2014《藥理學》實驗

1、藥理學實驗講義實驗一藥理學實驗的根本知識和根本技術(shù)一、目的1. 掌握根本操作，鍛煉動手、動腦能力；2. 更好地掌握藥理學根本理論知識；3. 培養(yǎng)科學思維二、根本要求1. 實驗前：預習實驗內(nèi)容并復習相關(guān)理論知識；2. 實驗時實驗器材要妥善保管；實驗操作按步驟進展，仔細觀察實驗中出現(xiàn)的現(xiàn)象，實事求是地做好記錄; 注意節(jié)約實驗藥品；維持良好的課堂紀律。3. 實驗后各組同學將實驗動物處死，實驗臺擦干凈，將實驗方盤送回準備室；值日生搞好實驗室衛(wèi)生，將死亡動物送至指定場所；書寫實驗報告。三、實驗報告的書寫1.題目2.目的3.原理4.材料:實驗動物，器材，藥品5.方法:用自己的語言簡單扼要描述出來；6.結(jié)果

2、:要求真實、清楚；7.討論:將實驗結(jié)果進展比擬、分析；實驗中有哪些不足之處；結(jié)果異?；蚴〉脑?；8.結(jié)論：將實驗結(jié)果進展歸納總結(jié)，應帶有提示性質(zhì)。四、藥理學實驗實驗設(shè)計原如此1隨機原如此按照機遇均等的原如此進展分組。其目的是使一切干擾因素造成的實驗誤差減少，而不受實驗者主觀因素或其他偏性誤差的影響。2. 對照原如此空白對照指在不加任何處理的條件下進展觀察對照；陰性對照也稱假處理對 照給予生理鹽水或不含藥物的溶媒；陽性對照也稱標準對照指以經(jīng)典藥物 在標準條件下與實驗藥進展對照。3. 重復原如此能在類似的條件下，把實驗結(jié)果重復出來，才能算是可靠的實驗，重復實驗除增 加可靠性外，也可以了解實驗變異

3、情況。五、實驗動物1. 動物的選擇1小白鼠：適用于需大量動物的實驗，如某些藥物的篩選，半數(shù)致死量的測 定。也較適用于避孕藥實驗、抗炎鎮(zhèn)痛藥實驗、中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥實驗、抗腫瘤藥 與抗衰老藥實驗等。2大白鼠：比擬適用于抗炎藥物實驗，血壓測定、利膽、利尿藥實驗，也可 用于進展亞急性和慢性毒性實驗。3豚鼠：因其對組胺敏感，并易于致敏，故常被選用于抗過敏藥、平喘藥和 抗組胺藥的實驗。也常用于離體心臟、心房、腸管實驗。又因它對結(jié)核敏感，常 用于抗結(jié)核病藥的實驗。4家兔：常用于觀察研究腦電生理作用，藥物對小腸的作用。由于家兔體溫 變化敏感，也常用于體溫實驗，用于熱原檢查。5狗：狗是記錄血壓，呼吸最常用的大動物

4、。還可利用狗做成胃痿、腸痿， 以觀察藥物對胃腸蠕動和分泌的影響。在進展慢性毒性實驗時，也常采用狗。2. 實驗動物的編號狗、兔等較大的動物可用特制的鋁質(zhì)牌固定在頸部或耳上。大鼠、小鼠如為白色可用黃色苦味酸在不同的體表標志上標記。3. 動物固定與給藥1小鼠捉拿小鼠性情較溫順，一般不會咬人，比擬容易抓取固定。通常用右手提起小 鼠尾巴將其放在鼠籠蓋或其它粗糙外表上， 在小鼠向前掙扎爬行時，用左手拇指 和食指捏住其雙耳與頸部皮膚，將小鼠置于左手掌心、無名指和小指夾其背部皮 膚和尾部，即可將小鼠完全固定。在一些特殊的實驗中，如進展尾靜脈注射時， 可使用特殊的固定裝置進展固定，如尾靜脈注射架或?qū)Ｓ眯∈蠊潭ㄍ?/p>

5、。如要進展 手術(shù)或心臟采血應先行麻醉再操作，如進展解剖實驗如此必須先行無痛處死后再 進展。2小鼠灌胃用左手固定鼠，右手持灌胃器，將灌胃針從鼠的口腔插入，壓迫鼠的頭部， 使口腔與食道成一直線，將灌胃針沿咽后壁慢慢插入食道，可感到輕微的阻力 ， 此時可略改變一下灌胃針方向，以刺激引起吞咽動作，順勢將藥液注入。一般灌 胃針插入小鼠深度為34cm大鼠或豚鼠為46cm。常用灌胃量小鼠為1ml, 大鼠14ml,豚鼠15ml。3小鼠腹腔注射先將動物固定，腹部用酒精棉球擦試消毒，然后在左或右側(cè)腹部將針頭刺入 皮下，沿皮下向前推進約0.5厘米，再使針頭與皮膚呈45度角方向穿過腹肌刺 入腹腔，此時有落空感，回抽無

6、腸液、尿液后，緩緩推入藥液。此法大小鼠用的 較多。4皮下注射注射時用左手拇指與食指輕輕捏起皮膚，右手持注射器將針頭刺入，固定后 即可進展注射。一般小鼠在背部或前肢腋下，大鼠在背部或側(cè)下腹部；豚鼠在后 大腿內(nèi)側(cè)、背部等脂肪少的部位；兔在背部或耳根部注射；蛙可在脊背部淋巴囊 注射；狗多在大腿外側(cè)注射，拔針時，輕按針孔片刻，防藥液逸5家兔捉拿右手握住兔頸背部皮膚輕輕提起，再以左手托起其臂部，使兔呈坐位姿勢。6家兔耳緣靜脈注射采用外耳緣靜脈，因其表淺易固定。注射部位除毛，用 75%的酒精消毒，手 指輕彈兔耳，使靜脈充盈，左手食指和中指夾住靜脈的近心端， 拇指繃緊靜脈的 遠心端，無名指與小指墊在下面，右

7、手持注射器，盡量從靜脈的遠端刺入血管， 移動拇指于針頭上以固定，放開食、中指，將藥液注入，然后拔出針頭，用手壓 迫針眼片刻以止血。實驗二影響藥物效應的因素給藥途徑目的觀察藥物從不同途徑引入機體可能產(chǎn)生不同的作用；觀察不同給 藥途徑對藥物作用速度、強度的影響。原理 肌肉注射或靜脈注射對中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制、解痙。鎂離子抑制運動神經(jīng)末 梢對乙酰膽堿的釋放，阻斷神經(jīng)和肌肉傳導，使骨骼肌松弛，故能有效地預防和 控制抽搐子癇，但是注射過量鎂離子會鎂因會與鈣發(fā)生拮抗作用導致乙酰膽堿與鈣離子的偶聯(lián)作用減弱，使心肌細胞興奮性減弱，從而腦供血不足，而死亡; 口服難以吸收，使腸腔內(nèi)滲透壓升高，大量水分使腸道擴 X,使

8、腸壁感受 器受到刺激，導致腹瀉；器械1ml注射器2支，小白鼠胃管一支,。藥物飽和硫酸鎂溶液（飽和度為1000ml,水中溶解440g硫酸鎂）。動物小白鼠2只。方法取體重大小相似的小白鼠兩只，稱好體重，按下面兩種途徑給藥，觀察并記 錄。 飽和硫酸鎂， 用同樣劑量灌胃。結(jié)果記錄：將實驗結(jié)果填入下表。表1:硫酸鎂作用結(jié)果鼠 號藥物劑量給藥途徑反 應1飽和硫酸鎂0.2ml/10g體重肌注2灌胃思考題同一種藥物以不同途徑給藥時為什么會影響藥物效應?實驗三藥物的鎮(zhèn)痛作用、目的：了解熱板法的實驗原理，觀察阿司匹林的鎮(zhèn)痛作用二、原理：小鼠的足底無毛，皮膚裸露，在溫度55±C的金屬板上產(chǎn)生疼痛反響，表現(xiàn)

9、 為舔后足，踢后腿等現(xiàn)象。鎮(zhèn)痛藥可提高痛閾，推遲小鼠疼痛出現(xiàn)時間。三、材料：雌性小鼠2只、熱板儀、0.4%乙酰水楊酸溶液、生理鹽水、 四、方法：1. 準備工作調(diào)定熱板儀溫度使之恒定于55±oCo2. 小鼠的選擇與正常痛閾的測定取小鼠數(shù)只，依次熱板儀上，按“開始鍵記錄時間。自放入熱板儀至出 現(xiàn)舔后足所需的時間秒作為該鼠的痛閾值。凡在30秒內(nèi)不舔足或逃避者棄置 不用。取篩選合格的小鼠3只，各鼠編號后重復測其正常痛閾值一次，將所測兩 次正常痛閾平均值作為該鼠給藥前痛閾值。3. 給藥與給藥后痛閾值測定各組的動物注射如下藥品，并記錄給藥時間。一只用0.4%乙酰水楊酸溶液400mg/kg；另一只

10、，用生理鹽水。給藥后10min、30min后各測小鼠痛閾值1次。60秒仍無反響，應將小鼠取出, 痛閾值以60秒計。4. 實驗完畢后，收集全實驗室數(shù)據(jù)按如下公式計算不同時間的各鼠痛閾提高百分 率：痛閾提高百分率x 100%給藥后平均痛閾值-給藥前平均痛閾值 給藥前平均痛閾值5. 以時間min為橫坐標，痛閾提高百分率為縱坐標，繪制各組的時-效曲線【須知事項】1本實驗應選用雌性小鼠，雄性小鼠遇熱時陰囊松弛下垂，與熱板接觸影響實驗 結(jié)果。2室溫應控制在13± 18C，此溫度小鼠對痛反響較穩(wěn)定。3正常痛閾30s、W 10s以與喜跳躍的小鼠均應棄用。4測痛閾時假如60s仍無反響，應立即取出小鼠，

11、以免燙傷足趾，且痛閾按 60s 計。實驗四藥物對小鼠自發(fā)活動的影響一、目的：觀察藥物對小鼠自發(fā)活動的影響，以分析藥物作用表現(xiàn)為興奮作用還是抑制 作用。二、原理：自發(fā)活動是正常動物的生理特征。自發(fā)活動的多少往往能反映中樞興奮或抑制作用狀態(tài)。鎮(zhèn)靜催眠藥均可明顯減少小鼠的自發(fā)活動。小鼠自發(fā)活動減少的程度與鎮(zhèn)靜催眠藥作用強度成正比。三、材料： 小鼠2只小鼠自主活動記錄儀、注射器1mix 2、天平、4%水合氯醛溶液。四、方法：取小鼠2只，稱體重，分別進展腹腔注射，對照組一只注射生理鹽水，另一只注射 4%水合氯醛溶液10ml/kg。給藥30mi n后將各組小鼠分別放人自主活動箱中，每隔 5mi n記錄1次

12、各組小 鼠活動數(shù)。連續(xù)觀察到20min比擬給藥組與對照組小鼠活動數(shù)，用公式計算各給 藥組小鼠20min累計自發(fā)活動抑制率： 對照組小鼠自發(fā)活動數(shù)-給藥組小鼠自發(fā)活動數(shù)自發(fā)活動抑制率=X 100%對照組小鼠自發(fā)活動數(shù)【須知事項】1小鼠應盡量選取活潑者，同性。2實驗前禁食禁水24h。3實驗最好在20E以上室溫下進展，室溫過低常影響小白鼠活動4. 實驗最好在上午做，以為小鼠的活動通常在中午與下午減少。實驗五藥物半數(shù)致死量LD50的測定一、實驗目的和原理掌握藥物半數(shù)致死量LD50的測定方法；掌握簡化機率單位法的計算方 法；了解急性毒性實驗的相關(guān)內(nèi)容與新藥安全性評價的內(nèi)容。藥物的急性毒性常以LD50來表

13、示，即能夠引起試驗動物 一半死亡的劑量。 在實驗設(shè)計合理并嚴格掌握實驗技術(shù)的條件下，藥物致死量的對數(shù)大多在半數(shù)致 死量的上下形成常態(tài)分布。通過計算可求出 LD50。本實驗了解藥物以水合氯醛為例引起一半動物死亡的藥物劑量(medianlethal dose, LD50)的測定方法和計算過程。二、實驗方法一探索劑量X圍取小鼠912只，以3只為一組，分成34組，包括組距較大的一系列劑量， 按組分別灌胃水合氯醛溶液，觀察出現(xiàn)的癥狀并記錄死亡數(shù)，找出引起0與100% 死亡率劑量的所在X圍，此即上下限劑量Dn與 Dn。二確定組數(shù)并計算各組劑量1. 確定組數(shù)G：可根據(jù)適宜的組距確定組數(shù)，一般用58個劑量組，

14、按 等比級數(shù)增減。2. 計算各組劑量：在找出Dm Dr和確定組數(shù)后，可按如下公式求出公比rr = lg-1IgDm-IgDn/G-l，再按公比計算各組劑量 D1Dm其中D仁Dn= 最小劑量。3. 配制等比稀釋藥液系列，使每只小鼠給藥容量相等，一般為00.25ml /10 g 體重。三進展正式實驗在預實驗所獲得的0箱口 100%致死量X圍內(nèi)，選用幾個劑量，盡可能使半數(shù)組 的死亡率都在50%以上，另半數(shù)組的死亡率都在50%以下。各組動物的只數(shù)應相 等或相差無幾，每組10只左右，動物的體重和性別要均勻分配。 完成動物分組和 劑量計算后，按組腹腔注射給藥。最好先從中劑量組開始，以便能從最初幾組動 物承

15、受藥物后的反響來判斷兩端的劑量是否適宜，否如此可隨時進展調(diào)整。四統(tǒng)計實驗結(jié)果給藥后經(jīng)一定時間，清點各組的死亡小鼠數(shù)。用改良寇氏法計算藥物的LD5O 公式為 LD50=Ig-1IgDm lgr(刀 P- 0.5)四、實驗結(jié)果要點：實驗日期、檢品的批號、規(guī)格、廠名、理化性狀、溶液的濃度、實驗 時室溫、小鼠的性別、體重、給藥途徑、劑量藥物的絕對量與溶液的容時量、 給藥時間、中毒癥狀、死亡時間、死亡率和 LD50的計算過程。結(jié)果記錄如下表。【注意】1、預試驗要摸準藥物引起0和100溉亡率劑量的所在X圍。2、 正式試驗時各劑量按等比級數(shù)分組，應防止最大劑量組的死亡小于80% 最小劑量組死亡率大于20%否

16、如此改用其他方法計算。3、室溫：20C為宜。4、認真觀察中毒癥狀情況。附：改良寇氏法組別藥物濃度濃度對數(shù)值死亡動物數(shù)死亡牽F1】*Dm2345"PLDslog'Ani-? （ E P-0.5 ）（公式 1）Ahi：最大劑最組劑量對數(shù)值k相鄰兩組劑量高劑量與低劑量之比的對數(shù)（相鄰兩組刈狄劑最妁P：各組動物死匸率，用小數(shù)表示（如果死亡率為£0%應寫成0.甜） 匸只各紐動物死亡率之總和n：每組動物數(shù)50= iX心二）（公式 2）£価；logLDo的標準誤AFlogLD50LD50 的 95%可信限=lo于土 1.960）（公式 3）LLbo的平均可信限=LD5o

17、±（LD5o的95%可信限的高限低限）/2 （公式4）注附：根據(jù)資料5個參考劑量為mg/kg825 mg/kg1100 mg/kg1375 mg/kgmg/kg新藥篩選的動物模型的建立一、目的：學習實驗動物模型的概念。學會建立幾種常見病的動物模型。二、實驗原理動物模型的概念科學研究是探索未知，實驗研究的結(jié)果往往會出乎意外，不受人為的控制， 所以關(guān)乎人類本身的研究，在人體上進展試驗，風險很大；對一些數(shù)量很少的珍 稀動物，或一些因體型龐大，不易實施操作的種類，往往用取材容易，操作簡便 的另一種動物來進展實驗研究，代替人類或原來的目標動物，這就是動物實驗。 為了保證這些動物實驗更科學、準確

18、和重復性好，用各種方法把一些需要研究的 生理或病理活動相對穩(wěn)定地顯現(xiàn)在標準化的實驗動物身上，供實驗研究之用。這就稱之為動物實驗中的動物模型動物模型在生物醫(yī)學中的意義。1. 可復制臨床上一些疾病不常見，如放射病、毒氣中毒、烈性傳染病、外 你腫瘤等。還有一些如遺傳性、免疫性、代謝性和內(nèi)分泌、血液等疾病，發(fā)生 開展緩慢、潛伏期長，病程也長，可能幾年或幾十年，在人體很難進展3世代以上 的連續(xù)觀察。人們可有意選用動物種群中發(fā)病率高的動物，通過不同手段復制出 各種模型，在人為設(shè)計的實驗條件下反復觀察和研究， 甚至可進展幾十世代的觀 察，同時也防止了人體實驗造成的傷害。2. 可按需要取樣 動物模型作為人類疾

19、病的 復制品，可按研究者的需要 隨時采集各種樣品或分批處死動物收集標本， 以了解疾病全過程，這是臨床難以 辦到的。3. 可比性一般疾病多為零散發(fā)生，在同一時期內(nèi)，很難獲得一定數(shù)量的定 性材料,而模型動物不僅在群體數(shù)量上容易得到滿足，而且可以在方法學上嚴格 控制實驗條件，在對飼養(yǎng)條件與遺傳、微生物、營養(yǎng)等因素嚴格控制的情況下， 通過物理、化學或生物因素的作用，限制實驗的可變因子，并排除研究過程中其 它因素的影響，取得條件一致的、數(shù)量較大的模型材料，從而提高實驗結(jié)果的可 比性和重復性，使所得到的成果更準確更深入。4. 有助于全面認識疾病的本質(zhì)在臨床上研究疾病的本質(zhì)難免帶有一定局 限性。許多病原體除

20、人以外也能引起多種動物的感染， 其癥狀體征表現(xiàn)可能不完 全一樣。但是通過對人畜共患病的比擬，如此可以充分認識同一病原體給不同機 體帶來的各種危害，使研究工作上升到立體的水平來揭示某種疾病的本質(zhì)。三、方法：實驗六抗胃動力不足藥物的動物篩選模型根本原理胃具有收納食物，對之進展消化、勻合、研磨，形成食糜節(jié)奏性的送入小腸的 作用,它們與底部胃壁的順應性擴X，胃體與胃竇部節(jié)律性收縮以與幽門括約肌的 規(guī)律性開放閉闔等有關(guān)。當食糜入腸后，在食糜的機械性以與化學性刺激下，通 過體液與神經(jīng)機制促使膽汁與胰液排入十二指腸，參加腸管的運動進展消化，吸 收與傳輸。消化系統(tǒng)的癥狀，諸如燒心、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉以與由

21、此由此 派生的水、電解質(zhì)和酸堿平衡紊亂乃至某些營養(yǎng)不良，其發(fā)病原因在一定程度上 都與胃腸道與/或胰膽管的運動失常有關(guān)；又由于消化道具有與外界相通，可以 直接接觸的特點，因而也就為消化系統(tǒng)的實驗室和臨床藥理學研究，提供了有利的 條件。在消化系統(tǒng)的癥狀中，胃動力不足、胃阻滯是常見的一種。而阿托品為阻 斷M膽堿受體的抗膽堿藥，其能降低胃平滑肌蠕動的幅度和頻率， 因此常用于胃 動力不足動物模型的建立實驗對象小鼠 3只18-22g。實驗試劑與器材1. 器材 小鼠灌胃器、眼科剪、眼科鑷、1mL注射器、放大鏡、電子天平、濾 紙。2. 試劑和藥品 嗎丁啉、硫酸阿托品、生理鹽水操作步驟取健康某某種小鼠3只，分為

22、空白對照組，模型組，嗎丁啉組?？瞻讓φ談e灌胃的生理鹽水，30min后，脫頸椎處死小鼠，打開腹腔，結(jié)扎 幽門和賁門，取出胃。模型組與嗎丁啉組小鼠腹腔注射硫酸阿托品 2mg/kg，給藥后30min后，模型 組灌胃的生理鹽水，嗎丁啉組灌胃12mg/kg的嗎丁啉，給藥后30min后，脫頸椎 處死小鼠，打開腹腔，結(jié)扎幽門和賁門，取出胃各取出的胃用濾紙擦干后稱全重，然后沿胃大彎剪開胃體，洗去胃內(nèi)容物 后擦干，觀察胃形態(tài)，稱凈重。以全重與凈重之差為指標比擬三組的胃排空能力。 綜合全班數(shù)據(jù)進展統(tǒng)計學分析。實驗七 實驗性胃潰瘍模型的建立與防治實驗目的1.學習小鼠胃潰瘍模型建立的方法。2 觀察藥物對實驗性胃潰瘍的防治作用。實驗原理消化性潰瘍（peptic ulcer）是由多種因素引起的一種常見病。正常情況下，機 體有胃黏液、胃黏膜屏障mucosal barrier、黏膜細胞更新以與胃、十二指腸 節(jié)律性運動功能等一系列保護性機理， 使胃、腸黏膜不受損傷。