SOP.AD.VE.02.08質(zhì)粒丟失率檢測(cè)SOP

1、質(zhì)粒丟失率檢測(cè)SOP文件編號(hào)Docume nt No.版本號(hào)Versio n No.01職務(wù)或崗位Title姓名Name簽名 Sig nature日期Date起草人/修訂人Drafted By分析工程師穆玲玲年月日審核人Reviewed By分析主管王濤年月日審核人Reviewed ByQA專員丁敏年月日審核人年月日Reviewed By審核人Reviewed By年月日審核人Reviewed By年月日批準(zhǔn)人Approved By分析副總裁朱祥平年月日批準(zhǔn)人Approved ByQA副總監(jiān)梅林年月日生效日期Valid Si nee年月日頒發(fā)部門Issued by質(zhì)量保證部復(fù)審日期年月日文件拷

2、貝號(hào)Review DateCopy No.文件分發(fā)至質(zhì)量保證部 口分析開(kāi)發(fā)部 口生產(chǎn)部行政辦公室 財(cái)務(wù)部口Distributed to技術(shù)轉(zhuǎn)移部 口藥品注冊(cè)部 口工程部人力資源部 IT部 口目錄1. 目的Purpose 22. 范圍Scope 23. 定義Definition 34. 職責(zé)Responsibilities 35. 弓丨用標(biāo)準(zhǔn) Reference to standard 36. 材料 Materials 37. 流程圖 Flow Chart 38. 程序 Procedure 39. EHS 410. 派生記錄 Derived records 411. 相關(guān)文件Referenced

3、ocuments 412. 注意事項(xiàng)Notes 413 .變更記載 Change record 41. 目的 Purpose規(guī)程描述了質(zhì)粒丟失率檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作方法及步驟，使其檢測(cè)操作規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化。2. 范圍 Scope適用于本公司重組人源化抗VEGF單克隆抗體（Fab）發(fā)酵時(shí)，誘導(dǎo)前與加熱前的質(zhì)粒丟失率檢查。3. 定義 DefinitionE.coli : Escherichiacoli 大腸桿菌CFU Cell Formi ng Un it細(xì)胞形成單位Kana： Kanamycin 卡那霉素4. 職責(zé) Responsibilities分析部負(fù)責(zé)維護(hù)本規(guī)程，分析主管，QA負(fù)責(zé)確保依據(jù)本規(guī)程實(shí)

4、施。5. 弓丨用標(biāo)準(zhǔn) Reference to standard中國(guó)藥典2015年版三部附錄區(qū) G質(zhì)粒丟失率檢查法。6. 材料 Materials6.1儀器全自動(dòng)高壓滅菌鍋，超凈工作臺(tái)，37 C培養(yǎng)箱。6.2試劑胰蛋白胨，酵母粉，NaCI，瓊脂粉和卡那霉素溶液以及無(wú)菌的PBS6.3器材藍(lán)蓋瓶，試管，空平皿，酒精燈，涂布器，移液器，槍頭等。6.4培養(yǎng)基的配制6.4.1 LB 固體培養(yǎng)基641.1 稱取胰蛋白胨 2.50g、酵母粉1.25g、NaCl2.50g、瓊脂粉2.50g于藍(lán)蓋瓶中，力口 Milli-Q 水至250 mL,于高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi)121 C滅菌20 min。6.4.1.2 30 C

5、左右上述培養(yǎng)基在超凈工作臺(tái)里分裝到空平板中，每個(gè)分裝大約15-20ml，凝固后放28C冰箱中可以保存一個(gè)月。含卡那霉素的LB固體培養(yǎng)基6.4.2.1 將卡那霉素250uL（濃度為50mg/ml）加入冷卻至30C左右的LB固體培養(yǎng)基中，混勻，使其工作濃 度為50卩g/ml。6.4.2.2 30 C左右上述培養(yǎng)基在超凈工作臺(tái)里分裝到空平板中，每個(gè)分裝大約15-20ml，凝固后放28C冰箱中可以保存一個(gè)月。注：配制體積可根據(jù)需求成比例增加。7. 流程圖 Flow Chart無(wú)。8. 程序 Procedure8.1誘導(dǎo)前的菌體質(zhì)粒丟失率檢測(cè)用移液器吸取lOOL誘導(dǎo)前的菌體，加入無(wú)菌PBS 900卩L,

6、稀釋至10-1，以此類推稀釋至10-8;用移液器分別吸取100L的10-6、10-7、10-8稀釋度的菌液，分別涂布到LB固體培養(yǎng)基平板上，置37C 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)17小時(shí)；挑取100個(gè)生長(zhǎng)良好的單菌落，分別接種到LB固體培養(yǎng)基和含卡那霉素的LB固體培養(yǎng)基平板上，置37C培養(yǎng)箱培養(yǎng)12-15小時(shí)；8 1 4計(jì)算質(zhì)粒丟失率：-（LB固體培養(yǎng)基上的菌落數(shù) -含卡那霉素LB固體培養(yǎng)基上的菌落數(shù) ）x100%.計(jì)算質(zhì)粒 率：LB固體培養(yǎng)基上的菌落數(shù)x %8.2加熱前的菌體質(zhì)粒丟失率檢測(cè)用移液器吸取100 X 加熱前的菌體，加入無(wú)菌PBS 900卩L,稀釋至10-1，以此類推稀釋至10-6;用移液器分別吸取100L的10-4、10-5、10-6稀釋度的菌液，分別涂布到LB固體培養(yǎng)基平板上，置37C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)17小時(shí);挑取100個(gè)生長(zhǎng)良好的單菌落，分別接種到LB培養(yǎng)基和含卡那霉素的培養(yǎng)基上，置37C培養(yǎng)箱培養(yǎng)12-15小時(shí);計(jì)算質(zhì)粒丟失率（LB固體培養(yǎng)基上的菌落數(shù)-含卡那霉素LB固體培養(yǎng)基上的菌落數(shù)）x100%LB固體培養(yǎng)基上的菌落數(shù)8.3判定標(biāo)準(zhǔn)無(wú)。8.4記錄填寫質(zhì)粒丟失率檢測(cè)記錄。9. EHS無(wú)。10. 派生記錄 Derived records質(zhì)粒丟失率檢測(cè)記錄11. 相關(guān)文件 Referenee documents高壓滅菌鍋使用 SOPSW-CJ-1FD超凈工作臺(tái)使