高壓液相色譜儀基本操作步驟

1、Agilent1100高壓液相色譜儀基本操作步驟sD    【字體：大 中 小】Agilent1100液相基本操作步驟(一、開機：    1、打開計算機,進入Windows NT （或Windows 2000）畫面,并運行Bootp Server程序。     2、打開 1100 LC 各模塊電源。     3、待各模塊自檢完成后，雙擊Instrument 1 Online圖標，化學工作站自動與1100LC通訊，進入的工作站畫面。 &#

2、160;  4、從“View”菜單中選擇“Method and Run control”畫面, 單擊”View”菜單中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“”標志，來調(diào)用所需的界面。   5、把流動相放入溶劑瓶中。   6、打開Purge閥。   7、單擊Pump圖標，出現(xiàn)參數(shù)設定菜單，單擊Setup pump選項，進入泵編輯畫面。   8 、設Flow：5ml/min，單擊

3、OK。   9、單擊Pump圖標，出現(xiàn)參數(shù)設定菜單，單擊Pump control選項，選中On，單擊OK，則系統(tǒng)開始Purge，直到管線內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無氣泡為止,切換通道繼續(xù)Purge，直到所有要用通道無氣泡為止。   10、單擊Pump圖標，出現(xiàn)參數(shù)設定菜單，單擊Pump Control選項，選中Off，單擊Ok關泵， 關閉Purge  valve。   11、單擊Pump圖標，出現(xiàn)參數(shù)設定菜單，單擊Setup pump選項，進入Pump編輯畫面，設Flow：1.0ml/min。   12、單擊

4、泵下面的瓶圖標，輸入溶劑的實際體積和瓶體積。也可輸入停泵的體積。單擊Ok。 （二）數(shù)據(jù)采集方法編輯：    1、開始編輯完整方法：     從“Method”菜單中選擇“Edit entire method” 項，如上圖所示選中除“Data analysis ”外的三項，單擊Ok，進入下一畫面。    2、方法信息：     在“Method Comments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。   &

5、#160; 單擊Ok 進入下一畫面。    3、泵參數(shù)設定：（以二元泵為例）      在“Flow”處輸入流量,如1ml/min，在“Solvent B”處輸入70.0,(A=100-B ,也可Insert 一行”Timetable” ,編輯梯度。在“Pressure Limits Max”處輸入柱子的最大耐高壓，以保護柱子。       單擊Ok進入下一畫面。    4、自動進樣器參數(shù)設定:   

6、60; 選擇合適的進樣方式, 進樣體積 1.0ul ,洗瓶位置為6號?！癝tandard Injection”-只能輸入進樣體積，此方式無洗針功能?！癐njection with Needle Wash”-可以輸入進樣體積和洗瓶位置，此方式針從樣品瓶抽完樣品后，會在洗瓶中洗針?！癠se injector program”-可以點擊Edit 鍵進行進樣程序編輯。     點擊Ok進入下一畫面。    5、柱溫箱參數(shù)設定:      在”Temperature”下面的方

7、框內(nèi)輸入所需溫度,并選中它,點擊”more>>” 鍵,如圖所示,選中”Same as left”-使柱溫箱的溫度左右一致。       點擊ok進入下一畫面。     6、VWD檢測器參數(shù)設定:       在”Wavelength”下方的空白處輸入所需的檢測波長,如254nm,  在”Peak width (Response time”下方點擊下拉式三角框,選擇合適的響應時間, 如>0.1min 

8、 (2s。       在Timetable 中可以“Insert”一行，輸入隨時間切換的波長，如1min  ，波長=300nm。點擊ok進入下一畫面。     7、DAD檢測器參數(shù)設定:       檢測波長: 254nm,BW=30nm,     參比波長=350nm,BW=100nm;         檢測波長：

9、一般選擇最大吸收處的波長。樣品帶寬BW： 一般選擇最大吸收值一半處的整個寬度。參比波長：一般選擇在靠近樣品信號的無吸收或低吸收區(qū)域。參比帶寬BW：至少要與樣品信號的帶寬相等，許多情況下用100nm作為缺省值。Peak width（Response time）：其值盡可能接近要測的窄峰峰寬。Slit狹縫窄，光譜分辨率高；寬時，噪音低。同時可以輸入采集光譜方式，步長，范圍，閾值。選中所用的燈。       點擊Ok進入下一畫面。     8、RID檢測器參數(shù)設定:  &

10、#160;    色譜條件:            進樣體積: 20ul 。      光學單元溫度:  Off 。          極性: 正 。           峰寬(響應時間 :  4s  。

11、60;      “Optical Unit Temperature”-若環(huán)境溫度控制在±2,設定為Off,  若環(huán)境溫度不穩(wěn)定,則設定光學單元溫度為高于環(huán)境溫度5度,以防樣品在池中沉淀。“Peak width”-大多數(shù)分析設為4S，只有在高速分析下設為更短。“Automatic recycling after analysis”-在不進行分析時可以讓流動相循環(huán)，節(jié)省流動相，檢測器連續(xù)運行，可隨時投入使用。       點擊RID圖標，選擇RID 

12、; Control ：Heater 設為On，若要循環(huán)流動相，必須將“Recycling Valve”設為ON。手動purge 參比池，將其設為On，并輸入Purge 時間。        9、FLD檢測器參數(shù)設定:        色譜條件：             樣品：P/N 01018-68704  用甲醇稀釋為1:10。  

13、60;         進樣體積：5ul。            柱溫箱:  30 。   EX=246nm, EM=317nm ,PMT=10。            響應時間=4s.     停止時間： 出峰完畢。  

14、0;         Excitation A: 激發(fā)波長:200-700nm,步長為1nm,或Zero Order。            Emission:  發(fā)射波長: 280-900nm, 步長為1nm,或Zero Order。             PMT: 大多數(shù)應用適當?shù)脑O定值為10

15、,若高濃度樣品峰被切平頭,則減少 PMT 值。          “Peak width”：大多數(shù)應用設為4s，只有快速分析采用小的設定值。            Multi Ex ： 多波長及光譜（激發(fā)）。            Multi Em：多波長及光譜（發(fā)射）。    

16、         同時可以輸入范圍Range、步長step、采集光譜。      10、在“ Run time checklist ”中選中“Data acquisition”，單擊Ok。      11、單擊“Method”菜單，選中“Save method as”，輸入一方法名，如“test”，單擊Ok。      12、從菜單 “View”中選中”O(jiān)nline signa

17、l” ,選中Windows 1,然后單擊Change 鈕,將所要繪圖的信號移到右邊的框中,點擊Ok.(如同時檢測二個信號,則重復12,選中Windows 2。      13、從“Run  control ”菜單中選擇“Sample info”選項，如上圖所示，輸入操作者名稱，在“Data file ”中選擇“Manual”或“Prefix”。      區(qū)別: Manual-每次做樣之前必須給出新名字,否則儀器會將上次的數(shù)據(jù)覆蓋。Prefix在Prefix 框中輸入前綴，在

18、Counter 框中輸入計數(shù)器的起始位，儀器會自動命名，如vwd0001，vwd0002。     14、從Instrument 菜單選擇System on。     15、等儀器Ready，基線平穩(wěn)，從Method菜單中選擇“Run method”，進樣。 （三）、數(shù)據(jù)分析方法編輯:    1、從“View”菜單中，單擊“Data analysis”進入數(shù)據(jù)分析畫面。    2、從“File”菜單選擇“Load signal”，選中您的數(shù)據(jù)文件

19、名，如下圖所示。單擊Ok。    3、做譜圖優(yōu)化,從“Graphics”菜單中選擇“Signal options”選項，。從Ranges中選擇Auto scale及合適的顯示時間，單擊ok,或選擇”Use Ranges” 調(diào)整。反復進行，直到圖的比例合適為止。    4、積分:       (1、從“Integration”中選擇 “Auto integrate”,如積分結(jié)果不理想,再從菜單中選擇“Integration  Events”選項，選擇合適的Slope sensi

20、tivity，Peak width，Area reject，Height reject。      (2、從“Integration”菜單中選擇“Integrate”選項， 則數(shù)據(jù)被積分。      (3、如積分結(jié)果不理想，則修改相應的積分參數(shù)，直到滿意為止。      (4、單擊左邊“”圖標，將積分參數(shù)存入方法。    5、打印報告:      

21、 (1、從“Report”菜單中選擇“Specify report”選項，進入如上畫面。      (2、單擊“Quantitative  Results”框中Calculate右側(cè)的黑三角，選中Percent（面積百分比），其它選項不變。      (3、單擊Ok.      (4、從“Report”菜單中選擇“Print report”，則報告結(jié)果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機上，則單擊Report 底部的“Print”鈕。

22、60;(四、關機:        關機前，用 100%的水沖洗系統(tǒng)20分鐘，然后用有機溶劑沖洗系統(tǒng)10分鐘（如ACN），然后關泵，（適于反相色譜柱）。正相色譜柱用適當?shù)娜軇_洗        退出化學工作站，及其它窗口，關閉計算機（用shut down關）。        關掉Agilent 1100電源開關。高壓液相色譜HPLC常見故障及排除方法sD    【字體：大 中 小

23、】診狀(一保留時間變化可能的原因 : 解 決 方 法1.柱溫變化 : 柱恒溫 2.等度與梯度間未能充分平衡 : 至少用10倍柱體積的流動相平衡柱 3.緩沖液容量不夠 : 用>25mmol/L的緩沖液 4.柱污染 : 每天沖洗柱 5.柱內(nèi)條件變化 : 穩(wěn)定進樣條件,調(diào)節(jié)流動相 6.柱快達到壽命 : 采用保護柱 (二保留時間縮短可能的原因 : 解 決 方 法1.流速增加 : 檢查泵,重新設定流速 2.樣品超載 : 降低樣品量 3.鍵合相流失 : 流動相PH值保持在37.5檢查柱的方向 4.流動相組成變化 : 防止流動相蒸發(fā)或沉淀 5.溫度增加 : 柱恒溫 (三保留時間延長可能的原因

24、 : 解 決 方 法1.流速下降 : 管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡 2.硅膠柱上活性點變化 : 用流動相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱 3.鍵合相流失 : 同前(二3 4.流動相組成變化 : 同前(二4 5.溫度降低 : 同前(二5 (四出現(xiàn)肩峰或分叉可能的原因 : 解 決 方 法1.樣品體積過大 : 用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15% 2.樣品溶劑過強 : 采用較弱的樣品溶劑 3.柱塌陷或形成短路通道 : 更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件 4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效 : 更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品 5.進樣器損壞 : 更換進樣器轉(zhuǎn)子(五鬼峰可能的原因