HX-21細(xì)菌鑒定

1、HX-21細(xì)菌鑒定/藥敏分析儀 該產(chǎn)品實(shí)現(xiàn)了臨床分離細(xì)菌種類的鑒定和抗生素敏感試驗(yàn)分析的標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化，使細(xì)菌鑒定種類更齊全、明細(xì)，藥物試驗(yàn)種類更為廣泛、標(biāo)準(zhǔn)，并做到定量化分析。產(chǎn)品性能基本達(dá)到國(guó)際先進(jìn)水準(zhǔn)，完全能夠滿足臨床實(shí)驗(yàn)室的要求，且有明顯的性能和價(jià)格優(yōu)勢(shì)。 HX-21細(xì)菌鑒定/藥敏分析儀 是用于對(duì)臨床分離獲得的細(xì)菌進(jìn)行種、屬鑒定和抗生素敏感試驗(yàn)分析的自動(dòng)化儀器。主要由細(xì)菌鑒定系統(tǒng)和藥敏試驗(yàn)系統(tǒng)兩部分組成，能夠檢查出感染的病原菌及其耐藥性，采取有效的治療措施。 二、技術(shù)背景 1. 細(xì)菌鑒定系統(tǒng)的作用和意義 20世紀(jì)70年代以來(lái)，由于世界人口快速增長(zhǎng)，旅游業(yè)迅猛發(fā)展，食品的機(jī)械化加工和全球

2、化供應(yīng)以及進(jìn)行侵入性醫(yī)學(xué)治療等，使人類有更多的接觸病原菌的機(jī)會(huì)；另一方面，由于全球人口老年化，以及放射和化學(xué)治療的使用，使部分人口的抵抗力顯著降低，對(duì)病原菌的易感性增加；此外，由于環(huán)境因素的影響以及濫用抗生素等，使細(xì)菌的毒力和致病性發(fā)生了改變，增加了細(xì)菌感染的危險(xiǎn)性。 從全球范圍來(lái)看，感染性疾病仍是導(dǎo)致人類死亡的第一原因。近年來(lái)，不斷有一些新的病原體出現(xiàn)，并且有一些過(guò)去已得到良好控制的病原菌又死灰復(fù)燃，嚴(yán)重危害了人類的身體健康，引起了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的普遍關(guān)注。1996年6月美國(guó)成立了由17個(gè)政府部門參與的“新現(xiàn)和再現(xiàn)傳染病工作組”，美國(guó)國(guó)防部建立并啟動(dòng)了“全球新發(fā)傳染病監(jiān)測(cè)與反應(yīng)系統(tǒng)”，1997年

3、世界衛(wèi)生日的主題就定為“全球警惕，采取行動(dòng)以防范新出現(xiàn)的傳染病”，1999年以來(lái)我國(guó)也將“嚴(yán)重傳染病的研究”列為國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究項(xiàng)目之一?？梢砸鹑祟惛腥镜牟≡谐砂偕锨ХN，對(duì)于每一例患者來(lái)說(shuō)，究竟是何種細(xì)菌引起的感染？是內(nèi)源性感染或是外源性感染？是醫(yī)院感染或是社會(huì)感染？是偶發(fā)感染或是大規(guī)模流行性感染？要明確這些問(wèn)題都必須進(jìn)行準(zhǔn)確、快速的病原學(xué)鑒定，可以說(shuō)病原學(xué)鑒定是監(jiān)測(cè)和防治傳染病流行和傳播的第一步，也是最關(guān)鍵的一步。“臨床細(xì)菌鑒定系統(tǒng)”就是為了滿足這一要求。 2. 藥敏試驗(yàn)分析系統(tǒng)的作用和意義 青霉素于1929年由Fleming發(fā)現(xiàn)，1940年用于臨床，此后，又有許多抗生素被相繼發(fā)現(xiàn)和合

4、成，使人類平均壽命從40歲提高到了65歲，全世界為之歡欣鼓舞，有人認(rèn)為“人類已經(jīng)掌握了對(duì)付細(xì)菌的有力武器，細(xì)菌感染性疾病再也不是危害人類健康的主要疾病了”。然而，就在青霉素使用不久，一些有見識(shí)之士就發(fā)出警告：“細(xì)菌已在地球上生存了幾億萬(wàn)年，抗生素對(duì)細(xì)菌而言僅僅是一種進(jìn)入自然界的新的因子，細(xì)菌必然會(huì)在與之斗爭(zhēng)中取得生存，我們決不能低估我們的敵人細(xì)菌的力量”。 事實(shí)果然如此，在抗生素投入使用至今僅僅60年間，很多細(xì)菌就對(duì)抗生素產(chǎn)生了嚴(yán)重的耐藥，有的甚至產(chǎn)生了多重耐藥，各國(guó)學(xué)者為之震驚，耐藥菌的出現(xiàn)被認(rèn)為是人類不合理使用抗生素的直接后果，同時(shí)也使人類面臨著抗生素發(fā)明以來(lái)最嚴(yán)峻的考驗(yàn)。WHO已呼吁全球

5、各國(guó)采取緊急措施杜絕多重耐藥菌株的出現(xiàn)和傳播；1997年歐共體專門撥款建立了一個(gè)跨國(guó)的微生物感染耐藥監(jiān)測(cè)網(wǎng)，以規(guī)范耐藥菌的測(cè)試方法和判斷標(biāo)準(zhǔn)。 藥敏試驗(yàn)分析系統(tǒng)可以使用規(guī)范的方法和標(biāo)準(zhǔn)，快速、準(zhǔn)確地了解每一菌株對(duì)不同類型抗生素的敏感性，可以對(duì)重大類型耐藥菌的傳播和流行進(jìn)行早期預(yù)警，因而，被譽(yù)為是臨床合理使用抗生素的“指南針”，是早期發(fā)現(xiàn)耐藥菌的“偵察兵”。 細(xì)菌鑒定的基本原理細(xì)菌鑒定的基本原理 一、細(xì)菌的分類與臨床 醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中，臨床細(xì)菌學(xué)工作者需要從各種臨床標(biāo)本中分離并識(shí)別出細(xì)菌是病原菌還是正常菌群或是條件致病菌，并將導(dǎo)致感染的病原菌按照分類學(xué)方法正確地鑒定到屬或種。而由于細(xì)菌的結(jié)構(gòu)和形態(tài)較為

6、簡(jiǎn)單，僅僅依靠形態(tài)學(xué)特征無(wú)法準(zhǔn)確區(qū)分。因此，需要結(jié)合細(xì)胞學(xué)、生理學(xué)、生物化學(xué)、免疫學(xué)等特征，同時(shí)以抗原結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、遺傳物質(zhì)（DNA）的分子結(jié)構(gòu)來(lái)闡明各種細(xì)菌間的親緣關(guān)系，從而在分類體系中準(zhǔn)確地定位。因此，細(xì)菌鑒定是一項(xiàng)操作繁瑣、技術(shù)難度較大的工作。 二、細(xì)菌鑒定的幾種方法 1、雙歧索引法：確定細(xì)菌的主要特性和次要特性，根據(jù)確定的反應(yīng)次序按照“非此即彼”的原則依次往下區(qū)分，直至將細(xì)菌準(zhǔn)確區(qū)分到最小鑒定單位即屬或種的水平。該方法適于手工操作，但是較為繁瑣，準(zhǔn)確性不高。 二、細(xì)菌鑒定的幾種方法 2、數(shù)值分類法：該方法以細(xì)菌的各種特性同等重要為理論基礎(chǔ)，根據(jù)每種生化反應(yīng)特性在不同細(xì)菌中出現(xiàn)的概率進(jìn)行全面

7、分析。通過(guò)比較待測(cè)菌與分類體系中已知菌的生化特性的相似性，判斷待測(cè)菌的歸屬。該方法適于計(jì)算機(jī)進(jìn)行大量的數(shù)據(jù)運(yùn)算，是自動(dòng)化分析儀器普遍采用的方法。 三、本儀器進(jìn)行細(xì)菌鑒定的數(shù)值編碼鑒定系統(tǒng)原理 （一）編碼 1、以數(shù)值分類法為基礎(chǔ)，篩選一組具有代表性的生化反應(yīng)試驗(yàn)。每一種生化反應(yīng)只有“陽(yáng)性”和“陰性”兩種可能性，計(jì)算機(jī)識(shí)別為“1”和“0”這兩個(gè)二進(jìn)制數(shù)字。 2、由于每種反應(yīng)在試驗(yàn)組合中的位置不同，其陽(yáng)性值按照“4、2、1位置計(jì)數(shù)法”分別轉(zhuǎn)換為4、2、1等數(shù)，陰性值則為0。 三、本儀器進(jìn)行細(xì)菌鑒定的數(shù)值編碼鑒定系統(tǒng)原理 3、每三個(gè)生化反應(yīng)的數(shù)值相加，得到一個(gè)八進(jìn)制的數(shù)字。15個(gè)生化反應(yīng)分為5組，從而

8、得到一個(gè)八進(jìn)制的5位數(shù)，此即為用于細(xì)菌鑒定的編碼。 4、分類體系中的每種細(xì)菌均根據(jù)其15個(gè)生化反應(yīng)結(jié)果的可能組合確定所有可能的編碼。由于一種細(xì)菌可以有多種反應(yīng)模式，因而也對(duì)應(yīng)多個(gè)編碼。而同一個(gè)編碼也可能對(duì)應(yīng)多種細(xì)菌。 (二）幾率的計(jì)算 每種細(xì)菌對(duì)于各種生化反應(yīng)結(jié)果為陽(yáng)性的幾率各不相同，對(duì)應(yīng)于編碼的15種反應(yīng)的幾率的乘積即為該細(xì)菌出現(xiàn)此編碼的幾率。一種細(xì)菌可能出現(xiàn)的所有編碼所對(duì)應(yīng)的幾率之和應(yīng)該等于1。 1、如果一個(gè)編碼只對(duì)應(yīng)一種細(xì)菌，無(wú)論其幾率的大小，可能為該種細(xì)菌的可能性（ID%）均為99.99%。 2、如果一個(gè)編碼對(duì)應(yīng)兩種以上的細(xì)菌，應(yīng)該計(jì)算每種細(xì)菌出現(xiàn)幾率所占的百分比（即ID%）。若ID%

9、99%，為該細(xì)菌的可能性極大；ID%90%，為該細(xì)菌的可能性較大；ID%80%，為該細(xì)菌的可能性較大，但需要補(bǔ)充試驗(yàn)進(jìn)一步確證。ID%80%，則無(wú)法區(qū)分為哪一種細(xì)菌，需要通過(guò)補(bǔ)充試驗(yàn)進(jìn)一步區(qū)分。 四、細(xì)菌生化反應(yīng)及其結(jié)果的判斷 細(xì)菌的生化反應(yīng)主要檢測(cè)細(xì)菌對(duì)于各類化學(xué)物質(zhì)（碳水化合物、氨基酸及蛋白質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽類等）的代謝能力以及酶類的存在與否等生化特性。這些反應(yīng)能夠?qū)е路磻?yīng)體系的PH值變化或產(chǎn)生顯色物質(zhì)，加入合適的酸堿指示劑或顯色劑就可以反映出來(lái)。 1、碳水化合物利用試驗(yàn) 細(xì)菌如果能夠利用某種糖或醇，將其分解為更小分子并產(chǎn)酸，培養(yǎng)基的PH值由中性變?yōu)樗嵝?。指示劑為溴甲酚紫，?yáng)性為黃色，陰性為紫色。

10、 2、氨基酸代謝試驗(yàn) 細(xì)菌如果能夠利用某種氨基酸如賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸等，將其脫羧并產(chǎn)胺，導(dǎo)致培養(yǎng)基呈堿性。指示劑為溴甲酚紫，陽(yáng)性為紫色，陰性為黃色。 3、蛋白質(zhì)的利用試驗(yàn) （1） 靛基質(zhì)試驗(yàn)：細(xì)菌如果能夠利用蛋白質(zhì)中的色氨酸產(chǎn)生吲哚，可以加入顯色劑使之呈玫瑰紅色。反之則為黃色。 （2） 硫化氫利用試驗(yàn)：細(xì)菌如果能夠利用蛋白質(zhì)中的含硫氨基酸如胱氨酸、半胱氨酸，產(chǎn)生硫化氫并與鐵離子生成黑色沉淀，反之無(wú)黑色沉淀。 4、無(wú)機(jī)鹽類的利用試驗(yàn) (1) 硝酸鹽還原試驗(yàn)：細(xì)菌如果能夠利用無(wú)機(jī)氮源，就能將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，并能與顯色劑生成深紅色。反之則不產(chǎn)生紅色。 (2) 枸櫞酸鹽試驗(yàn)：細(xì)菌如果利用檸檬

11、酸鈉，代謝產(chǎn)物可以導(dǎo)致培養(yǎng)基呈堿性。指示劑為溴麝香草酚藍(lán)，陽(yáng)性呈蘭色，陰性呈綠色。 (3) 丙二酸鹽試驗(yàn)：細(xì)菌如果能夠利用丙二酸鈉，代謝產(chǎn)物導(dǎo)致培養(yǎng)基呈堿性。指示劑為溴麝香草酚藍(lán)，陽(yáng)性呈蘭色，陰性呈綠色。 5、酶類試驗(yàn) （1） 尿素酶試驗(yàn)：產(chǎn)尿素酶細(xì)菌可以分解尿素產(chǎn)氨致使培養(yǎng)基變堿。指示劑為酚紅，陽(yáng)性為紅色，陰性為橘黃色。 （2） 淀粉酶試驗(yàn)：產(chǎn)淀粉酶細(xì)菌能夠?qū)⒌矸圻M(jìn)一步降解，與革蘭氏碘液不顯色；反之呈深蘭色。 五、細(xì)菌鑒定自動(dòng)分析過(guò)程 1、儀器對(duì)生化反應(yīng)結(jié)果的判斷 根據(jù)細(xì)菌生化反應(yīng)的顯色原理利用比色法進(jìn)行分析。每一種反應(yīng)陽(yáng)性和陰性的色譜值均不同，據(jù)此可以設(shè)定每種反應(yīng)的臨界值。機(jī)器由分析程序控

12、制，自動(dòng)讀取通過(guò)微孔的透射光，分析其色譜值并與臨界值相比較，判斷出反應(yīng)結(jié)果是陽(yáng)性還是陰性。 2、編碼的轉(zhuǎn)換與分析 系統(tǒng)將每種反應(yīng)的結(jié)果轉(zhuǎn)換為八進(jìn)制的5位數(shù)編碼，將該編碼與系統(tǒng)內(nèi)的細(xì)菌數(shù)據(jù)庫(kù)比較，查找出對(duì)應(yīng)的細(xì)菌及其可能出現(xiàn)的概率。如果編碼無(wú)法準(zhǔn)確區(qū)分細(xì)菌，系統(tǒng)自動(dòng)檢索相關(guān)的補(bǔ)充試驗(yàn)將其進(jìn)一步鑒定。 3、報(bào)告結(jié)果：系統(tǒng)自動(dòng)將出現(xiàn)概率最大的細(xì)菌作為鑒定的結(jié)果報(bào)告。 抗菌藥物敏感試驗(yàn)的原理抗菌藥物敏感試驗(yàn)的原理 一、 基本概念 1、抗菌藥物敏感性試驗(yàn)（AST，簡(jiǎn)稱藥敏試驗(yàn)）：用于測(cè)試抗菌藥物在體外對(duì)病原微生物有無(wú)抑制作用。常用最低抑菌濃度（MIC）表示，即體外能夠抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度。通常根據(jù)

13、MIC結(jié)合常用劑量時(shí)體內(nèi)該藥所能達(dá)到的血藥濃度，劃定細(xì)菌對(duì)各種抗生素敏感或耐藥的界限，給出S（敏感）、I（中介）、R（耐藥）等定性的結(jié)果，方便臨床用藥。 2、藥敏試驗(yàn)的目的 （1）檢測(cè)病原菌對(duì)各種抗生素的敏感性，指導(dǎo)臨床合理用藥。 （2）用于流行病學(xué)調(diào)查及院內(nèi)感染的監(jiān)控，控制和預(yù)防耐藥菌株的流行。 （3）為經(jīng)驗(yàn)用藥提供參考依據(jù)。 3、常用的藥敏測(cè)定方法 （1） 擴(kuò)散法（紙片法）：手工測(cè)試的方法，通過(guò)測(cè)試藥物紙片在固體培養(yǎng)基上的抑菌圈的大小，判斷細(xì)菌對(duì)該種藥物是否敏感。目前臨床上廣泛使用此法。 （2） E測(cè)定法（E test）：與擴(kuò)散法相似，但藥物包被于長(zhǎng)塑料條上，能夠精確測(cè)定MIC值。適于一些

14、特殊病原菌的藥敏測(cè)試，但價(jià)格較為昂貴。 （3） 稀釋法：有瓊脂稀釋法和液體稀釋法，通過(guò)測(cè)試細(xì)菌在含不同濃度藥物培養(yǎng)基內(nèi)的生長(zhǎng)情況，判斷其最低抑菌濃度（MIC）。自動(dòng)化儀器均采用液體稀釋法為藥敏試驗(yàn)的方法。 二、藥敏試驗(yàn)和抗菌藥物的規(guī)則 1、 抗菌藥物的選擇原則 （1） 針對(duì)不同類別的細(xì)菌，應(yīng)該有選擇的進(jìn)行抗菌藥物敏感試驗(yàn)。不同細(xì)菌需要測(cè)試的藥物可能有所不同。如紅霉素用于葡萄球菌的測(cè)試而不用于腸桿菌的測(cè)試。 （2） 不需要對(duì)每種抗生素均進(jìn)行測(cè)試。選擇的藥物應(yīng)該為各類抗生素的代表性藥物。 （3） NCCLS（美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)）將測(cè)試藥物根據(jù)不同細(xì)菌分為4組。A組為首選藥物必須常規(guī)報(bào)告；B組

15、為與A組平行的藥物，但可以選擇性報(bào)告；C組為補(bǔ)充藥物，當(dāng)對(duì)A組、B組藥物呈現(xiàn)多重耐藥時(shí)必須報(bào)告； D組為用于尿路感染測(cè)試的藥物。 （4）每種藥物需要測(cè)試的藥物濃度各不相同，對(duì)應(yīng)的敏感或耐藥的MIC值也不相同，NCCLS在經(jīng)過(guò)認(rèn)真地驗(yàn)證后給出了相應(yīng)的判斷標(biāo)準(zhǔn)。 2、藥敏試驗(yàn)結(jié)果的解釋 （1）MIC：體外能夠抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度，臨床醫(yī)師可以根據(jù)MIC確定藥物劑量。通常達(dá)到穩(wěn)態(tài)的血藥峰濃度（Css）max應(yīng)為MIC的4-8倍，重癥感染以大于8倍為妥。 （2）為方便臨床給藥，根據(jù)MIC提供一個(gè)定性的結(jié)果是必要的。臨床醫(yī)師根據(jù)敏感、中介、耐藥的提示結(jié)合MIC可以方便地制定用藥方案。 敏感（敏感（

16、S S）：）：表示該藥物對(duì)細(xì)菌的MIC值低于常規(guī)劑量下的抗菌藥物血液濃度或組織濃度4-8倍，可以用常規(guī)劑量治愈。 中介（中介（I I）：）：表示該藥物對(duì)細(xì)菌的MIC值接近于常規(guī)劑量給藥后的血藥濃度或組織藥物濃度，細(xì)菌對(duì)該藥的敏感性降低，但仍可用于生理性濃集部位的感染或使用高劑量藥物進(jìn)行治療（注：必須考慮高劑量的安全性）。 耐藥（耐藥（R）：）：表示該藥物對(duì)細(xì)菌的MIC值等于或高于常規(guī)劑量下藥物的血液濃度或組織濃度，細(xì)菌不能被該種藥物抑制。 三、藥敏試驗(yàn)自動(dòng)分析的原理 1、細(xì)菌在藥物微孔中的生長(zhǎng)情況： 每種抗菌藥物按照NCCLS所規(guī)定的三個(gè)倍比稀釋測(cè)試濃度，分別包被在3個(gè)微孔中，微孔中另外還包被

17、有適于細(xì)菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。待測(cè)菌制備成菌懸液接種于藥物微孔中。細(xì)菌如果在某孔內(nèi)生長(zhǎng)，表示該孔的藥物濃度不能抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，該孔內(nèi)呈現(xiàn)渾濁，透光度明顯下降。反之，該孔內(nèi)為澄清，透光度下降不顯著。 2、機(jī)器由分析程序控制，利用透射光自下向上逐孔檢測(cè)。光敏元件自動(dòng)接收透射光。接收到的透射光強(qiáng)度值自動(dòng)與系統(tǒng)設(shè)定的臨界值相比較，大于臨界值判斷為細(xì)菌不生長(zhǎng)，該孔的結(jié)果為陰性；小于臨界值則判斷為細(xì)菌生長(zhǎng)，該孔的結(jié)果為陽(yáng)性。 3、MIC值的判斷： 每種藥物的3個(gè)測(cè)試孔中，結(jié)果為陰性的最低濃度孔的藥物濃度即為最低抑菌濃度（MIC）。若3個(gè)測(cè)試孔結(jié)果均為陽(yáng)性，最低抑菌濃度（MIC）應(yīng)該大于最高濃度孔的藥物濃度。 4

18、、系統(tǒng)自動(dòng)根據(jù)每種藥物的MIC值，判斷待測(cè)細(xì)菌對(duì)該藥的敏感性并給出一個(gè)定性的結(jié)果（敏感、中介或耐藥）。 系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)配置與工作原理 一、 系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)配置 1 1、HX-21HX-21細(xì)菌鑒定細(xì)菌鑒定/ /藥敏分析儀藥敏分析儀 1 1臺(tái)臺(tái) （1 1）計(jì)算機(jī)）計(jì)算機(jī) 1 1臺(tái)臺(tái) （2 2）檢測(cè)）檢測(cè)儀儀 1 1個(gè)個(gè) 2 2、打印機(jī)、打印機(jī) 1 1臺(tái)臺(tái) 3 3、HX-21HX-21細(xì)菌鑒定細(xì)菌鑒定/ /藥敏分析儀軟件藥敏分析儀軟件 1 1套套 細(xì)菌鑒定/藥敏分析程序包括以下幾部分：1、信息采集 2、信息處理及分析 3、數(shù)據(jù)庫(kù) 4、智能校驗(yàn) 5、統(tǒng)計(jì)及檔案管理 6、報(bào)告單打印格式 二、 儀器的工作原理 1

19、1、生物學(xué)檢測(cè) （1）臨床標(biāo)本人工分離出病原菌、純化并初步分類，確定按照哪一類細(xì)菌進(jìn)行測(cè)試。 （2）將細(xì)菌制備成一定濃度的菌懸液，接種于組合有細(xì)菌生化反應(yīng)和藥敏測(cè)試的微孔板中，置于35孵育18-24小時(shí)。 （3）部分生化反應(yīng)孔添加顯色試劑。 2、儀器的檢測(cè) （1）定位：將微孔板放入檢測(cè)儀，檢測(cè)儀將其準(zhǔn)確定位。 （2）信息采集：計(jì)算機(jī)控制檢測(cè)儀準(zhǔn)確讀取細(xì)菌在微孔板內(nèi)的生長(zhǎng)信息（色譜值及透光度），并將這些信息傳送至信息處理中心。 （3）信息處理及分析：程序?qū)⒚織l信息均與數(shù)據(jù)庫(kù)中的臨界值比較，轉(zhuǎn)換成計(jì)算機(jī)可識(shí)別的二進(jìn)制數(shù)據(jù)。程序分析這些數(shù)據(jù)，依次進(jìn)行細(xì)菌種類的鑒定及藥敏試驗(yàn)的分析，給出最終的檢測(cè)結(jié)果

20、。 （4）報(bào)告：計(jì)算機(jī)將檢測(cè)結(jié)果以標(biāo)準(zhǔn)格式打印成報(bào)告單。 3、儀器的其他功能 （1）統(tǒng)計(jì)及檔案管理：計(jì)算機(jī)可以將檢驗(yàn)結(jié)果保存起來(lái)并隨時(shí)調(diào)閱。計(jì)算機(jī)還可以根據(jù)用戶要求按照不同條目對(duì)儲(chǔ)存的資料歸類統(tǒng)計(jì)，便于進(jìn)行流行病學(xué)的調(diào)查。 （2） 智能化校驗(yàn)：系統(tǒng)配有人工智能的專家系統(tǒng)，該系統(tǒng)猶如一位很有經(jīng)驗(yàn)的微生物學(xué)和藥理學(xué)專家，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行二次校驗(yàn)檢查，并自動(dòng)糾正錯(cuò)誤或不合理的結(jié)果。因而允許檢測(cè)過(guò)程中出現(xiàn)一些微小偏差。 5微生物學(xué)操作及試劑板的使用微生物學(xué)操作及試劑板的使用 本章簡(jiǎn)要敘述了HX21A細(xì)菌分析儀所涉及的微生物學(xué)操作及試劑板的使用各步的操作過(guò)程，仔細(xì)閱讀本章各細(xì)節(jié)，對(duì)獲得正確和準(zhǔn)確的結(jié)果是有

21、益的。有關(guān)微生物學(xué)操作的詳細(xì)知識(shí)可參閱全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第二版）。5.15.1臨床標(biāo)本的處理臨床標(biāo)本的處理 自臨床采集的標(biāo)本必須首先接種于血平板上，根據(jù)情況有的還要同時(shí)接種麥康凱平板、SS平板、中國(guó)藍(lán)等選擇性平板。根據(jù)細(xì)菌的生長(zhǎng)情況，挑選可疑菌落分純。未分純的菌株可能受到雜菌污染，從而影響鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性。 5.2細(xì)菌的初步鑒定細(xì)菌的初步鑒定 初步的鑒定是必要的，便于選擇合適的試劑板進(jìn)行系統(tǒng)分析。錯(cuò)誤的分類將導(dǎo)致完全錯(cuò)誤的結(jié)果。 l、染色和鏡檢 革蘭氏染色和顯微鏡下的形態(tài)觀察，確定待檢菌株屬于球菌還是桿菌、革蘭氏陽(yáng)性菌還是陰性菌。 2、革蘭氏陰性桿菌的鑒別 臨床分離出的革蘭氏陰性桿菌多數(shù)可

22、以通過(guò)氧化酶試驗(yàn)初步加以鑒別。氧化酶（一）者多為腸桿菌科細(xì)菌（不動(dòng)桿菌及嗜麥芽寡源單胞菌為非發(fā)酵菌），氧化酶（）者為非發(fā)酵菌。接種一支OF（氧化發(fā)酵試驗(yàn)）管可以做確定性的驗(yàn)證。腸道感染自弧菌分離培養(yǎng)基分離出氧化酶（）桿菌或自其他部位分離出的弧菌科細(xì)菌，用弧菌科試劑板鑒定。 3、革蘭氏陽(yáng)性球菌的鑒別 葡萄球菌的觸酶（+）、厭氧葡萄糖（），鏡檢呈不規(guī)則葡萄狀排列；微球菌的觸酶（+）、厭氧葡萄糖（一），鏡檢呈四聯(lián)狀排列；鏈球菌屬觸酶（一）、厭氧葡萄糖（），鏡檢呈成對(duì)狀或鏈狀排列，6.5氯化納耐受(一)；腸球菌屬觸酶（）、厭氧葡萄糖（），鏡檢呈單、雙或短鏈狀排列，6.5氯化鈉耐受（）。 4、革蘭氏陰性

23、球菌的鑒別 臨床常見的有淋病奈瑟氏菌、腦膜炎奈瑟氏菌、卡他布蘭漢菌。 5.3腸桿菌科試劑板使用說(shuō)明腸桿菌科試劑板使用說(shuō)明 l、菌懸液的制備 挑取單菌落于5ml無(wú)菌生理鹽水中制成0.5麥?zhǔn)蠁挝坏幕鞈乙海ˋ管），從中吸取0.lml加入10ml無(wú)菌鹽水中混勻（B管）。A、B兩管分別倒入經(jīng)滅菌的V形槽內(nèi)，制備成A液、B液。 2、利用12道微量加樣器吸取A液，加入腸桿菌試劑板A、B兩排24孔中，每孔0.lml。3、利用12道微量加樣器吸取B液，加入腸桿菌試劑板C、D、E、F、G、H等6排孔中，每孔0.1ml。4、A1、A2、B6、F12等孔另加入無(wú)菌石蠟油3-4滴。5、將試劑板蓋好，置于35培養(yǎng)箱培養(yǎng)1

24、824小時(shí)。6、另挑取單菌落，穿刺半固體培養(yǎng)基，35培養(yǎng)過(guò)夜，觀察動(dòng)力。沿穿刺線生長(zhǎng)未擴(kuò)散者為陰性，彌漫性生長(zhǎng)，管內(nèi)呈云霧狀者為陽(yáng)性。 7、在培養(yǎng)好的試劑板中添加輔助試劑：A3孔加甲基紅1滴，B1加靛基質(zhì)3滴，B3孔加苯丙氨酸1滴，B10孔加硝酸鹽還原試劑甲、乙液各1滴（先加甲液，后加乙液），B12孔加VP甲、乙液各1滴（先加甲液，后加乙液）。放入35孵育10分鐘。注意：苯丙氨酸孔加入試劑后應(yīng)該立即觀察，變綠色為陽(yáng)性，不變色者為陰性，人工輸入該結(jié)果。VP變色可能需要較長(zhǎng)時(shí)間。8、結(jié)果判讀 （l）打開電腦，進(jìn)入微生物分析系統(tǒng)。輸入病人基本信息，選擇菌種模式為“腸桿菌”。（2）單擊“下一步”，進(jìn)入

25、菌種分析模塊。系統(tǒng)自動(dòng)檢測(cè)試劑板上的信息并轉(zhuǎn)換為陰陽(yáng)性結(jié)果。陽(yáng)性結(jié)果在框內(nèi)顯示“”，陰性結(jié)果則在框內(nèi)為空白。通過(guò)點(diǎn)擊相應(yīng)的反應(yīng)框，也可以人工輸入或修改反應(yīng)的結(jié)果。單擊“分析”鍵，電腦分析數(shù)值，提供細(xì)菌名稱及出現(xiàn)的概率。 （3）單擊“下一步”，進(jìn)入藥敏分析模塊。系統(tǒng)已經(jīng)將待檢菌株在每種藥物的每一個(gè)孔的生長(zhǎng)情況轉(zhuǎn)換為陰陽(yáng)性值。也可以通過(guò)點(diǎn)擊相應(yīng)孔，人工輸入或改變其陰陽(yáng)性值。 （附：藥敏測(cè)試孔內(nèi)渾濁，有細(xì)菌生長(zhǎng)者為陽(yáng)性：孔內(nèi)澄清，無(wú)菌生長(zhǎng)者為陰性。）單擊“分析”鍵，電腦分析數(shù)值，提供待檢菌株對(duì)各種藥品的體外敏感性試驗(yàn)結(jié)果包括MIC值（最低抑菌濃度）和敏感度（敏感S、中介度I、耐藥R）。 注意：如果藥

26、敏結(jié)果出現(xiàn)異常，系統(tǒng)會(huì)出現(xiàn)提示。這些異常情況包括： A、特殊耐藥機(jī)制如：ESBLS（產(chǎn)超廣譜一內(nèi)酰胺酶的部分腸桿菌）、MRSA（耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌）、對(duì)慶大霉素高水平耐藥的腸球菌等等。 B、對(duì)于某種菌株不應(yīng)該出現(xiàn)的藥敏結(jié)果（敏感或耐藥），對(duì)于這些藥物的結(jié)果，系統(tǒng)在備注欄內(nèi)以“NA”表示該結(jié)果不可靠，不能用于臨床用藥的參考。 C、如果細(xì)菌在某種藥物的幾個(gè)稀釋梯度孔內(nèi)生長(zhǎng)不符合常規(guī)，如出現(xiàn)錯(cuò)孔、跳孔、倒生長(zhǎng)等情況，該藥物的敏感度將不能被測(cè)出，系統(tǒng)不會(huì)報(bào)告該藥物的結(jié)果。 （4）單擊“下一步”，顯示綜合測(cè)試結(jié)果。首先單擊“打印”鍵，打印報(bào)告單。然后單擊“存盤”，保存資料并返回系統(tǒng)主界面。 5.

27、4非發(fā)酵菌試劑板使用說(shuō)明非發(fā)酵菌試劑板使用說(shuō)明 l、菌懸液的制備 挑取單菌落于5ml無(wú)菌生理鹽水中制成0.5麥?zhǔn)蠁挝坏幕鞈乙海ˋ管），從中吸取0.lml，加入10ml無(wú)菌鹽水中混勻（B管）。A、B兩管分別倒入經(jīng)滅菌的V形槽內(nèi)，制備成A液、B液。2、利用12道微量加樣器吸取A液，加入非發(fā)酵菌試劑板A、B兩排 24孔中，每孔0.lml。3、利用12道微量加樣器吸取B液，加入非發(fā)酵菌試劑板C、D、E、 F、G、H等6排孔中，每孔0.1ml。4、將試劑板蓋好，直于35培養(yǎng)箱培養(yǎng)2448小時(shí)。5、如果懷疑待檢菌為熒光假單胞菌或惡臭假單胞菌，應(yīng)另接種一 塊血平板，置于42 培養(yǎng)24小時(shí)，觀察生長(zhǎng)與否。6、

28、動(dòng)力的觀察：非發(fā)酵菌的動(dòng)力必須用懸滴法在顯微鏡下觀察細(xì) 菌是否運(yùn)動(dòng)。注意：不可用半固體穿刺觀察動(dòng)力。 a）在培養(yǎng)好的試劑板中添加輔助試劑：A1孔加硝酸鹽還原試劑（甲、乙液）各1滴，B9孔加革蘭氏碘液1滴。觀察明膠液化，須將 試劑板放于冰箱冷藏室5分鐘后取出觀察是否凝固。 b）結(jié)果判讀：步驟與腸桿菌相同。 注意：菌種摸式必須選擇“非發(fā)酵菌”。5.5葡萄球菌屬試劑板使用說(shuō)明葡萄球菌屬試劑板使用說(shuō)明1、先用玻片法做凝聚因子試驗(yàn)，陽(yáng)性菌必須加做凝固酶試驗(yàn)（試管法）。2、懸液的制備 挑取單菌落于5ml無(wú)菌生理鹽水中制成0.5麥?zhǔn)蠁挝坏幕鞈乙海ˋ管），從中吸取0.lml，加入10ml無(wú)菌鹽水中混勻（B管）

29、。A、B兩管分別倒入經(jīng)滅菌的V形槽內(nèi)，制備成A液、B液。3、用12道微量加樣器吸取A液，加入葡萄球菌試劑板A排12個(gè)孔中，每孔0.lml。4、利用12道微量加樣器吸取B液，加入葡萄球菌試劑板C、D、E、F、G、H等6排孔中，每孔0.lml。 A8孔加入無(wú)菌石蠟油34滴。5、將試劑板蓋好，置于35培養(yǎng)箱培養(yǎng)1824小時(shí)。 a）在培養(yǎng)好的試劑板中添加輔助試劑：A1孔加硝酸鹽還原試劑（甲、乙液）各1滴，A5孔加 VP試劑甲、乙液各1滴（先甲液、后乙液）。 35孵育 10分鐘。 b）結(jié)果判讀：方法與腸桿菌相同。 注意；菌種模式必須選擇“葡萄球菌”。5.6腸球菌鏈球菌屬試劑板使用說(shuō)明腸球菌鏈球菌屬試劑板

30、使用說(shuō)明1、懸液的制備： 挑取單菌落于2ml無(wú)菌生理鹽水中制成0.5麥?zhǔn)蠁挝坏幕鞈乙海ˋ管），然后全部加入10ml無(wú)菌鹽水中混勻（B管）。將B管菌液倒入經(jīng)滅菌的V形槽內(nèi)，制備成B液。2、用12道微量加樣器吸取B液，加入腸球菌鏈球菌試劑板所有的微孔中，每孔0.lml。3、試劑板蓋好，置了35培養(yǎng)箱培養(yǎng)24-48小時(shí)。4、培養(yǎng)好的試劑板中添加輔助試劑：A6孔加VP試劑（甲、乙液）各1滴。35孵育 10分鐘。5、結(jié)果判讀：方法與腸桿菌相同。 注意：菌種模式必須選擇“腸球菌”或“鏈球菌”。5.7（無(wú)芽胞）陽(yáng)性桿菌試劑板（無(wú)芽胞）陽(yáng)性桿菌試劑板使用說(shuō)明（試用）使用說(shuō)明（試用） 1、懸液的制備：挑取單菌落

31、于2ml無(wú)菌生理鹽水中制成0.5麥?zhǔn)蠁挝坏幕鞈乙海ˋ管），然后全部加入10ml無(wú)菌鹽水中混勻（B管）。將B管菌液倒入經(jīng)滅菌的V形槽內(nèi)，制備成B液。2、用12道微量加樣器吸取混懸液B液，加入（無(wú)芽胞）陽(yáng)性桿菌試劑板所有的微孔中，每孔0. lml。3、試劑板蓋好，置于35培養(yǎng)箱培養(yǎng)24-48小時(shí)。4、判讀：肉眼觀察反應(yīng)孔內(nèi)有無(wú)生長(zhǎng)現(xiàn)象（孔底有白色沉淀物），依次將反應(yīng)結(jié)果輸入計(jì)算機(jī)，進(jìn)行分析。5.8弧菌科試劑板使用說(shuō)明（試用）弧菌科試劑板使用說(shuō)明（試用）l、菌懸液的制備 挑取單菌落于5ml無(wú)菌生理鹽水中制成0.5麥?zhǔn)蠁挝坏幕鞈乙海ˋ管），從中吸取0.lml，加入10ml無(wú)菌鹽水中混勻（B管）。A、B兩管分別倒入經(jīng)滅菌的V形槽內(nèi)