)果并計(jì)算土壤樣品含菌數(shù)。2平板菌落計(jì)數(shù)的
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