茴三硫?qū)Υ笫缶凭八穆然贾赂卫w維化的防治作用

1、 作者單位:100029北京, 中日友好醫(yī)院消化內(nèi)科(房龍、馬安林、李靖濤、王遠(yuǎn)新、趙洪川 ; 中日友好醫(yī)院病理科(王泰玲茴三硫?qū)Υ笫缶凭八穆然贾赂卫w維化的防治作用房龍馬安林李靖濤王遠(yuǎn)新王泰齡趙洪川【摘要】目的復(fù)制大鼠酒精及四氯化碳致肝纖維化動(dòng)物模型, 觀察茴三硫?qū)ζ淦鸱乐巫饔玫膭┝看笮?。方法健康雄性Wistar 大鼠60只, 隨機(jī)分為6組, 實(shí)驗(yàn)持續(xù)4周。A 組(空白對(duì)照組 :生理鹽水灌胃, 每天1ml/100g 體重。B 組(模型組 :白酒灌胃, 每天1mg/100g 體重, 同時(shí)CCl 4腹腔內(nèi)每次注射0. 025mg/100g 體重, 每周2次。C 、D 、E 組(茴三硫小、中、大

2、劑量組 :在B 組基礎(chǔ)上預(yù)先灌胃茴三硫每天015、110、2. 0mg/100g 體重。F 組(陽(yáng)性對(duì)照組 :在B 組基礎(chǔ)上凱西萊預(yù)先灌胃, 每天10mg/100g 體重。第2周末、第4周末分別取血檢測(cè)A LT 、AST 、A LP ,G SH 2Px 、M DA 等項(xiàng)目。實(shí)驗(yàn)結(jié)束處死動(dòng)物, 取肝組織行病理檢驗(yàn)。結(jié)果酒精及四氯化碳可引起大鼠肝功能損害、脂質(zhì)過(guò)氧化加重, 組織學(xué)出現(xiàn)肝纖維化表現(xiàn)。給予茴三硫可明顯減輕這些改變。結(jié)論茴三硫?qū)Υ笫缶凭八穆然贾赂卫w維化有明顯防治作用?！娟P(guān)鍵詞】茴三硫; 酒精; 四氯化碳; 肝纖維化E ffect of anetholtrithione on the

3、fibrosisinduced by alcohol o f , Hospital , Beijing 100029, China【odel of liver fibrosis induced by alcohol and tetrachloride carbon ,and observe the effects of anetholtrithione. Methods Sixty male Wistar rats were divided randomly into six groups ,and experiment was continued for 4weeks. G roup A (

4、control group was perfused gastrically by saline at the dose of 1ml 100g -1d -1. The other groups were perfused gastrically by 56%alcohol at the dose of 1ml 100g -1d -1,and at the same time CCl 4was injected intraperitoneally at the dose of 0. 025mg/100g ,b. i. w. G roup C , D , E (small , middle an

5、d large dose of anetholtrithione was beforehand perfused gastrically by anetholtrithione at the dose of 0. 5, 1. 0, 2. 0mg 100g -1d -1. G roup F (control group of positive drug was beforehand perfused gastrically by tiopronin at the dose of 10mg 100g -1d -1. At the end of the 2nd week and the 4th we

6、ek A LT , AST , A LP , G SH 2Px , MDA were examined. When the ex 2periment was over ,rats were euthanized and the histopathologic alterations of liver were observed. R esults At the 2nd week and the 4th week , group B were obviously different from group A , C , D , E , F. G roup B showed significant

7、 heptic injury , in 2cluding increased A LT , AST , A LP , MDA and decreased G SH 2Px ,cellular necrosis , inflammatory in filtration and liver fibro 2sis. When com pared with group B , the heptic injury in grouup C , D , E , F were mild , especially group D. Conclusion Anetholtrithione has remarkab

8、le prevention and cure action of rat liver fibrosis.【K ey w ords 】Anetholtrithione ; Alcohol ; Carbon tetrachloride ; Iiver fibrosis 長(zhǎng)期飲酒可引起輕型酒精性肝病、酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纖維化、酒精性肝硬化等輕到重的病變, 統(tǒng)稱為酒精性肝病。國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道, 茴三硫具有保護(hù)肝細(xì)胞、抗氧化、降低血中膽固醇、促進(jìn)唾液分泌、防癌、抑制血小板聚集、調(diào)節(jié)免疫等作用, 臨床上主要用于治療慢性肝炎、高脂血癥、脂肪肝等, 而茴三硫?qū)凭愿螕p傷的作用鮮有報(bào)道。由于單純

9、酒精灌胃難以形成肝維維化模型, 本實(shí)驗(yàn)為了觀察茴三硫?qū)Ω卫w維化的作用將復(fù)制酒精及四氯化碳致肝纖維化模型, 采用茴三硫?qū)Υ笫筮M(jìn)行防治, 觀察其對(duì)動(dòng)物血液生化和病理改變的影響。材料與方法一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康雄性W1star 大鼠60只, 體重160200g , 為二級(jí)清潔動(dòng)物。嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例管理,24小時(shí)晝夜交替環(huán)境, 觀察1周后用于實(shí)驗(yàn)。采用高脂低蛋白飲食(玉米面占50%; 花生油占20%; 礦物質(zhì)及維生素占5%; 魚粉、豆粉、高梁粉占25% , 飲用自來(lái)水。二、實(shí)驗(yàn)藥物“二鍋頭”白酒(56度 ,CCl 4, 茴三硫(商品名:膽維他 , 凱西萊。924 三、動(dòng)物分組隨機(jī)分為6組, 每組10只

10、。A (空白對(duì)照組 :灌胃生理鹽水1m1100g 體重-1天-1, 共4周。B (模型組 :灌胃白酒1m1100g 體重-1天-1, 同時(shí)CCl 4腹腔內(nèi)注射0. 025m1100g 體重-1次-1(與花生油配成13混懸液 , 每周2次, 共4周。C 、D 、E (茴三硫小、中、大劑量組 :在B 組基礎(chǔ)上預(yù)先灌胃茴三硫0. 5、1. 0、2. 0mg 100g 體重-1天-1, 共4周。F (陽(yáng)性藥對(duì)照組 :在B 組基礎(chǔ)上預(yù)先灌胃凱西萊10mg 100g 體重-1天-1, 共4周。四、觀察指標(biāo)11第2周末、第4周末分別取血檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(LT 、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST 、堿性磷酸酶(Alkalin

11、e Phos 2phatase ,AIP , 谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(G lutathione Peroxi 2dase ,G SH 2Px 、丙二醛(Malondialdehyde ,MDA 等項(xiàng)目。21第4周末處死動(dòng)物, 取肝組織標(biāo)本, 福爾馬林固定,HE 、MASS ON 染色, 作光鏡檢查病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn):(-(±(+; 彌漫性病變, <33區(qū)(+ ; 彌漫性病變,33%66%區(qū)(+ ; 彌漫性病變, >66%或達(dá)到肝腺泡區(qū)(+ 。肝小葉內(nèi)炎癥、壞死:無(wú)(- ; 偶見(± ; 散在小壞死灶(+ ; 時(shí)見壞死灶(+ ; 大壞死灶, 彌漫存在于肝小葉(+ ; 橋接壞

12、死(+ 。纖維化:無(wú)(- ; 中央靜脈或匯管區(qū)周圍輕度纖維化(; 中央靜脈間有纖維隔形成, 但尚未連接成環(huán)(; 中央靜脈間纖維隔相連成環(huán)形, 匯管區(qū)位于其中央(; 中央靜脈間纖維隔相連成環(huán)形, 匯管區(qū)位于其中央, 并且在中央靜脈和匯管區(qū)之間出現(xiàn)纖維隔(; 中央靜脈間纖維隔相連成環(huán)形, 匯管區(qū)位于其中央, 并且在中央靜脈和匯管區(qū)之間出現(xiàn)明顯纖維隔(。病理計(jì)分標(biāo)準(zhǔn):(- 記0分; (± 記1分; (+、 記3分; (+、 記6分; (+、記9分; (+、記12分; ( 記15分。各組計(jì)量資料以 x ±s 表示,SPSS10. 0軟件進(jìn)行t 檢驗(yàn), P <0. 05為差異顯

13、著。病理結(jié)果以SPSS10. 0軟件進(jìn)行秩和檢驗(yàn), P <0. 05為差異顯著。結(jié)果一、肝功能第2周末、第4周末B 組與A 組比較,A LT 、AST 、A LP 出現(xiàn)顯著改變, 提示酒精及四氯化碳引起大鼠肝功能損害。C 、D 、E 、F 組A LT 、AST 、A LP 則明顯改善, 其中D 組程度最顯著(如表1、2、3、4 。表1各組大鼠血清A LT 、AST分組A LT (IU/L AST (IU/L 第2周末第4周末第2周末第4周末A 77. 60±8. 9075. 00±9. 31194. 80±31. 42176. 80±28. 58B

14、 913. 67±83. 42436. 00±52. 841639. 56±111. 79690. 78±40. 97C 598. 00±39. 75371. 11±27. 80954. 33±79. 62615. 11±28. 15D 89. 78±9. 1667. 56±8. 95209. 78±34. 45183. 67±32. 17E 343. 22±56. 21173. 89±16. 10549. 67±77. 84408. 44

15、77;25. 33F205. 90±59. 2261. 67±11. 49402. 90±62. 32229. 56±23. 32表2各組大鼠血清A LT 、AST 統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果(P 值分組A LTAST第2周末第4周末第2周末第4周末B vs C <0. 001<0. 001<0. 001<0. 001B vs D <0. 001<0. 001<0. 001<0. 001B vs E <0. 001<0. 001<0. 001<0. 001B vs F <0. 001<

16、0. 001<<0. 001F vs E<<0. <0. 001表3A LPA LP (I U/L 第2周末第4周末A 183. 90±26. 23158. 40±24. 21B 504. 33±39. 67423. 56±32. 75C 371. 56±36. 07318. 33±44. 86D 172. 44±23. 34163. 67±27. 44E 314. 67±28. 66236. 67±18. 87表4各組大鼠血清A LP 統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果(P 值 分組A

17、 LP第2周末第4周末B vs C <0. 001<0. 001B vs D <0. 001<0. 001B vs E <0. 001<0. 001B vs F <0. 001<0. 001F vs E<0. 05<0. 001二、脂質(zhì)過(guò)氧化第2周末、第4周末B 組大鼠脂質(zhì)過(guò)氧化程度加重, 表現(xiàn)為G SH 2Px 水平降低,MDA 水平升高。預(yù)先給予茴三硫、凱西萊可明顯減輕增加的脂質(zhì)過(guò)氧化, 以D 組最顯著(如表5、6 。表5各組大鼠血G SH 2Px 、MDA分組G SH 2Px (U/m l M DA (U/m l 第2周末第4周

18、末第2周末第4周末A 66. 830±5. 94467. 690±5. 0557. 280±1. 7997. 200±2. 269B 54. 800±4. 01644. 689±5. 48610. 222±2. 42215. 356±2. 302C 55. 822±4. 05050. 511±4. 3069. 278±2. 16011. 256±2. 065D 68. 300±2. 15260. 333±3. 9677. 556±1. 1689.

19、 289±1. 921E 63. 522±4. 94752. 589±4. 1308. 333±1. 38011. 500±2. 927F 60. 210±5. 68951. 167±4. 0438. 070±1. 56112. 478±2. 337034 表6各組大鼠血G SH 2Px 、MDA 統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果(P 值分組G SH 2PxM DA第2周末第4周末第2周末第4周末B vs C >0. 05<0. 05>0. 05<0. 01B vs D <0. 001<0

20、. 001<0. 01<0. 001B vs E <0. 01<0. 01>0. 05<0. 01B vs F <0. 05<0. 05<0. 05<0. 05F vs E>0. 05>0. 05>0. 05>0. 05三、肝臟病理學(xué)改變A 組:肝細(xì)胞放射狀圍繞中央靜脈排列, 小葉間纖維組織較少, 匯管區(qū)末見異常(如圖1 。B 組:肝細(xì)胞脂肪變性:表現(xiàn)為肝細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)明顯脂滴, 包括大泡性脂變和小泡性脂變, 兩種脂變?；旌洗嬖诨蛞砸环N為主。炎癥壞死:包括點(diǎn)灶狀壞死、中央靜脈周圍融合性壞死等形式。局部肝細(xì)胞消失

21、, 其間有少量單個(gè)核細(xì)胞及中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。肝纖維化:大部分表現(xiàn)為中央靜脈之間纖維隔形成, 未完全包繞(或存在細(xì)纖維隔包繞( ; 僅有1只大鼠中央靜脈間較粗纖維隔包繞, 匯管區(qū)位于其中心, 并且中央靜脈和匯管區(qū)之間出現(xiàn)纖維分隔(如圖2 。C 、D 、E 、F 組:較B 組明顯減輕, 以D 組最顯著(如圖3、4、5、6 。各組大鼠肝臟病理改變比較:酒精及四氯化碳可引起大鼠肝細(xì)胞脂肪變性、炎癥壞死、纖維化等病變, 預(yù)先給予茴三硫、凱西萊, 大鼠肝臟病變減輕, 以中劑量茴三硫組最顯著(如表7、8、9、10 。表7各組大鼠肝臟脂肪變性比較分組數(shù)量大泡性脂變例數(shù)小泡性脂變例數(shù)-±+-±

22、+A 101540001000000B 10212410505000C 9206100701100D 9306000702000E 10216100900100F1061219134 表8各組大鼠肝小葉內(nèi)炎癥、壞死比較分組數(shù)量肝小葉內(nèi)炎癥、壞死例數(shù)-±+A10244000B 10001630C 9107100D 9243000E 10136000表9各組大鼠肝臟纖維化比較分組數(shù)量肝臟纖維化例數(shù)-A101000000B 10002701C 9054000D 9072000E 10153100表10各組大鼠病理計(jì)分統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果(秩和檢驗(yàn), P 值肝細(xì)胞脂肪變性肝小葉炎癥壞死纖維化B vs

23、 C <0. 05<0. 01<0. 01B vs D <0. 01<0. 001<0. 001B vs E <0. 05<0. 01<0. 01B vs F <0. 01<0. 05<0. 05F vs E<0. 05<0. 05<0. 01討論型。B ,CCl 4的加入使得動(dòng)。氧化損傷、內(nèi)毒素、免疫反應(yīng)、缺氧等因素造成肝細(xì)胞壞死、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。肝臟K upffer 細(xì)胞、肝竇內(nèi)皮細(xì)胞激活后分泌多種活性因子、趨化因子、黏附分子以及活性氧中間產(chǎn)物, 刺激肝臟星狀細(xì)胞活化增生, 細(xì)胞外基質(zhì)合成增多, 形成肝

24、纖維化。與其他研究結(jié)果相似1,2。同時(shí)給予不同劑量茴三硫的C 、D 、E 組與B 組相比, 實(shí)驗(yàn)中及實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)大鼠肝功能、血脂、脂質(zhì)過(guò)氧化指標(biāo)出現(xiàn)不同程度改善, 病理學(xué)改變也與此相符。說(shuō)明茴三硫?qū)凭八穆然家鸬母闻K損害有顯著的防治作用, 以中劑量組最明顯。關(guān)于茴三硫?qū)λ穆然家l(fā)肝臟損傷的保護(hù)作用在Ansher SS 等3研究中也得到證實(shí)。茴三硫(anetholtrithione 化學(xué)名為52(對(duì)甲氧苯基 21,22二硫環(huán)戊242烯232硫酮。由于化學(xué)結(jié)構(gòu)中含S 2S 鍵和C =S 鍵, 處于不飽和五元環(huán)結(jié)構(gòu)中, 因而硫的活性異常高。Davies MH 等研究4認(rèn)為, 茴三硫可以明顯增加

25、肝臟谷胱甘肽(G SH 水平, 顯著增加谷氨酰半肽氨酸合成酶(G CS 、谷胱甘肽還原酶(G SSG 2R 、谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶(G ST 活性, 從而顯著增強(qiáng)肝臟細(xì)胞活力, 改變與谷胱甘肽結(jié)合的化合物的毒性。MansuyD 等研究5發(fā)現(xiàn), 茴三硫?qū)σ蚧瘜W(xué)方法或酶法誘發(fā)的小鼠肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化均有明顯抑制作用, 可能與其結(jié)構(gòu)中含有二硫硫酮有關(guān)?？傊钊虮蛔C明是強(qiáng)有力的具有細(xì)胞保護(hù)性肽基的抗氧化劑。, 例如乙醛與、P450酶系代; P450酶系代謝、并進(jìn)一步形成肝纖維化。(G ST 可以催化谷胱甘肽(G SH 與乙醛結(jié)合, 形成無(wú)毒化合物排出體外。因此一方面茴三硫通過(guò)增加胱甘肽水平和谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶活性的雙重作用加速乙醛的代謝, 降低乙醛對(duì)肝細(xì)胞的損傷。另一方面茴三硫能夠減低自由基活性, 從而減輕酒精及四氯化碳誘發(fā)的肝臟毒性、減緩纖維化形成。本實(shí)驗(yàn)成功復(fù)制了大鼠酒精及四氯化碳致肝纖維化動(dòng)物模型, 茴三硫?qū)ζ溆忻黠@的防治作用, 以中劑量組最為顯著。參考文獻(xiàn)1Hall PD , Plummer JL , Ilsley AH , et al. Hepatic fibrosis and cirrhosis afterchronic adm inistration of alcohol and “l(fā)ow 2dose ”carb