HPLC法測定鹽酸異丙嗪注射液有關物質

1、HPLC法測定鹽酸異丙嗪注射液有關物質                          作者：宋新康饒春意，姚海燕，梁香【摘要】  目的 建立HPLC法測定鹽酸異丙嗪注射液有關物質含量。方法 采用反相高效液相色譜法：色譜柱為SHIMADEU Vp?C18柱，甲醇?菜?(用冰醋酸調節(jié)pH值為2.25±0.05)(體積比4951)

2、為流動相，流速：0.8 mL?min-1，柱溫：30 ，檢測波長為254 nm。結果 在正常貯藏條件下，11批樣品的雜質總量均在0.4%0.6%之間，定量限小于0.5 g。結論 本法可用于鹽酸異丙嗪注射液中有關物質的含量測定。 【關鍵詞】  高效液相色譜法;鹽酸異丙嗪注射液;有關物質Abstract:Objective To establish a HPLC method to determine related substance in promethazine hydrochloride injection. Method The HPLC was carried out on

3、a C18 column,of which the mobile phase was consisted of water (adjusted to pH 2.25±0.05 by acetate) and methanol (5149). The detective wavelength was 254 nm. Results The contents of 11 samples were above 0.4%,and below 0.6% under normal store conditions. The limit of quantification was under 0.

4、5 g. Conclusion It is simple,accurate and feasible for determining related substance in promethazine hydrochloride injection by HPLC.Key words:HPLC; promethazine hydrochloride injection; related substance 鹽酸異丙嗪注射液為常用抗組胺藥，本品以吩噻嗪為母核經縮合而成，在縮合反應時產生N?N，?踩?甲基?10H?卜臟玎邯?10?慘野芬旃固澹?雖經丙酮精制等步驟，但仍難以完全除去，故成品中可能帶入

5、吩噻嗪及上述異構體等雜質。本品不穩(wěn)定，在貯存過程中因光照或受熱可分解1。1977年版中國藥典用比色法檢查吩噻嗪，1985年版改為薄層色譜法檢測至今2，但薄層色譜法操作復雜、定量困難。本文采用HPLC法測定鹽酸異丙嗪注射液中的有關物質，重現(xiàn)性好、靈敏度高、方法簡便，可用作該制劑有關物質的含量測定。1 儀器與試藥Agilent Technologies 1200sereir 型高效液相色譜儀，DE71361394檢測器，SHIMADEU Vp?C18柱(250 mm×4.6 mm，5m )(日本島津)。鹽酸異丙嗪注射液(廣東邦民制藥有限公司，批號：070301;天津藥業(yè)集團新鄭股份有限公

6、司，批號：0801082、0802182、0802181;廣東南國藥業(yè)有限公司，批號：080201;西南藥業(yè)股份有限公司，批號：071204;北京市永康藥業(yè)有限公司，批號：07090252、07090152、08020152;上海禾豐制藥有限公司，批號：071106、070901)、鹽酸異丙嗪對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：100422?200501)、甲醇(色譜純，天津四友生物醫(yī)學技術有限公司)，維生素C對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號100425?200301)，水為超純水，其他試劑均為分析純。2 方法與結果2.1 溶液的制備2.1.1 鹽酸異丙嗪對照品溶液的制備 取鹽酸異丙嗪對

7、照品適量，精密稱定，加入0.1 mol?L-1鹽酸溶液稀釋成每1 mL中含鹽酸異丙嗪0.02 mg的溶液，即得。2.1.2 樣品溶液的制備 精密量取本品2 mL(約相當于鹽酸異丙嗪50 mg)，置250 mL量瓶中，加0.1 mol?L-1鹽酸溶液稀釋制成每1 mL中含鹽酸異丙嗪0.2 mg的溶液，作為供試品溶液2,3;精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，加0.1 mol?L-1鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。2.1.3 陰性溶液的制備 按處方量稱取除鹽酸異丙嗪外的輔料，加水制成陰性溶液。2.1.4 維生素C對照品溶液的制備 取維生素C對照品，精密稱定，加0.1 mol?L-1鹽酸

8、溶液稀釋制成每1 mL中含0.02 mg的溶液，作為維生素C對照品溶液。2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗色譜柱：SHIMADEU Vp?C18柱(250 mm×4.6 mm，5 m)，流動相：甲醇?菜?(用冰醋酸調節(jié)pH值為2.25±0.05)(體積比4951)，流速：0.8 mL?min-1，柱溫30 ，檢測波長2：254 nm，進樣量：20 L。取“2.1”項下各溶液分別進樣測定，色譜圖結果見圖1。從圖中可見，主峰保留時間為8 min左右，理論塔板數不小于3 300，主峰與相鄰雜質峰的分離度大于2.0。2.3 專屬性試驗根據鹽酸異丙嗪的穩(wěn)定性及中國藥典2005年版附錄藥

9、品質量標準分析方法驗證指導原則要求，對廣東邦民制藥有限公司樣品(批號：070301)、輔料進行強制降解試驗(加速破壞試驗)，以驗證分析方法對相關降解產物檢查的專屬性。2.3.1 氧化破壞試驗 精密量取樣品、陰性溶液各2 mL，分別置250 mL量瓶中，加質量分數30%的過氧化氫溶液2 mL，再加0.1 mol?L-1 鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取20 L進樣，記錄色譜圖(見圖2A)。2.3.2 高溫破壞試驗 精密量取樣品、陰性溶液各2 mL，分別置250 mL量瓶中，置80 恒溫水浴鍋中水浴加熱40 min后，加0.1 mol?L-1鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取20 L進樣

10、，記錄色譜圖。見圖2B。2.3.3 酸破壞試驗 精密量取樣品、陰性溶液各2 mL，分別置250 mL量瓶中，加0.1 mol?L-1 硫酸溶液 2 mL，搖勻，放置30 min，加0.1 mol?L-1鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取20 L進樣，記錄色譜圖(見圖2C)。2.3.4 堿破壞試驗 精密量取樣品、陰性溶液各2 mL，分別置250 mL量瓶中，加0.1 mol?L-1氫氧化鈉溶液2 mL，搖勻，放置30 min，加0.1 mol?L-1鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取20 L進樣，記錄色譜圖(見圖2D)。2.3.5 光照破壞試驗 精密量取樣品、陰性溶液各2 mL，分別置2

11、50 mL量瓶中，置1 500 LX光照度的日光燈下光照72 h后，加0.1 mol?L-1鹽酸稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取20 L進樣，記錄色譜圖(見圖2E)。2.3.6 專屬性試驗結果分析 根據專屬性試驗色譜圖進行分析，陰性溶液在平行試驗中對有關物質的測定不產生干擾，且各雜質峰分離度均符合規(guī)定。樣品在酸、堿條件下較為穩(wěn)定，經高溫、氧化、光照破壞后雜質數分別增加11、7和7個，總雜質峰面積分別增大566、254、1 208 mAU。光照破壞樣品圖譜在8.7、10.4 min雜質峰面積分別增大7.4倍和49.1倍。通過樣品溶液與陰性溶液圖譜比較可知，雜質由鹽酸異丙嗪分解產生。2.4 穩(wěn)定性與

12、精密度試驗2.4.1 穩(wěn)定性試驗 取本品(批號070301)適量，配制成20 g?mL-1溶液，于0、1、2、3、4、5、6、7 h分別進樣。 結果雜質峰個數及峰面積保持不變， 雜質峰面積RSD值為0.6%，表明其在7 h內穩(wěn)定。2.4.2 重復性試驗 精密量取本品(批號070301)2.0 mL，共9份，分別置250 mL量瓶中，加0.1 mol?L-1的鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取20 L,進樣。其雜質峰面積的RSD值為1.3%。2.5 定量限目前尚無鹽酸異丙嗪有關雜質對照品，故采用本實驗建立的方法與2005年版中國藥典二部薄層色譜法進行對比。原方法定量限為0.5 g3,對

13、于原方法檢測無雜質斑點的樣品，用本文方法檢出雜質總量為0.3%，故可認定本文方法的定量限小于0.5 g,符合檢測要求。2.6 測定法精密吸取“2.1.2”項下對照溶液20 L注入液相色譜儀，調節(jié)檢測器靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的20%。精密吸取供試品溶液、對照溶液、維生素C對照品溶液各20 L，分別進樣，記錄色譜圖至主峰保留時間的3倍(見圖1)。在保留時間約3.4 min時出現(xiàn)1個較大色譜峰，而片劑在使用該法測定時無此峰。經證明該色譜峰為輔料維生素C，故采用維生素C對照品進行定位，最后從雜質峰中扣除該色譜峰面積的方法進行測定。用面積歸一化法計算各雜質峰面積總和不得大于對照溶液主峰面

14、積。2.7 樣品有關物質測定結果依法對6個廠家11批樣品進行有關物質測定，見表1。根據2005年版中國藥典二部的規(guī)定1：鹽酸異丙嗪注射液雜質總含量不得超過2.5%。由表1可見，在正常貯藏條件下，11批樣品的雜質總量均在0.4%0.6%之間，因此將本制劑有關物質總量控制在2.0%內。表1 鹽酸異丙嗪注射液有關物質的測定結果3 討 論3.1 色譜柱的選擇參考USP30版，用苯基柱進行測定，經反復試驗，其色譜峰對稱性差，適應范圍小。查閱大量文獻并經過多次實驗，以C18柱分離效果最好，且其在中國藥典中使用普遍，故采用C18柱。3.2 流動相的選擇在文獻報道中，有人采用0.5%三乙胺溶液(用磷酸調pH至

15、2.5)?慘譯?(體積比6535)4、(0.02 mol/L磷酸二氫鉀緩沖液)?慘譯妾布狀?(體積比601723)為流動相5或乙腈?0.023 mol?L-1磷酸鹽作流動相6，7。本文從保護環(huán)境與色譜柱的角度出發(fā)，并結合鹽酸異丙嗪在酸性條件下穩(wěn)定性較好的性質，選用甲醇?菜?(用冰醋酸調節(jié)pH值為2.25±0.05)(體積比4951)作為流動相，減少了毒性較大的乙腈及對柱保護不利的鹽類物質的使用。3.3 溶劑的選擇在片劑含量測定考察中，曾采用水作為稀釋溶劑，但其含量測定結果與2005年版中國藥典所使用紫外方法測定的結果比較，數值明顯偏低，故選用0.1 mol?L-1的鹽酸溶液作為溶劑。

16、為統(tǒng)一2種制劑的檢測方法，將注射劑稀釋溶劑亦改為0.1 mol?L-1的鹽酸溶液。本實驗在鹽酸異丙嗪注射液和片劑含量測定研究的基礎上，同時研究起草有關物質測定方法。該法避免了2005年版中國藥典使用薄層色譜法測定所造成的人為判斷結果的誤差，且方法簡便、穩(wěn)定、檢測限低，可作為該藥品有關物質的檢測方法。【參考文獻】  1 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2005年版二部M.北京：化學工業(yè)出版社,2005:512.2 United States Pharmacopoeia Convention Inc. USP 30:M.2008:3037-3038.3 衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國藥典：1990年版二部藥典注釋M.北京：化學工業(yè)出版社,1996:595.4