第五章基因工程菌苗研究的現(xiàn)狀與

1、 第一節(jié)第一節(jié) 概述概述 (Section I outline)(Section I outline)18831883年年-1885-1885年巴斯德（年巴斯德（PasteurPasteur）用理化和生物學(xué)方法）用理化和生物學(xué)方法制備了減毒的炭疽菌苗和狂犬疫苗等。制備了減毒的炭疽菌苗和狂犬疫苗等。1919世紀(jì)以來用菌苗免疫人畜，明顯減少了傳染病的發(fā)生。世紀(jì)以來用菌苗免疫人畜，明顯減少了傳染病的發(fā)生。其中比較成功的是破傷風(fēng)、白喉類毒素疫苗的應(yīng)用，其其中比較成功的是破傷風(fēng)、白喉類毒素疫苗的應(yīng)用，其效果可達(dá)效果可達(dá)95%95%以上。在發(fā)達(dá)國家破傷風(fēng)、白喉、百日咳、以上。在發(fā)達(dá)國家破傷風(fēng)、白喉、百日咳

2、、嗜血性流感的發(fā)病率明顯降低?？咕幬锏陌l(fā)明和應(yīng)用，嗜血性流感的發(fā)病率明顯降低?？咕幬锏陌l(fā)明和應(yīng)用，使臨床常見的細(xì)菌性感染和病死率大幅下降。使臨床常見的細(xì)菌性感染和病死率大幅下降。 細(xì)菌一旦獲得耐藥性，存在與細(xì)菌染色細(xì)菌一旦獲得耐藥性，存在與細(xì)菌染色體、質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座子中的耐藥基因就可通過體、質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座子中的耐藥基因就可通過轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、接合和轉(zhuǎn)座等方式，將抗性轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、接合和轉(zhuǎn)座等方式，將抗性基因傳播到其他敏感菌，使之成為抗藥菌基因傳播到其他敏感菌，使之成為抗藥菌株，給臨床傳染病的治療帶來困難。據(jù)株，給臨床傳染病的治療帶來困難。據(jù)WHO1996WHO1996年報告，全球每年死亡約年報告，全球每

3、年死亡約51905190萬萬人，其中人，其中1/31/3約約17301730萬死于傳染病。萬死于傳染病。在過去在過去2020年中，有年中，有2929種新傳染病出現(xiàn)種新傳染病出現(xiàn)。 美 國。 美 國 S a t c h e rS a t c h e r 博 士 在博 士 在 E m e r g i n g E m e r g i n g Infectious DiseasesInfectious Diseases雜志創(chuàng)刊刊號列出雜志創(chuàng)刊刊號列出自自19731973年以來鑒定的主要傳染病或病原年以來鑒定的主要傳染病或病原體體2222種。近年鑒定的新病原體和疾病鑒種。近年鑒定的新病原體和疾病鑒定年份

4、依次列于表定年份依次列于表5-15-1。表表6-1 6-1 新鑒定的病原體新鑒定的病原體 年份年份病原體病原體所致疾病所致疾病19751975微小病毒微小病毒B19(pawovirus B19)B19(pawovirus B19)5 5號病，慢性溶血性貧血號病，慢性溶血性貧血中的再障危象中的再障危象19761976隱孢子蟲（隱孢子蟲（cryptosporidiumcryptosporidium）隱孢子蟲病，急性小腸隱孢子蟲病，急性小腸結(jié)腸炎結(jié)腸炎19771977埃博拉病毒（埃博拉病毒（ebolavirusebolavirus）埃博拉出血熱埃博拉出血熱19771977軍團(tuán)病桿菌（軍團(tuán)病桿菌（le

5、gionellapneumophilalegionellapneumophila）軍團(tuán)病軍團(tuán)病19771977漢坦病毒（漢坦病毒（hantsann virushantsann virus）腎綜合癥出血熱腎綜合癥出血熱19771977彎曲桿菌（彎曲桿菌（campylobactercampylobacter）空腸彎曲桿菌腸炎空腸彎曲桿菌腸炎19801980人嗜人嗜T T淋巴細(xì)胞病毒（淋巴細(xì)胞病毒（HTLV-1HTLV-1）T T細(xì)胞淋巴瘤白血病細(xì)胞淋巴瘤白血病19811981葡萄球菌毒素（葡萄球菌毒素（toxin producing aureustoxin producing aureus） 中毒

6、性休克綜合癥中毒性休克綜合癥 1982 1982 大腸桿菌大腸桿菌O157O157：H7H7（E.coli O157:H7E.coli O157:H7） 出血性腸炎，溶血性尿出血性腸炎，溶血性尿毒綜合癥毒綜合癥 1982 1982 HTLV-II HTLV-II 毛皮樣細(xì)胞白血病毛皮樣細(xì)胞白血病 1982 1982 伯氏疏螺旋體（伯氏疏螺旋體（Borrelia Borrelia burgdorferiburgdorferi） 萊姆病萊姆病 19831983HIVHIV艾滋病艾滋病19831983幽門螺桿菌（幽門螺桿菌（Helicobacter pyloriHelicobacter pylori

7、）胃潰瘍胃潰瘍19881988人皰疹病毒人皰疹病毒6 6型（型（HHV-6HHV-6）突發(fā)性玫瑰疹突發(fā)性玫瑰疹19891989查菲氏歐利希氏體查菲氏歐利希氏體人歐利希氏病人歐利希氏病19891989丙型肝炎病毒（丙型肝炎病毒（hepatitis Chepatitis C）丙型肝炎丙型肝炎19901990 戊戊 型肝炎病毒（型肝炎病毒（hepatitis Ehepatitis E） 戊型肝炎戊型肝炎19911991GuonaritoGuonarito病毒病毒委內(nèi)瑞拉出血熱委內(nèi)瑞拉出血熱19921992霍亂弧菌霍亂弧菌O139O139地方性流行性霍亂地方性流行性霍亂19921992巴爾道氏體（巴爾

8、道氏體（Bartonella henselaeBartonella henselae） 貓抓病、細(xì)菌性血管瘤病貓抓病、細(xì)菌性血管瘤病19921992環(huán)形孢子環(huán)形孢子環(huán)形孢子蟲病環(huán)形孢子蟲病19931993漢坦病毒分離株漢坦病毒分離株漢坦病毒綜合癥漢坦病毒綜合癥19931993Sin nombre virusSin nombre virus1994 1994 SabiaSabia病毒病毒 巴西出血熱巴西出血熱 19951995庚型肝炎病毒（庚型肝炎病毒（hepatitis Ghepatitis G）庚型肝炎庚型肝炎19951995人皰疹病毒人皰疹病毒8 8型（型（HHV-8HHV-8）卡波濟(jì)肉瘤

9、，淋巴瘤卡波濟(jì)肉瘤，淋巴瘤19961996朊病毒（朊病毒（prionprion）(BSE,TSE)(BSE,TSE)傳染性海綿狀腦病，克雅病傳染性海綿狀腦病，克雅病19971997TTTT病毒（病毒（TT VirusTT Virus）TTVTTV肝炎肝炎19991999尼巴病毒（尼巴病毒（nipah virusnipah virus）發(fā)熱性腦炎發(fā)熱性腦炎19991999 伊氏埃立克體（伊氏埃立克體（Ehrlichia ewingiiEhrlichia ewingii）人埃立克體病人埃立克體病 新病原體不斷出現(xiàn)與鑒定，新的疫苗研制也相新病原體不斷出現(xiàn)與鑒定，新的疫苗研制也相繼開始。繼開始。重要病

10、原體全基因測序的開展和完成，及類似重要病原體全基因測序的開展和完成，及類似生物表型的不同菌屬間的同源序列和異源序列的生物表型的不同菌屬間的同源序列和異源序列的發(fā)現(xiàn)，對抗感染研究來說，像進(jìn)行了一場革命，發(fā)現(xiàn)，對抗感染研究來說，像進(jìn)行了一場革命，不僅會促進(jìn)病原體致病和發(fā)病機(jī)制的研究，也會不僅會促進(jìn)病原體致病和發(fā)病機(jī)制的研究，也會開闊和調(diào)整菌苗研究的策略和思路。開闊和調(diào)整菌苗研究的策略和思路。目前已完成目前已完成500500余種病毒的全基因測序，關(guān)于重余種病毒的全基因測序，關(guān)于重要病原菌全基因測序進(jìn)展情況列于表要病原菌全基因測序進(jìn)展情況列于表5-25-2。 完成的完成的正在進(jìn)行的正在進(jìn)行的將要進(jìn)行的

11、將要進(jìn)行的流感嗜血桿菌流感嗜血桿菌（Haemophilus Haemophilus influenzaeinfluenzae）放線性放線菌放線性放線菌（Actinobacillus Actinobacillus actinomycetemcomitansactinomycetemcomitans）彎曲桿菌（彎曲桿菌（Campylobacter Campylobacter jejunijejuni）生殖道支原體生殖道支原體（Mycoplasma Mycoplasma genitoliumgenitolium）枸巢曲霉桿菌枸巢曲霉桿菌（Aspergillus midulansAspergillus

12、 midulans）流產(chǎn)布氏桿菌（流產(chǎn)布氏桿菌（Brucella Brucella abortusabortus）肺炎支原體肺炎支原體（Mycoplasma Mycoplasma pneumoniaepneumoniae）枯草桿菌（枯草桿菌（Bacillus Bacillus subtilissubtilis）杜克雷嗜血桿菌（杜克雷嗜血桿菌（Haemophilus Haemophilus ducreyiducreyi）幽門螺桿菌幽門螺桿菌（Helicobacter Helicobacter pyloripylori）沙眼衣原體（沙眼衣原體（Chlamydia Chlamydia trachom

13、atiotrachomatio） 鳥分枝桿菌（鳥分枝桿菌（Mycobacterium Mycobacterium aviumavium） 伯氏疏螺旋體伯氏疏螺旋體（Borrelia Borrelia burgdorferiburgdorferi） 糞腸球菌（糞腸球菌（Enterococcus Enterococcus faecalis, E.faeciumfaecalis, E.faecium） 多殺巴斯德菌（多殺巴斯德菌（Pasteurella Pasteurella multocidamultocida） 表表6-2 6-2 人類重要病原菌全基因測序現(xiàn)狀人類重要病原菌全基因測序現(xiàn)狀 E.c

14、oli K12E.coli K12軍團(tuán)菌（軍團(tuán)菌（Legionella Legionella pneumopbilapneumopbila）牙齦卟啉單胞菌牙齦卟啉單胞菌（Porphyromonas Porphyromonas gingvalisgingvalis）肺炎球菌肺炎球菌（Streptococcus Streptococcus pneumoniaepneumoniae）麻風(fēng)分枝桿菌（麻風(fēng)分枝桿菌（Mycobacterun Mycobacterun lepraeleprae）鼠傷寒沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌（Salmonella Salmonella serotype serotype Ty

15、phimuriumTyphimurium）梅毒螺旋體梅毒螺旋體（Treponeme pallidunTreponeme pallidun）淋病腦膜炎奈瑟氏球菌淋病腦膜炎奈瑟氏球菌（Neisseria gonorrhoeae, N. Neisseria gonorrhoeae, N. meningitidismeningitidis）布氏錐蟲布氏錐蟲（Trypanosoma Trypanosoma bruceibrucei） 解脲原體解脲原體（Ureoplasma Ureoplasma urealyticumurealyticum）亞性瘧（亞性瘧（plasmodium falciparumpla

16、smodium falciparum）痢疾桿菌痢疾桿菌（ShigellaShigella） 綠膿桿菌（綠膿桿菌（Pseudomonas Pseudomonas aeruginosaaeruginosa） 大型利什曼原蟲大型利什曼原蟲（Leishmania majorLeishmania major） 金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus） 霍亂弧菌（霍亂弧菌（Vibrio Vibrio choleraecholerae） 化膿鏈球菌（化膿鏈球菌（Streptococcus Streptococcus pyogenes

17、pyogenes） 總之，已控制傳染病的再現(xiàn)及新總之，已控制傳染病的再現(xiàn)及新傳染病的出現(xiàn)，已引起全球的注意傳染病的出現(xiàn)，已引起全球的注意，對傳染病威脅需要再認(rèn)識，已有，對傳染病威脅需要再認(rèn)識，已有共識。共識。因此，有必要加快進(jìn)行創(chuàng)新因此，有必要加快進(jìn)行創(chuàng)新性的細(xì)菌菌苗的研制與開發(fā)性的細(xì)菌菌苗的研制與開發(fā)。l一、目前應(yīng)用菌苗的類別一、目前應(yīng)用菌苗的類別 (The type of bacteria vaccine)(The type of bacteria vaccine) l 按菌苗所含的成份，菌苗可分為九類，按菌苗所含的成份，菌苗可分為九類，即即減毒的活菌苗、滅活的死菌苗、純化的減毒的活菌苗、

18、滅活的死菌苗、純化的多糖或蛋白成份苗、基因缺失活菌苗、載多糖或蛋白成份苗、基因缺失活菌苗、載體重組活菌苗、核酸菌苗、聯(lián)合重組菌苗、體重組活菌苗、核酸菌苗、聯(lián)合重組菌苗、多價菌苗、多糖與蛋白結(jié)合菌苗多價菌苗、多糖與蛋白結(jié)合菌苗。 1 1、減毒的活菌苗（、減毒的活菌苗（Attenuated bacteria vaccine）如卡介苗（如卡介苗（BCGBCG），是巴斯德研究院），是巴斯德研究院A. CalmetteA. Calmette和和Guerin,CGuerin,C等（等（19211921）將一株牛型強(qiáng)毒結(jié)核菌在甘）將一株牛型強(qiáng)毒結(jié)核菌在甘油油- -膽汁膽汁- -馬鈴薯培養(yǎng)基上傳馬鈴薯培養(yǎng)基上

19、傳230230代后（代后（1313年），獲年），獲得的對動物不致病，但產(chǎn)生抗結(jié)核免疫反應(yīng)的菌苗得的對動物不致病，但產(chǎn)生抗結(jié)核免疫反應(yīng)的菌苗即即BCGBCG。對免疫嬰幼兒有保護(hù)效果。對免疫嬰幼兒有保護(hù)效果。后來發(fā)現(xiàn)對成人的保護(hù)效果波動范圍很大，對其后來發(fā)現(xiàn)對成人的保護(hù)效果波動范圍很大，對其減毒機(jī)制始終不清。直至近年來完成結(jié)核分枝桿菌減毒機(jī)制始終不清。直至近年來完成結(jié)核分枝桿菌全基因測序后，與有毒牛型結(jié)核分枝桿菌全基因序全基因測序后，與有毒牛型結(jié)核分枝桿菌全基因序列進(jìn)行比較，方知列進(jìn)行比較，方知BCGBCG缺失了毒力相關(guān)基因。缺失了毒力相關(guān)基因?？傊?，總之，對胞內(nèi)菌目前還是用減毒的活菌苗。對胞內(nèi)菌

20、目前還是用減毒的活菌苗。 2.2.滅活菌苗滅活菌苗 （Dead bacteria vaccine）通過加熱處理或福爾馬林（通過加熱處理或福爾馬林（formaldehydeformaldehyde）、戊二醛（、戊二醛（glutaraldehydeglutaraldehyde）、）、-內(nèi)酯（內(nèi)酯（-propiolactone-propiolactone）、等化學(xué)處理得到）、等化學(xué)處理得到如霍亂死菌苗，百日咳（如霍亂死菌苗，百日咳（Bordetella Bordetella pertussispertussis）死菌苗等。死菌苗的主要優(yōu)點是）死菌苗等。死菌苗的主要優(yōu)點是穩(wěn)定，缺點是需要多次免疫才能得

21、到好的保穩(wěn)定，缺點是需要多次免疫才能得到好的保護(hù)效果。護(hù)效果。 3 .3 . 亞 單 位 或 成 分 苗亞 單 位 或 成 分 苗 （ Subunit bacteria vaccine） 從細(xì)菌培養(yǎng)液中提取、用化學(xué)方法脫毒的從細(xì)菌培養(yǎng)液中提取、用化學(xué)方法脫毒的類類毒素苗毒素苗，如破傷風(fēng)類毒素（，如破傷風(fēng)類毒素（TTTT）、白喉類毒素）、白喉類毒素（DTDT），免疫后誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的抗血清能特異），免疫后誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的抗血清能特異中和中和TTTT破傷風(fēng)類毒素或破傷風(fēng)類毒素或DTDT白喉類毒素，其保護(hù)白喉類毒素，其保護(hù)效果可達(dá)效果可達(dá)95%95%以上。由于毒素純化方法的改進(jìn)，以上。由于毒素純化方法的

22、改進(jìn)，產(chǎn)品的副作用很??；產(chǎn)品的副作用很??； 莢膜細(xì)菌純化的莢膜細(xì)菌純化的多糖菌苗多糖菌苗，可誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗，可誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體能保護(hù)機(jī)體抵抗入侵莢膜菌的感染。如嗜血體能保護(hù)機(jī)體抵抗入侵莢膜菌的感染。如嗜血性流感桿菌性流感桿菌b(Hib)b(Hib)、傷寒桿菌、傷寒桿菌ViVi多糖等多糖苗多糖等多糖苗，能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生，能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生T T細(xì)胞非依賴的抗體反應(yīng)，其細(xì)胞非依賴的抗體反應(yīng)，其特點是誘導(dǎo)產(chǎn)生短期的特點是誘導(dǎo)產(chǎn)生短期的IgMIgM抗體，缺乏免疫記憶抗體，缺乏免疫記憶，對不到，對不到1818個月幼兒的多糖苗免疫原性差，而個月幼兒的多糖苗免疫原性差，而沒有保護(hù)效果。沒有保護(hù)效果。因此多糖類的菌苗急

23、需改進(jìn)因此多糖類的菌苗急需改進(jìn)。 表表6-3 6-3 目前可用于人群的菌苗目前可用于人群的菌苗 菌苗菌苗 類型類型預(yù)防的疾病預(yù)防的疾病 國內(nèi)國內(nèi) 國外國外 1 1卡介苗（卡介苗（BCGBCG）活菌苗活菌苗結(jié)核病結(jié)核病i.di.di.di.d2 2布氏病菌苗布氏病菌苗（104M104M）活菌苗活菌苗布氏菌病布氏菌病d.sd.s3 3 鼠疫菌苗（鼠疫菌苗（EVEV）活菌苗活菌苗鼠疫鼠疫d.sd.s4 4 炭疽菌苗炭疽菌苗（A16R,CTN-A16R,CTN-1,V770-NP-11,V770-NP-1） 活芽胞苗活芽胞苗 炭疽炭疽 d.s d.s 炭疽菌苗炭疽菌苗 滅活菌苗滅活菌苗 炭疽炭疽 s.

24、c s.c 菌苗菌苗 類型類型預(yù)防的疾病預(yù)防的疾病 國內(nèi)國內(nèi)國外國外 5 5 百日咳菌苗百日咳菌苗 類毒素類毒素 滅活菌苗滅活菌苗 百日咳百日咳 炭疽炭疽 i.m i.m i.m i.m 6 6腦膜炎球菌苗（腦膜炎球菌苗（A A、C C群）群） 多糖成分多糖成分 腦膜炎腦膜炎 i.m i.m s.c s.c 7 7腦膜炎球菌苗腦膜炎球菌苗（A/C/Y/W-35A/C/Y/W-35群）群） 多糖成分多糖成分 腦膜炎腦膜炎 s.c s.c 8 8流腦流腦A A群多糖群多糖- -破傷風(fēng)破傷風(fēng)蛋白結(jié)合菌蛋白結(jié)合菌 苗苗多糖多糖- -蛋白結(jié)蛋白結(jié)合苗合苗 流行性腦脊流行性腦脊髓膜炎髓膜炎 i.m i.m

25、 9 9傷寒菌苗（傷寒菌苗（Ty21aTy21a） 傷寒菌苗（傷寒菌苗（Ty21aTy21a）傷寒傷寒ViVi多糖苗多糖苗 活菌苗活菌苗 滅活全菌苗滅活全菌苗 多糖成分多糖成分 傷寒傷寒 傷寒傷寒 傷寒傷寒 i.m i.m p.o p.o s.c s.c i.m i.m 1010精制破傷風(fēng)菌苗精制破傷風(fēng)菌苗 類毒素類毒素 破傷風(fēng)破傷風(fēng)i.m i.m i.m i.m 1111精制白喉菌苗精制白喉菌苗 類毒素類毒素 白喉白喉 i.mi.m 菌苗菌苗 類型類型預(yù)防的疾病預(yù)防的疾病 國內(nèi)國內(nèi)國外國外 12 12 白白- -百百- -破三聯(lián)苗破三聯(lián)苗（DTPDTP） 類毒素類毒素 白喉，百日咳白喉，百日

26、咳 i.m i.m 滅活全苗滅活全苗 破傷風(fēng)破傷風(fēng) i.m i.m 13 13 白白- -破破- -百三聯(lián)（百三聯(lián)（DTaPDTaP） 類毒素類毒素 白喉，百日咳白喉，百日咳 i.m i.m 白白- -破破- -百三聯(lián)苗百三聯(lián)苗 滅活全苗滅活全苗 破傷風(fēng)破傷風(fēng) i.m i.m 14 14 白白- -破二聯(lián)苗（破二聯(lián)苗（DTDT或或TdTd） 類毒素類毒素 白喉，破傷風(fēng)白喉，破傷風(fēng) i.m i.m i.m i.m 15 15 鉤端螺旋體菌苗鉤端螺旋體菌苗 外膜成苗外膜成苗 鉤端螺旋體病鉤端螺旋體病 s.c s.c 16 16 霍亂弧菌（霍亂弧菌（O139O139） 滅活全菌滅活全菌苗苗 霍亂霍亂

27、 s.c s.c S,c/i.S,c/i.d d 17 17 CVD103HgR CVD103HgR 基因工程基因工程活苗活苗 霍亂霍亂 p.o p.o 18 18 肺炎球菌（肺炎球菌（2323型）型） 多糖成分多糖成分 肺炎肺炎 p.op.o 菌苗菌苗 類型類型預(yù)防的疾病預(yù)防的疾病 國內(nèi)國內(nèi)國外國外 1919嗜血流感桿菌嗜血流感桿菌B B型型（HibHib）類毒素類毒素腦膜炎腦膜炎i.mi.m2020 DTP-DTP-嗜血流感桿菌嗜血流感桿菌B B型結(jié)合苗型結(jié)合苗滅活的全菌滅活的全菌苗苗白喉，百日白喉，百日咳，咳，i.mi.m（DTP-HibDTP-Hib）細(xì)菌多糖細(xì)菌多糖- -蛋蛋白結(jié)合菌

28、苗白結(jié)合菌苗破傷風(fēng)，腦破傷風(fēng)，腦膜炎膜炎i.mi.m2121 福氏福氏2a2a與宋內(nèi)雙價痢與宋內(nèi)雙價痢疾菌苗（疾菌苗（FSM2117FSM2117）基因工程活基因工程活苗苗痢疾痢疾p.op.oF2aF2a與宋內(nèi)雙價痢疾與宋內(nèi)雙價痢疾菌苗（菌苗（FSFS）基因工程活基因工程活苗苗痢疾痢疾p.op.o 2222萊姆病菌苗（萊姆病菌苗（OspAOspA）重組重組OspAOspA萊姆病萊姆病s.cs.c注：注：i.di.d皮內(nèi)，皮內(nèi)，s.cs.c皮下，皮下，d.sd.s劃痕，劃痕，i.mi.m肌注，肌注，p.op.o口服口服 （二）研制菌苗的新方法（二）研制菌苗的新方法（New method of p

29、roduce bacteria vaccine）1 1、研制菌苗的新方法（、研制菌苗的新方法（new methods）對細(xì)菌感染發(fā)病機(jī)制認(rèn)識的深入及涉及許多病原體對細(xì)菌感染發(fā)病機(jī)制認(rèn)識的深入及涉及許多病原體毒力決定簇如黏附素、侵襲素、莢膜多糖、脂多糖、毒力決定簇如黏附素、侵襲素、莢膜多糖、脂多糖、毒素等編碼基因及其產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能的分析與鑒定毒素等編碼基因及其產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能的分析與鑒定，是不斷設(shè)計和研制新型疫苗的重要基礎(chǔ)。，是不斷設(shè)計和研制新型疫苗的重要基礎(chǔ)。針對不同的病原體致病特點和毒力決定簇的特點，針對不同的病原體致病特點和毒力決定簇的特點，發(fā)展和產(chǎn)生了不同的菌苗研制方法，得到不同類型的

30、發(fā)展和產(chǎn)生了不同的菌苗研制方法，得到不同類型的菌苗。菌苗?，F(xiàn)將目前研制菌苗的新方法及可能的后選菌苗列于現(xiàn)將目前研制菌苗的新方法及可能的后選菌苗列于表表5-4 5-4 。表表6-4 目前研制菌苗的新方法及可能的候選菌苗目前研制菌苗的新方法及可能的候選菌苗 1 1 純化亞純化亞單位成單位成份份嗜血流感桿菌（莢膜多糖）（嗜血流感桿菌（莢膜多糖）（H.influenzeH.influenze）奈氏腦膜炎球菌（莢膜多糖）奈氏腦膜炎球菌（莢膜多糖）(N.meningitidia)(N.meningitidia)百日咳菌血凝素（百日咳菌血凝素（HemagglutininHemagglutinin）2 2 合

31、成肽合成肽 淋球菌（黏附菌毛）淋球菌（黏附菌毛）（N.gonorihoeae,Adhernce-piliN.gonorihoeae,Adhernce-pili）肺炎鏈球菌（肺炎鏈球菌（StreptococcusStreptococcus）3 3核酸疫核酸疫苗苗結(jié)核分枝桿菌（結(jié)核分枝桿菌（M.tuberculosisM.tuberculosis）產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌（產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌（L.monocytogenesL.monocytogenes）沙眼衣原體（沙眼衣原體（Chlamydia trachomatioChlamydia trachomatio）伯氏疏螺旋體（伯氏疏螺旋體（Borreli

32、a burgdorferiBorrelia burgdorferi）4 4構(gòu)建突變株構(gòu)建突變株（化學(xué)、輻射、點突變（化學(xué)、輻射、點突變或轉(zhuǎn)座子插入等）或轉(zhuǎn)座子插入等）傷寒菌苗傷寒菌苗Ty21a(S. Ty21a(S. typhi,Ty21a)typhi,Ty21a)霍亂菌苗（霍亂菌苗（V.CholeraeV.Cholerae）CVD103HgRCVD103HgRETECETEC苗苗5 5與與CT-BCT-B，LTLT，TTTT，DTDT等化學(xué)結(jié)合等化學(xué)結(jié)合 傷寒傷寒ViVi抗原抗原痢疾菌苗痢疾菌苗, ,嗜血流感桿菌苗嗜血流感桿菌苗6 6構(gòu)建重組細(xì)菌載體構(gòu)建重組細(xì)菌載體 重組病毒載體重組病毒載體

33、HbsAgHbsAg腸沙門氏菌載體腸沙門氏菌載體宋內(nèi)氏痢疾菌宋內(nèi)氏痢疾菌LPSLPS痢疾菌載體痢疾菌載體痢疾多價菌苗痢疾多價菌苗耶爾森氏菌載體耶爾森氏菌載體 BCGBCG載體載體幽門螺桿菌溶酶素幽門螺桿菌溶酶素腺病毒載體腺病毒載體霍亂菌載體霍亂菌載體2.2.目前菌苗存在的問題（目前菌苗存在的問題（questions s）（1 1）盡管疫苗免疫取得了巨大的成功，）盡管疫苗免疫取得了巨大的成功，但小于但小于5 5歲的嬰幼兒每年死于傳染病的數(shù)歲的嬰幼兒每年死于傳染病的數(shù)目仍然很高。如瘧疾幾種腹瀉病等均無有目仍然很高。如瘧疾幾種腹瀉病等均無有效疫苗，雖然卡介苗（效疫苗，雖然卡介苗（BCGBCG）使用幾

34、十年）使用幾十年了，甚至納入了，甚至納入WHOWHO的計劃免疫，但其效果的計劃免疫，但其效果波動很大波動很大0%-80%0%-80%。因此急需安全有效的結(jié)。因此急需安全有效的結(jié)核菌苗問世。核菌苗問世。 （2 2）與病毒相比）與病毒相比：基因工程菌苗及細(xì)菌核酸苗基因工程菌苗及細(xì)菌核酸苗報導(dǎo)明顯為少報導(dǎo)明顯為少。至今國際上還沒有成功滿意的重。至今國際上還沒有成功滿意的重組細(xì)菌苗提供人群使用。關(guān)于細(xì)菌毒素的分子及組細(xì)菌苗提供人群使用。關(guān)于細(xì)菌毒素的分子及其編碼基因與調(diào)控機(jī)制都比較清楚，因此，有關(guān)其編碼基因與調(diào)控機(jī)制都比較清楚，因此，有關(guān)毒素的基因工程菌苗的構(gòu)建或載體構(gòu)建等均無問毒素的基因工程菌苗的構(gòu)

35、建或載體構(gòu)建等均無問題。題。但但細(xì)菌外膜上的其它結(jié)構(gòu)如黏附分子，侵細(xì)菌外膜上的其它結(jié)構(gòu)如黏附分子，侵襲蛋白，鞭毛及脂多糖等分子結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜，編襲蛋白，鞭毛及脂多糖等分子結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜，編碼基因多呈叢分布碼基因多呈叢分布，如，如LPSLPS的表達(dá)涉及近的表達(dá)涉及近3030個基因個基因的級聯(lián)反應(yīng)，的級聯(lián)反應(yīng)，操作起來尚有困難操作起來尚有困難。因此還有毒力。因此還有毒力相關(guān)或保護(hù)相關(guān)基因的分離、克隆和表達(dá)等基因相關(guān)或保護(hù)相關(guān)基因的分離、克隆和表達(dá)等基因工程菌苗研制的前期工作要做。工程菌苗研制的前期工作要做。 （三）理想菌苗的條件（三）理想菌苗的條件（Ideal bacteria vaccines co

36、ndition）理想疫苗應(yīng)該是：理想疫苗應(yīng)該是：（1 1）安全，遺傳性狀穩(wěn)定，無毒性，無致癌）安全，遺傳性狀穩(wěn)定，無毒性，無致癌性，無致畸變或致流產(chǎn)性。性，無致畸變或致流產(chǎn)性。（2 2）結(jié)構(gòu)簡單清楚，可生物降解，有生物相）結(jié)構(gòu)簡單清楚，可生物降解，有生物相容性，與組織抗原無免疫學(xué)交叉反應(yīng)。容性，與組織抗原無免疫學(xué)交叉反應(yīng)。（3 3）對各年齡組人群均有長時間的）對各年齡組人群均有長時間的免疫保護(hù)作用免疫保護(hù)作用。（4 4）多價，有更大的覆蓋面，最好一次性免疫。）多價，有更大的覆蓋面，最好一次性免疫。（5 5）能口服能口服，能有效誘導(dǎo)黏膜免疫。，能有效誘導(dǎo)黏膜免疫。（6 6）易于生產(chǎn)，儲存及服務(wù)，

37、不需冷藏。）易于生產(chǎn)，儲存及服務(wù)，不需冷藏。 每一項要求，都需要大量的基礎(chǔ)研究，已能提每一項要求，都需要大量的基礎(chǔ)研究，已能提出更為合理的疫苗研究策略，研制出安全高效，使出更為合理的疫苗研究策略，研制出安全高效，使用方便，價格低廉的菌苗用方便，價格低廉的菌苗 現(xiàn)有傳統(tǒng)菌苗對重要細(xì)菌感染性疾病存在的現(xiàn)有傳統(tǒng)菌苗對重要細(xì)菌感染性疾病存在的問題：問題： 現(xiàn)有菌苗保護(hù)效果不好；現(xiàn)有菌苗保護(hù)效果不好； 副反應(yīng)大；副反應(yīng)大； 難以培養(yǎng)的細(xì)菌；難以培養(yǎng)的細(xì)菌； 可誘發(fā)癌變，有嚴(yán)重后遺癥；可誘發(fā)癌變，有嚴(yán)重后遺癥； 新出現(xiàn)的病原體或新變異病原菌。新出現(xiàn)的病原體或新變異病原菌。一、霍亂菌苗一、霍亂菌苗 ( (C

38、holera vaccine) )霍亂是由革蘭氏陰性霍亂弧菌引起的烈性傳染病。霍亂是由革蘭氏陰性霍亂弧菌引起的烈性傳染病?；魜y弧菌在小腸分泌霍亂毒素（霍亂弧菌在小腸分泌霍亂毒素（CTCT）引起腹瀉及其他癥狀。）引起腹瀉及其他癥狀。已知有已知有O O抗原，毒素共調(diào)節(jié)菌毛（抗原，毒素共調(diào)節(jié)菌毛（TCPTCP），血凝素（），血凝素（HAHA），外），外膜蛋白（膜蛋白（OMPsOMPs）等，及引起水樣腹瀉的霍亂毒素（）等，及引起水樣腹瀉的霍亂毒素（CTCT）由）由AB5AB5的六聚體構(gòu)成。的六聚體構(gòu)成?；?亂 產(chǎn) 毒 株霍 亂 產(chǎn) 毒 株 c t x A Bc t x A B 的的 5 5 端 有 一

39、端 有 一 6 k b6 k b 的的 D N AD N A ， 依 次 有， 依 次 有20t,ace,orfu,cep20t,ace,orfu,cep和和RSRS序列與序列與ctxABctxAB一起稱為霍亂毒素元件（一起稱為霍亂毒素元件（CTXCTX）元件，可進(jìn)行轉(zhuǎn)移，與一種絲狀噬菌體（）元件，可進(jìn)行轉(zhuǎn)移，與一種絲狀噬菌體（CTXCTX）有關(guān)，）有關(guān)，而非產(chǎn)毒株沒有這段而非產(chǎn)毒株沒有這段DNA DNA 。據(jù)菌體抗原霍亂弧菌可分為據(jù)菌體抗原霍亂弧菌可分為200200個以上的血清型個以上的血清型1881-18961881-1896年間的年間的5 5次及次及1899-19231899-1923年

40、的第年的第6 6次大次大流行均由流行均由O1O1群古典型霍亂弧菌引起。群古典型霍亂弧菌引起。第第7 7次大流行自次大流行自19611961年延續(xù)至今，波及五大洲年延續(xù)至今，波及五大洲19921992年出現(xiàn)了一新的流行株年出現(xiàn)了一新的流行株O139O139血清型霍亂血清型霍亂目前流行的霍亂為目前流行的霍亂為O1O1和和O139O139兩種血清型。兩種血清型。近十年來研制的近十年來研制的新霍亂菌苗有四類新霍亂菌苗有四類： 1.1.BS/WC滅活菌苗滅活菌苗( (BS/WC dead bacteria vaccine ） 由提取的或重組的霍亂毒素由提取的或重組的霍亂毒素B B亞單位亞單位（BSBS）

41、及）及殺死的全殺死的全菌細(xì)胞菌細(xì)胞（WCWC）組成。）組成。2.2.CVD103-HgR減毒活菌苗（減毒活菌苗（Levine 1998） 在美國獲準(zhǔn)，為一次劑量的霍亂活菌苗。它是由霍亂在美國獲準(zhǔn)，為一次劑量的霍亂活菌苗。它是由霍亂經(jīng)典型經(jīng)典型569B569B菌株構(gòu)建而成的菌株構(gòu)建而成的CVD103CVD103減毒株（減毒株（CTACTA- -B B+ +）。并）。并在其染色體溶血素基因在其染色體溶血素基因nlyAnlyA位點插入汞抗性基因作為篩選位點插入汞抗性基因作為篩選標(biāo)記。標(biāo)記。3.3.以沙門氏菌為載體表達(dá)霍亂弧菌以沙門氏菌為載體表達(dá)霍亂弧菌O O抗原的傷寒抗原的傷寒/ /霍亂雙價霍亂雙價

42、菌苗。菌苗。4.4.O139減毒菌苗候選株減毒菌苗候選株CVD112及及Bengal-15 表表6-5 6-5 重組霍亂菌苗的特性重組霍亂菌苗的特性 菌菌苗苗株株親株（生親株（生物型，血物型，血清型）清型）特性特性口服口服副反副反應(yīng)應(yīng)a a定居率定居率（% %）b b保護(hù)率保護(hù)率（% %）c c攻擊苗攻擊苗排菌率排菌率（% %）d d作者作者JBJBK7K70 0NI NI 6961(E1T6961(E1Tor,Inaba)or,Inaba)ctxAB,ctxAB,HgHgr r中等中等10010090902020Kaper et Kaper et al.(1984)al.(1984)CVCV

43、D1D10202O395(ClaO395(Classical ssical Ogawa)Ogawa)ctxA,ctxA,胸腺嘧胸腺嘧啶營養(yǎng)啶營養(yǎng)缺陷型缺陷型無無4040N.DN.Df fN.DN.DLevine et Levine et al(1988b)al(1988b)CVCVD1D10505O395(ClaO395(Classical ssical Ogawa)Ogawa)ctxA, ctxA, hlyAhlyA中等中等100100N.DN.DN.DN.DLevine et Levine et al(1988b)al(1988b)CVD10CVD103-HgR 3-HgR 569B(Ca

44、569B(Cassical,ssical,Inaba)Inaba) ctxA ctxA hlyA:mer hlyA:mer 無無 28 28 100(Class100(Classical)63(Eical)63(EI Tor)I Tor) 2929（ClassicalClassical）83(EI Tox) 83(EI Tox) Levine Levine et al et al (1988a (1988a PERU-PERU-3 3 C6 C6 709(EL 709(EL Tor,InaTor,Inaba)ba) attRSI attRSI reca:htpreca:htpG-ctxB G-

45、ctxB StrStrr r 輕輕微微 83 83 87 87 N.AN.Ae e Taylor Taylor er al er al (1994)(1994)PERU-PERU-14 14 C6 C6 709(EL 709(EL Tor,InaTor,Inaba) ba) attRSIattRSIrecA:hrecA:htpG-ctxB tpG-ctxB StrStrr r, ,絲狀，絲狀，缺乏制動缺乏制動性性 無無 100 100 80 80 N.A N.A Taykor Taykor et al et al (1994) (1994) PERUPERU-15-15C6 C6 709(EL

46、 709(EL Tor,InTor,Inaba)aba)attRSIattRSIrecA:htpG-recA:htpG-ctxB StrctxB Strr r，無制，無制動性動性無無828260608080Kenner Kenner et et a(1995)a(1995)BENGBENGAL-AL-1515MO10(OMO10(O139)139)attRSIattRSIrecA:htpG-recA:htpG-ctxB StrctxB Strr r，無制，無制動性動性無無909083834242Coster Coster et al et al (1995)(1995)a a副反應(yīng)包括由疫苗株

47、引起的腹瀉，腹部痙副反應(yīng)包括由疫苗株引起的腹瀉，腹部痙攣，厭食，發(fā)熱攣，厭食，發(fā)熱b b服苗者糞便中排菌苗株的百分率服苗者糞便中排菌苗株的百分率c c用野生株攻擊服苗者不發(fā)生腹瀉的百分率用野生株攻擊服苗者不發(fā)生腹瀉的百分率d d攻擊后在服苗者糞便培養(yǎng)中可查到野生型攻擊后在服苗者糞便培養(yǎng)中可查到野生型霍亂弧菌的百分率霍亂弧菌的百分率e e未得到數(shù)據(jù)未得到數(shù)據(jù)f f未做未做 另外，發(fā)現(xiàn)霍亂毒素是很強(qiáng)的黏膜另外，發(fā)現(xiàn)霍亂毒素是很強(qiáng)的黏膜免疫原，能有效刺激黏膜免疫原，能有效刺激黏膜sIgAsIgA及血清及血清IgGIgG反應(yīng)，及黏膜免疫記憶反應(yīng)，對反應(yīng)，及黏膜免疫記憶反應(yīng)，對CTCT及及CTBCTB的

48、免疫佐劑活性進(jìn)行了大量的免疫佐劑活性進(jìn)行了大量的研究，對多種蛋白、多糖及病毒、的研究，對多種蛋白、多糖及病毒、細(xì)菌等的免疫佐劑效果得到肯定的認(rèn)細(xì)菌等的免疫佐劑效果得到肯定的認(rèn)識。進(jìn)展情況見表識。進(jìn)展情況見表6-66-6。表表6-6 CT/CT-B6-6 CT/CT-B佐劑應(yīng)用的抗原佐劑應(yīng)用的抗原 抗原（佐劑）抗原（佐劑）途徑途徑參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) 破傷風(fēng)類毒素（破傷風(fēng)類毒素（CTCT）p.op.o（Jackson et al,1993Jackson et al,1993） 鏈球菌鏈球菌M M蛋白（蛋白（CT-BCT-B）i.mi.m（Bessen and Bessen and Tis

49、chetti,1988Tischetti,1988）鏈球菌鏈球菌 （CT-BCT-B） S.Mutans S.Mutans抗原抗原I/III/II（CT/CT-BCT/CT-B） p.op.o（Czerkinsky et Czerkinsky et al,1989;Wu and al,1989;Wu and Rusell,1993Rusell,1993）S.MutansS.Mutans蛋白質(zhì)抗原（蛋白質(zhì)抗原（CT-BCT-B） 流感病毒溶血素（流感病毒溶血素（CT/CT-BCT/CT-B）i.mi.m(Takahashi et al.,1990)(Takahashi et al.,1990)呼

50、吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒FGFG糖蛋白（糖蛋白（CT/CT-CT/CT-B B） p.o,i.m p.o,i.m （Tomasi et al,1994Tomasi et al,1994） S.mutans Gtf.1 S.mutans Gtf.1：pho Apho A融合蛋融合蛋白白 i.mi.m（Walsh,1993Walsh,1993） 多糖多糖p.op.o(Tomasi et al,1994)(Tomasi et al,1994) 沙門氏菌多糖（沙門氏菌多糖（CT-BCT-B）p.op.o（Orr et al.,1994Orr et al.,1994） P Paeruginosaaer

51、uginosa多糖（多糖（CTCT）p.op.o（Abraham and Abraham and Pobinson,1991Pobinson,1991）病毒病毒 完整流感病毒（完整流感病毒（CTCT）p.op.o(Chen and Strober 1990)(Chen and Strober 1990) 仙臺病毒（仙臺病毒（CTCT）p.o,i.p.o,i.m m（Nedrud et al. 1987Nedrud et al. 1987） Neasles Neasles病毒（病毒（CT-BCT-B）i.ni.n(Muller et al,1995)(Muller et al,1995) 呼吸道

52、合胞病毒（呼吸道合胞病毒（RSVRSV）i.ni.n(Reuman et al, 1991)(Reuman et al, 1991)細(xì)菌細(xì)菌/ /原生動物原生動物 幽門螺桿菌（幽門螺桿菌（CTCT）p.op.o(Czinn and Nedrud,1991)(Czinn and Nedrud,1991)弓形體（弓形體（CTCT） p.o p.o （Bourguin et al.,1991Bourguin et al.,1991） 阿米巴原蟲多肽阿米巴原蟲多肽-CT-B-CT-B融合蛋白融合蛋白 p.o p.o (Zhang et al,1995b) (Zhang et al,1995b) 二、痢

53、疾菌苗（二、痢疾菌苗（Dysentery vaccine）痢疾是我國常見和多發(fā)傳染病，其發(fā)病率痢疾是我國常見和多發(fā)傳染病，其發(fā)病率始終居始終居2424種法定傳染病的前二位。種法定傳染病的前二位。主要病原體為痢疾桿菌，其致病特點是定主要病原體為痢疾桿菌，其致病特點是定居侵入結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞，且能迅速溶解吞居侵入結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞，且能迅速溶解吞噬泡膜進(jìn)入胞漿噬泡膜進(jìn)入胞漿. .臨床表現(xiàn)為發(fā)燒，膿血便，腹瀉，里急后臨床表現(xiàn)為發(fā)燒，膿血便，腹瀉，里急后重，甚至引起神經(jīng)癥狀和血尿綜合癥。重，甚至引起神經(jīng)癥狀和血尿綜合癥。痢疾菌共有痢疾菌共有4 4群群：A A志賀氏痢疾菌志賀氏痢疾菌（Shigella S

54、higella dysenteriaedysenteriae），），B B福氏痢疾菌福氏痢疾菌（S.flexneriS.flexneri），C C鮑氏痢疾菌鮑氏痢疾菌（S.bordiiS.bordii）和）和D D宋內(nèi)氏痢疾菌宋內(nèi)氏痢疾菌（S.sonneiS.sonnei）。）。按其菌膜表面按其菌膜表面LPS-OLPS-O抗原分為抗原分為4444個血清型。個血清型。目前已知至少目前已知至少2727個基因和個基因和1515個蛋白與痢疾菌個蛋白與痢疾菌入侵宿主細(xì)胞相關(guān)，它們作為入侵宿主細(xì)胞相關(guān)，它們作為IIIIII型分泌系統(tǒng)的型分泌系統(tǒng)的調(diào)節(jié)子與效應(yīng)子，以接觸依賴方式被分泌進(jìn)入調(diào)節(jié)子與效應(yīng)子，以接

55、觸依賴方式被分泌進(jìn)入宿主細(xì)胞。宿主細(xì)胞。1.1.死菌苗（死菌苗（Dead bacteria vaccine）五、六十年代大量動物及人體實驗證明滅活的痢疾五、六十年代大量動物及人體實驗證明滅活的痢疾全菌非口服途徑，雖可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生高的血清抗體，全菌非口服途徑，雖可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生高的血清抗體，但沒有保護(hù)效果；但沒有保護(hù)效果；用提取的宋氏痢疾菌的核糖體，皮下免疫途徑，在用提取的宋氏痢疾菌的核糖體，皮下免疫途徑，在豚鼠和猴中證實可提供特異保護(hù)，證明豚鼠和猴中證實可提供特異保護(hù)，證明LPS-OLPS-O多糖是保多糖是保護(hù)性抗原；護(hù)性抗原；Robbins(1992)Robbins(1992)將痢疾菌將痢疾菌

56、LPSLPS與不同蛋白載體（與不同蛋白載體（TTTT，DTDT）交聯(lián)進(jìn)行非口服途徑免疫能誘導(dǎo)豚鼠產(chǎn)生高的血）交聯(lián)進(jìn)行非口服途徑免疫能誘導(dǎo)豚鼠產(chǎn)生高的血清抗體反應(yīng)，豚鼠眼模型證明有一定保護(hù)作用。清抗體反應(yīng)，豚鼠眼模型證明有一定保護(hù)作用。宋內(nèi)氏宋內(nèi)氏LPS-O-LPS-O-蛋白（蛋白（TTTT，DTDT）有保護(hù)作用，）有保護(hù)作用，RobbinsRobbins（19961996）將多糖）將多糖- -蛋白結(jié)合苗用于越南士兵，報告宋氏蛋白結(jié)合苗用于越南士兵，報告宋氏多糖多糖- -蛋白結(jié)合苗保護(hù)效果達(dá)蛋白結(jié)合苗保護(hù)效果達(dá)70%70%。 2.2.活菌苗活菌苗（Living bacteria vaccine）

57、采取了多種方法進(jìn)行痢疾菌野生毒株的減毒研究。采取了多種方法進(jìn)行痢疾菌野生毒株的減毒研究。MeitertMeitert等（等（19841984）在膽鹽平皿連續(xù)傳代）在膽鹽平皿連續(xù)傳代3232次獲得次獲得S.f2aS.f2a減毒株減毒株IstratiT32IstratiT32；8080年代初中國近一萬人現(xiàn)場觀察，證實年代初中國近一萬人現(xiàn)場觀察，證實T32T32菌苗安菌苗安全，有保護(hù)活性，效果與免疫次數(shù)和劑量有關(guān)。全，有保護(hù)活性，效果與免疫次數(shù)和劑量有關(guān)。 p8080年代中國國內(nèi)以年代中國國內(nèi)以T32T32為受體株開始致力于構(gòu)為受體株開始致力于構(gòu)建雙價痢疾菌苗株的研究。建雙價痢疾菌苗株的研究。n牟兆

58、欽等，牟兆欽等，19891989年將一編碼宋內(nèi)氏菌年將一編碼宋內(nèi)氏菌LPS-OLPS-O抗抗原的大質(zhì)粒轉(zhuǎn)移至原的大質(zhì)粒轉(zhuǎn)移至T32T32菌中獲得福氏菌中獲得福氏2a2a宋內(nèi)氏雙宋內(nèi)氏雙價痢疾菌苗株價痢疾菌苗株FS-18FS-18，F(xiàn)SM2117FSM2117；宋樹珍等構(gòu)建；宋樹珍等構(gòu)建了了FSFS痢疾雙價菌苗株，其中痢疾雙價菌苗株，其中FSM2117FSM2117識別福氏識別福氏2a2a和識別宋內(nèi)氏痢疾苗和識別宋內(nèi)氏痢疾苗LPS-OLPS-O抗原；抗原；n林紀(jì)勝林紀(jì)勝(1999)(1999)構(gòu)建了構(gòu)建了S.flexenri 2aS.flexenri 2a和和S.dysenteria IS.dy

59、senteria I雙價痢疾菌株雙價痢疾菌株，有雙價免疫原有雙價免疫原性性，現(xiàn)現(xiàn)FSM2117FSM2117與與FSFS兩株痢疾雙價菌苗均已獲國兩株痢疾雙價菌苗均已獲國家新生物制品證書和試生產(chǎn)文號家新生物制品證書和試生產(chǎn)文號。 .基因工程雙價活菌苗基因工程雙價活菌苗p9090年代國內(nèi)外開展了痢疾侵襲活菌苗的研究。主年代國內(nèi)外開展了痢疾侵襲活菌苗的研究。主要針對痢疾菌毒力相關(guān)基因的插入失活或缺失的方要針對痢疾菌毒力相關(guān)基因的插入失活或缺失的方法，構(gòu)建減毒突變株，目的是保存其入侵能力，限法，構(gòu)建減毒突變株，目的是保存其入侵能力，限制其無限繁殖能力。對其免疫原性和保護(hù)效果進(jìn)行制其無限繁殖能力。對其免

60、疫原性和保護(hù)效果進(jìn)行了大量實驗室研究。了大量實驗室研究。n國外工作主要集中在福氏國外工作主要集中在福氏2a2a，福氏，福氏5 5型或型或Y Y型。構(gòu)型。構(gòu)建出福氏建出福氏2a-2a-宋內(nèi)氏雙價侵襲的菌苗株，目的是降低宋內(nèi)氏雙價侵襲的菌苗株，目的是降低目前非侵襲雙價苗的免疫劑量，提高免疫原性。目前非侵襲雙價苗的免疫劑量，提高免疫原性。 p 痢疾桿菌痢疾桿菌IIIIII型分泌系統(tǒng)將不同侵襲蛋白分泌和導(dǎo)型分泌系統(tǒng)將不同侵襲蛋白分泌和導(dǎo)入宿主細(xì)胞的調(diào)節(jié)分子與效應(yīng)分子的鑒定，可能會入宿主細(xì)胞的調(diào)節(jié)分子與效應(yīng)分子的鑒定，可能會找到構(gòu)建痢疾基因工程菌苗新的靶分子和靶基因。找到構(gòu)建痢疾基因工程菌苗新的靶分子和