肉蓯蓉多糖的免疫調(diào)節(jié)活性及吸收特性研究

1、肉蓯蓉多糖的免疫調(diào)節(jié)活性及吸收特性研究    英文題名 Study on the Immune Pharmacology and Absorption Character of Polysaccharides of Cistanche Deserticola  關(guān)鍵詞 肉蓯蓉多糖; 淋巴細(xì)胞增殖; 巨噬細(xì)胞活化; 口服吸收; Caco-2; 細(xì)胞模型; 英文關(guān)鍵詞 polysaccharides of cistanche deserticola （CDPS）; lymphocytes Proliferation; macrophage acti

2、vation; oral administration absorption; Caco-2 cell model; 中文摘要 目的通過考察肉蓯蓉多糖(polysaccharides of Cistanche deserticola CDPS)對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖及巨噬細(xì)胞活化的作用,研究肉蓯蓉多糖的免疫調(diào)節(jié)藥理學(xué)活性,并通過不同角度和層次對(duì)其吸收特性進(jìn)行研究。 方法MTT法檢測小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖。環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide CTX)復(fù)制免疫功能低下的動(dòng)物模型,分別測定正常及免疫低下動(dòng)物脾臟、胸腺指數(shù)。胸腺細(xì)胞增殖法測定白細(xì)胞介素-2(IL-2)活性。 采用中性紅法測定小鼠腹

3、腔巨噬細(xì)胞吞噬活性;Griess試劑法測定NO釋放量;L929細(xì)胞法及小鼠胸腺細(xì)胞法測定TNF-及IL-1釋放。碳粒廓清法測定小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能。 在建立的Caco-2單層細(xì)胞模型上通過測定每孔電阻值(R_(true tissue),比較膜兩側(cè)堿性磷酸酶(ALP)活性,確定Caco-2細(xì)胞單層的可靠性。測定CDPS經(jīng)Caco-2單層細(xì)胞模型AB 3h轉(zhuǎn)運(yùn)后受側(cè)濃度,計(jì)算其藥效P_(app)值,從體外模型判斷CDPS的吸收特性;經(jīng)體外和體內(nèi)口服給藥藥效比較及口服給藥途徑和腹腔注射給藥途徑藥效的比較從不同角度對(duì)肉蓯蓉. 英文摘要 Objective To study the immunomo

4、dulatory activity of polysaccharides of Cistanche deserticola (CDPS) was assayed by macrophages promoting lymphocyte proliferation and activating macrophage. The absorptive character of CDPS was inveatigated by the comparation of different model systems. Methods The lymphocyte proliferation with or

5、without mitogen was assessed by MTT method in vitro. The immunosuppression mice were induced by cyclophosphamide, and the spleen and thymus were weighted up 英漢及縮略語對(duì)照表 7-8 中文摘要 8-10 Abstract 10-12 前言 13-18     1 植物多糖的藥理學(xué)活性研究進(jìn)展 13     2 植物多糖吸收特性相關(guān)研究 13-14   

6、0; 3 肉蓯蓉多糖的研究進(jìn)展 14     4 本課題的切入點(diǎn) 14-15     參考文獻(xiàn) 15-18 第一部分 肉蓯蓉多糖的促淋巴細(xì)胞增殖作用 18-31     1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器 18-19         1.1 實(shí)驗(yàn)材料 18         1.2 儀器 18-19     2 實(shí)驗(yàn)方法 19-21   

7、;      2.1 體外實(shí)驗(yàn) 19-20             2.1.1 受試藥液的配制: 19             2.1.2 肉蓯蓉多糖對(duì)脾細(xì)胞的58h細(xì)胞毒 19             2.1.3 肉蓯

8、蓉多糖對(duì)未活化脾淋巴細(xì)胞的增殖作用 19             2.1.4 肉蓯蓉多糖對(duì)LPS活化的B淋巴細(xì)胞和的增殖作用 19-20             2.1.5 肉蓯蓉多糖對(duì)ConA活化的T淋巴細(xì)胞的增殖作用 20             2.1.6 肉蓯蓉

9、多糖對(duì)脾淋巴細(xì)胞IL-2釋放的作用 20         2.2 體內(nèi)實(shí)驗(yàn) 20-21             2.2.1 對(duì)正常小鼠免疫器官重量影響 20             2.2.2 對(duì)免疫功能低下小鼠免疫器官重量影響 20-21      

10、0;  2.3 統(tǒng)計(jì)分析 21     3 結(jié)果 21-28         3.1 體內(nèi)實(shí)驗(yàn) 21-27             3.1.1 肉蓯蓉多糖對(duì)脾細(xì)胞的58h細(xì)胞毒 21-22             3.1.2 肉蓯蓉多糖對(duì)未活化脾淋巴細(xì)胞的增殖作用 22

11、-23             3.1.3 肉蓯蓉多糖對(duì)LPS活化的B淋巴細(xì)胞和的增殖作用 23-24             3.1.4 肉蓯蓉多糖對(duì)ConA活化的T淋巴細(xì)胞的增殖作用 24-25             3.1.5 肉蓯蓉多糖對(duì)脾淋巴細(xì)胞IL-2釋放

12、的作用 25-27         3.2 體內(nèi)實(shí)驗(yàn) 27-28             3.2.1 對(duì)正常小鼠免疫器官重量影響 27             3.2.2 對(duì)免疫功能低下小鼠免疫器官重量影響 27-28     4 討論 28-29   

13、60; 參考文獻(xiàn) 29-31 第二部分 肉蓯蓉多糖對(duì)巨噬細(xì)胞功能的影響 31-51     1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器 31-32         1.1 實(shí)驗(yàn)材料 31         1.2 儀器 31-32     2 實(shí)驗(yàn)方法 32-36         2.1 體外實(shí)驗(yàn) 32-35    

14、0;        2.1.1 受試藥液的配制: 32             2.1.2 肉蓯蓉多糖對(duì)RAW264.7細(xì)胞24h細(xì)胞毒 32             2.1.3 肉蓯蓉多糖對(duì)RAW264.7細(xì)胞NO釋放的影響 32-33       

15、;      2.1.4 CDPS對(duì)地塞米松(DEX)免疫抑制的RAW264.7細(xì)胞NO釋放的影響 33             2.1.5 肉蓯蓉多糖對(duì)RAW264.7細(xì)胞TNF-釋放的影響 33-34             2.1.6 肉蓯蓉多糖對(duì)RAW264.7細(xì)胞IL-1釋放的影響 34   

16、60;         2.1.7 肉蓯蓉多糖對(duì)BALB/c小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的影響 34-35             2.1.8 肉蓯蓉多糖對(duì)BALB/c小鼠腹腔巨噬細(xì)胞NO釋放的影響 35         2.2 體內(nèi)實(shí)驗(yàn) 35-36        

17、60;    2.2.1 肉蓯蓉多糖對(duì)化療藥環(huán)磷酰胺(CTX)致免疫功能下降的影響(碳粒廓清法) 35-36         2.3 統(tǒng)計(jì)分析 36     3.結(jié)果 36-47         3.1 體外實(shí)驗(yàn) 36-46             3.1.1 肉蓯蓉多糖對(duì)RAW264.7

18、細(xì)胞24h細(xì)胞毒 36-37             3.1.2 CDPS對(duì)RAW264.7細(xì)胞NO釋放的影響 37-39             3.1.3 肉蓯蓉多糖對(duì)地塞米松(DEX)免疫抑制的RAW264.7細(xì)胞NO釋放的影響 39-41            

19、 3.1.4 肉蓯蓉多糖對(duì)RAW264.7細(xì)胞TNF-釋放的影響 41-42             3.1.5 肉蓯蓉多糖對(duì)RAW264.7細(xì)胞IL-1釋放的影響 42-43             3.1.6 肉蓯蓉多糖對(duì)BALB/c小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的影響 43-44         

20、    3.1.7 肉蓯蓉多糖對(duì)BALB/c小鼠腹腔巨噬細(xì)胞NO釋放的影響 44-46         3.2 體內(nèi)實(shí)驗(yàn) 46-47             3.2.1 肉蓯蓉多糖對(duì)化療藥(CTX)致免疫功能下降的影響 46-47     4 討論 47-48         4.1 巨噬

21、細(xì)胞與免疫 47         4.2 巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子與免疫 47-48         4.3 單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能與免疫 48     參考文獻(xiàn) 48-51 第三部分 肉蓯蓉多糖吸收特性的研究 51-73     1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器 51-52         1.1 實(shí)驗(yàn)材料 51-52   

22、      1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 52     2 實(shí)驗(yàn)方法 52-57         2.1 采用Caco-2細(xì)胞模型評(píng)價(jià)肉蓯蓉多糖口服吸收特征 52-54             2.1.1 Caco-2細(xì)胞模型的建立 52          &#

23、160;  2.1.2 Caco-2細(xì)胞模型的驗(yàn)證 52-53             2.1.3 肉蓯蓉多糖對(duì)Caco-2細(xì)胞24h細(xì)胞毒 53             2.1.4 肉蓯蓉多糖經(jīng)Caco-2細(xì)胞模型轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn) 53-54         2.2 肉蓯蓉多糖體外與體內(nèi)(口服)相關(guān)藥效指

24、標(biāo)對(duì)比研究 54-56             2.2.1 肉蓯蓉多糖對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響 54-55             2.2.2 肉蓯蓉多糖對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖的影響 55-56         2.3 肉蓯蓉多糖體內(nèi)不同給藥途徑(口服、腹腔)藥效對(duì)比研究 56    

25、;         2.3.1 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對(duì)(免疫抑制)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能影響的比較(碳粒廓清) 56             2.3.2 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對(duì)小鼠免疫器官重量影響的比較 56         2.4 統(tǒng)計(jì)分析 56-57     3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 57-68  

26、60;      3.1 采用Caco-2細(xì)胞模型評(píng)價(jià)肉蓯蓉多糖口服吸收特征 57-61             3.1.1 Caco-2細(xì)胞模型的驗(yàn)證 57-58             3.1.2 肉蓯蓉多糖對(duì)Caco-2細(xì)胞24h細(xì)胞毒作用 58-59       

27、;      3.1.3 肉蓯蓉多糖經(jīng)Caco-2細(xì)胞模型AB3h轉(zhuǎn)運(yùn) 59-61         3.2 肉蓯蓉多糖體外與體內(nèi)(口服)相關(guān)藥效指標(biāo)對(duì)比研究 61-66             3.2.1 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響 61-64         

28、60;   3.2.2 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖的影響 64-66         3.3 肉蓯蓉多糖體內(nèi)不同給藥途徑(口服、腹腔)藥效對(duì)比研究 66-68             3.3.1 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對(duì)(免疫抑制)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能影響的比較 66-67          

29、   3.3.2 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對(duì)小鼠免疫器官重量影響的比較 67-68     4、討論 68-71         4.1 通過Caco-2細(xì)胞模型(體外)研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 68-70             4.1.1 肉蓯蓉多糖口服吸收研究體外模型的選擇 68-69       &#

30、160;     4.1.2 Caco-2細(xì)胞模型的驗(yàn)證 69-70             4.1.3 肉蓯蓉多糖經(jīng)Caco-2細(xì)胞模型的轉(zhuǎn)運(yùn) 70         4.2 通過體外與體內(nèi)(口服)藥效比較研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 70-71         4.3 通過體內(nèi)不同給藥途徑藥效比較研究肉蓯蓉多

31、糖口服吸收特性 71         4.4 小節(jié) 71     參考文獻(xiàn) 71-73 結(jié)論 73-74 致謝 74-75 附 細(xì)胞照片 75-78         3.2 肉蓯蓉多糖體外與體內(nèi)(口服)相關(guān)藥效指標(biāo)對(duì)比研究 61-66             3.2.1 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響

32、 61-64             3.2.2 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖的影響 64-66         3.3 肉蓯蓉多糖體內(nèi)不同給藥途徑(口服、腹腔)藥效對(duì)比研究 66-68             3.3.1 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對(duì)(免疫抑制)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能影響的比較 66

33、-67             3.3.2 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對(duì)小鼠免疫器官重量影響的比較 67-68     4、討論 68-71         4.1 通過Caco-2細(xì)胞模型(體外)研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 68-70             4.1.1 肉蓯蓉多糖

34、口服吸收研究體外模型的選擇 68-69             4.1.2 Caco-2細(xì)胞模型的驗(yàn)證 69-70             4.1.3 肉蓯蓉多糖經(jīng)Caco-2細(xì)胞模型的轉(zhuǎn)運(yùn) 70         4.2 通過體外與體內(nèi)(口服)藥效比較研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 70-71  

35、60;      4.3 通過體內(nèi)不同給藥途徑藥效比較研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 71         4.4 小節(jié) 71     參考文獻(xiàn) 71-73 結(jié)論 73-74 致謝 74-75 附 細(xì)胞照片 75-78         3.2 肉蓯蓉多糖體外與體內(nèi)(口服)相關(guān)藥效指標(biāo)對(duì)比研究 61-66       

36、60;     3.2.1 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響 61-64             3.2.2 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖的影響 64-66         3.3 肉蓯蓉多糖體內(nèi)不同給藥途徑(口服、腹腔)藥效對(duì)比研究 66-68         

37、60;   3.3.1 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對(duì)(免疫抑制)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能影響的比較 66-67             3.3.2 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對(duì)小鼠免疫器官重量影響的比較 67-68     4、討論 68-71         4.1 通過Caco-2細(xì)胞模型(體外)研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 68-70    &#

38、160;        4.1.1 肉蓯蓉多糖口服吸收研究體外模型的選擇 68-69             4.1.2 Caco-2細(xì)胞模型的驗(yàn)證 69-70             4.1.3 肉蓯蓉多糖經(jīng)Caco-2細(xì)胞模型的轉(zhuǎn)運(yùn) 70      

39、60;  4.2 通過體外與體內(nèi)(口服)藥效比較研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 70-71         4.3 通過體內(nèi)不同給藥途徑藥效比較研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 71         4.4 小節(jié) 71     參考文獻(xiàn) 71-73 結(jié)論 73-74 致謝 74-75 附 細(xì)胞照片 75-78         3.2 肉蓯蓉多糖體外與體內(nèi)(口

40、服)相關(guān)藥效指標(biāo)對(duì)比研究 61-66             3.2.1 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響 61-64             3.2.2 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖的影響 64-66         3.3 肉蓯蓉多糖體內(nèi)不同給藥途徑(口服、腹腔)藥效對(duì)比研究

41、 66-68             3.3.1 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對(duì)(免疫抑制)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能影響的比較 66-67             3.3.2 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對(duì)小鼠免疫器官重量影響的比較 67-68     4、討論 68-71         4.

42、1 通過Caco-2細(xì)胞模型(體外)研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 68-70             4.1.1 肉蓯蓉多糖口服吸收研究體外模型的選擇 68-69             4.1.2 Caco-2細(xì)胞模型的驗(yàn)證 69-70             4.1.

43、3 肉蓯蓉多糖經(jīng)Caco-2細(xì)胞模型的轉(zhuǎn)運(yùn) 70         4.2 通過體外與體內(nèi)(口服)藥效比較研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 70-71         4.3 通過體內(nèi)不同給藥途徑藥效比較研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 71         4.4 小節(jié) 71     參考文獻(xiàn) 71-73 結(jié)論 73-74 致謝 74-75 附 細(xì)胞照片 75-78 &

44、#160;       3.2 肉蓯蓉多糖體外與體內(nèi)(口服)相關(guān)藥效指標(biāo)對(duì)比研究 61-66             3.2.1 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響 61-64             3.2.2 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖的影響 64-66   

45、60;     3.3 肉蓯蓉多糖體內(nèi)不同給藥途徑(口服、腹腔)藥效對(duì)比研究 66-68             3.3.1 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對(duì)(免疫抑制)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能影響的比較 66-67             3.3.2 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對(duì)小鼠免疫器官重量影響的比較 67-68    

46、; 4、討論 68-71         4.1 通過Caco-2細(xì)胞模型(體外)研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 68-70             4.1.1 肉蓯蓉多糖口服吸收研究體外模型的選擇 68-69             4.1.2 Caco-2細(xì)胞模型的驗(yàn)證 69-70   &

47、#160;         4.1.3 肉蓯蓉多糖經(jīng)Caco-2細(xì)胞模型的轉(zhuǎn)運(yùn) 70         4.2 通過體外與體內(nèi)(口服)藥效比較研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 70-71         4.3 通過體內(nèi)不同給藥途徑藥效比較研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 71         4.4 小節(jié) 71 

48、0;   參考文獻(xiàn) 71-73 結(jié)論 73-74 致謝 74-75 附 細(xì)胞照片 75-78         3.2 肉蓯蓉多糖體外與體內(nèi)(口服)相關(guān)藥效指標(biāo)對(duì)比研究 61-66             3.2.1 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響 61-64           &

49、#160; 3.2.2 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖的影響 64-66         3.3 肉蓯蓉多糖體內(nèi)不同給藥途徑(口服、腹腔)藥效對(duì)比研究 66-68             3.3.1 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對(duì)(免疫抑制)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能影響的比較 66-67           

50、0; 3.3.2 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對(duì)小鼠免疫器官重量影響的比較 67-68     4、討論 68-71         4.1 通過Caco-2細(xì)胞模型(體外)研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 68-70             4.1.1 肉蓯蓉多糖口服吸收研究體外模型的選擇 68-69