研究當(dāng)歸對(duì)血虛小鼠的抗疲勞作用

1、研究當(dāng)歸對(duì)血虛小鼠的抗疲勞作用        摘要：目的研究當(dāng)歸對(duì)血虛小鼠的抗疲勞作用。方法通過(guò)環(huán)磷酰胺造小鼠血虛模型，給予當(dāng)歸水煎液2周后，對(duì)血虛小鼠體重、外周血象、游泳時(shí)間、運(yùn)動(dòng)后血乳酸（LAC）和尿素氮（BUN）的影響。結(jié)果當(dāng)歸水煎液能明顯增加血虛小鼠體重、升高紅細(xì)胞總數(shù)（RBC）、白細(xì)胞總數(shù)（WBC）和血紅蛋白含量（HGB）； 6 g/（kg·d）的當(dāng)歸水煎液組還能顯著延長(zhǎng)游泳時(shí)間、降低運(yùn)動(dòng)后的LAC及BUN。結(jié)論當(dāng)歸水煎液能提高血虛小鼠的抗疲勞作用。 關(guān)鍵詞： 當(dāng)歸； 血虛； 抗疲勞 

2、   疲勞屬中醫(yī)“虛損”范疇，中醫(yī)認(rèn)為精（津）血為體力產(chǎn)生的物質(zhì)基礎(chǔ)，它的生化和運(yùn)行與中醫(yī)脾、腎、肝、心有密切關(guān)系，人的耐力亦由此而生。盡快消除疲勞，提高機(jī)體體質(zhì)，中醫(yī)藥有很大優(yōu)勢(shì)。當(dāng)歸Angelica sinensis (Oliv.) Diels的干燥根具有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤(rùn)燥滑腸等功效。本文采用化學(xué)藥物損傷法造成小鼠血虛模型，研究當(dāng)歸對(duì)血虛模型小鼠的影響。1  器材1.1  藥品與試劑 當(dāng)歸Angelica sinensis (Oliv.) Diels，生品，購(gòu)于北京崇光飲片廠，產(chǎn)地甘肅，取當(dāng)歸500 g，加10倍量的水，開(kāi)始煎煮。第1次1 h，

3、第2次30 min，第3次30 min。合并煎液，過(guò)濾蒸發(fā)濃縮，然后放入烘箱烘干成粉末。 最終1 g當(dāng)歸粉末相當(dāng)于原藥材3.50 g。    全血乳酸試劑盒，南京建成生物工程研究所產(chǎn)品，批號(hào)20050615；尿素氮試劑盒，南京建成生物工程研究所產(chǎn)品，批號(hào)20050615；環(huán)磷酰胺，上海華聯(lián)制藥有限公司產(chǎn)品，批號(hào)031205。1.2 儀器SWELAB血球計(jì)數(shù)儀，Boule Medical AB 公司產(chǎn)品；瑞典stockholmUV757CRT紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，上海精密科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品。1.3 動(dòng)物KM種小鼠，雌雄各半，體重（22±2）g，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科

4、學(xué)院動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK (京) 2004-0001。2 方法    小鼠自然飼養(yǎng)34 d，隨機(jī)分成5組：正常對(duì)照組、血虛模型組、當(dāng)歸水煎液低劑量組1.5 g/kg（按生藥量計(jì)）、當(dāng)歸水煎液中劑量組3 g/kg、當(dāng)歸水煎液高劑量組6 g/kg，每組12只。給藥組按給藥劑量連續(xù)灌胃14 d，1次/d，對(duì)照組和模型組則灌胃給予相等體積的生理鹽水。除正常對(duì)照組外，其余4組小鼠于第5 d開(kāi)始給藥1 h后，分別經(jīng)腹腔注射環(huán)磷酰胺100 mg/kg，連續(xù)注射3 d1。正常對(duì)照組同時(shí)注射等量的生理鹽水。2.1  外周血象測(cè)定 于末次給藥后30 min，眼眶

5、取血，測(cè)定小鼠紅細(xì)胞總數(shù)（RBC）、白細(xì)胞總數(shù)（WBC）和血紅蛋白含量（HGB）。2.2  小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)?zāi)┐谓o藥后30 min后，鼠尾根部負(fù)荷6% 體重的鉛絲，置于游泳箱中游泳（水深35 cm, 水溫25），記錄小鼠自游泳開(kāi)始至死亡的時(shí)間。以小鼠10 s內(nèi)無(wú)法再浮出水面為依據(jù)，來(lái)判斷動(dòng)物死亡2，3。2.3  血乳酸（LAC）的測(cè)定末次給藥30 min后小鼠尾部負(fù)重（體重4%）, 然后將其放入水深35 cm, 水溫(30±0.5)游泳箱中游泳10 min。休息15 min后，用毛細(xì)玻璃管眼球采血20 l，用全血乳酸測(cè)定試劑盒進(jìn)行血乳酸測(cè)定。2.4  血

6、尿素氮（BUN）的測(cè)定末次給藥30 min后, 將小鼠放入水深35 cm, 水溫(30.0±0.5)游泳箱中不負(fù)重游泳90 min，休息60 min后，拔眼球采血0.5 ml(不加抗凝劑)，依照血清尿氮素試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。于520 nm下，30 min內(nèi)測(cè)定各管吸收度，換算為血尿素氮含量，依照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作測(cè)定BUN含量。3  結(jié)果3.1  體征與體重造模小鼠非常行動(dòng)遲緩，眼睛暗淡無(wú)光、血色暗紅。正常對(duì)照組和給藥組小鼠活動(dòng)靈活, 皮毛光澤, 鼠尾粉紅。    當(dāng)歸水煎液對(duì)血虛小鼠體重的影響表1所示，給藥7 d后，各組間體重仍無(wú)差異。

7、但第14天，與正常組比較，模型組小鼠體重明顯下降(P<0.001)；與模型組比較，低，中，高劑量組動(dòng)物的體重均有顯著性增加（P<0.05，P<0.01）。表1  當(dāng)歸水煎液對(duì)血虛小鼠體重的影響(略)3.2 當(dāng)歸水煎液對(duì)血虛小鼠RBC，WBC和HGB的影響血象的改變是血虛最明顯的癥狀。當(dāng)歸活血補(bǔ)血，能明顯改善血虛小鼠的外周血象。結(jié)果見(jiàn)表2。表2  當(dāng)歸水煎液對(duì)血虛小鼠血象的影響(略)    從表2可看出，與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠血象顯著降低（P<0.01），說(shuō)明造血虛模型成功；與模型組比較，當(dāng)歸水煎液低、中、高劑量組能

8、顯著升高血虛小鼠RBC水平(P<0.001)，當(dāng)歸水煎液中劑量組能顯著升高血虛小鼠的WBC水平(P<0.01)，低、高劑量組能明顯升高WBC水平(P<0.05)；當(dāng)歸水煎液低、中、高劑量組水煎液組均能顯著升高血虛小鼠HGB水平(P<0.01)。3.3  當(dāng)歸水煎液對(duì)血虛小鼠游泳時(shí)間的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3所示，血虛小鼠體力下降, 與正常組比較，游泳時(shí)間明顯縮短。當(dāng)歸水煎液高劑量組能顯著延長(zhǎng)血虛小鼠游泳時(shí)間, 且與模型組比較, 有非常顯著性差異(P< 0.01)。表3  當(dāng)歸水煎液對(duì)血虛小鼠游泳時(shí)間的影響(略)3.4  當(dāng)歸水煎液對(duì)血虛小鼠

9、LAC的影響LAC是評(píng)價(jià)劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí)機(jī)體疲勞程度最常用的生化指標(biāo)。當(dāng)歸水煎液對(duì)小鼠負(fù)重4%游泳10 min，休息15 min后LAC的影響如表4所示，與正常組對(duì)比，血虛小鼠在游泳后LAC顯著性增加(P< 0.01)。與模型組比較，當(dāng)歸水煎液高劑量組能明顯降低血虛小鼠運(yùn)動(dòng)后的LAC(P< 0.05)。表4  當(dāng)歸水煎液對(duì)血虛小鼠LAC的影響(略)3.5  當(dāng)歸水煎液對(duì)血虛小鼠BUN的影響B(tài)UN與機(jī)體機(jī)能、疲勞程度以及負(fù)荷量的大小呈密切正相關(guān)，因此可作評(píng)定運(yùn)動(dòng)量的指標(biāo)4。當(dāng)歸水煎液對(duì)小鼠不負(fù)重游泳90 min，休息60 min后BUN的影響如表5所示，與正常組對(duì)比，血

10、虛小鼠在游泳后BUN顯著性增加(P< 0.01)。與模型組比較，當(dāng)歸水煎液高劑量組能明顯降低運(yùn)動(dòng)后的BUN (P< 0.05)。表5  當(dāng)歸水煎液對(duì)血虛小鼠BUN的影響(略)4  討論    1 2 下一頁(yè)             中醫(yī)認(rèn)為，經(jīng)脈失于濡養(yǎng)，心血不足為血虛。當(dāng)歸具有補(bǔ)血活血之功效。本研究證明當(dāng)歸水煎液能明顯改善環(huán)磷酰胺所致血虛小鼠的體征，并使小鼠體重增加，同時(shí)明顯升高血虛小鼠RBC

11、，Hb，WBC水平，即具有補(bǔ)血作用。    血虛是慢性疲勞綜合征的病機(jī)之一。中華人民共和國(guó)保健食品檢驗(yàn)和評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范（試行）2004版中緩解體力疲勞功能檢測(cè)方法中指出：負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性，且血乳酸、血尿素氮、肝糖原/肌糖元三項(xiàng)生化指標(biāo)中任兩項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，可判定該受試樣品具有緩解體力疲勞功能的作用。 運(yùn)動(dòng)耐力的提高是抗疲勞能力加強(qiáng)的表現(xiàn)，游泳時(shí)間的長(zhǎng)短可以反映動(dòng)物運(yùn)動(dòng)疲勞的程度5。在肌肉劇烈收縮時(shí)，因供氧不足單靠有氧氧化不能滿足能量的要求，必須加速糖酵解的供能過(guò)程。在無(wú)氧情況下，肌肉在通過(guò)糖酵解反應(yīng)得到能量的同時(shí)，也產(chǎn)生了大量的乳酸，乳酸解離生成的氫離子占肌肉中酸性

12、物質(zhì)解離的85%以上。乳酸的增加使肌肉中氫離子濃度上升，pH下降，進(jìn)而引起一系列生化變化，是導(dǎo)致疲勞的重要原因6，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，6 g/（kg·d）高劑量當(dāng)歸水煎液能顯著延長(zhǎng)小鼠游泳時(shí)間和降低運(yùn)動(dòng)后小鼠的乳酸累積。機(jī)體在長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)動(dòng)不能通過(guò)糖、脂肪分解代謝獲得足夠的能量時(shí)，蛋白質(zhì)和氨基酸代謝加強(qiáng)，從而產(chǎn)生血尿素氮（BUN），血清尿素氮的含量與運(yùn)動(dòng)呈直線關(guān)系，其在體內(nèi)的蓄積是引起運(yùn)動(dòng)性疲勞的一個(gè)重要原因。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，6 g/（kg·d）高劑量當(dāng)歸水煎液能顯著降低血清尿素氮含量。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了當(dāng)歸提高血虛小鼠的抗疲勞能力?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1馮海蓮，黃秀梅，王寧萍.

13、考察復(fù)方鎖陽(yáng)膠囊的溫腎助陽(yáng)作用J.中成藥, 2005, 27(1)：103.2談玲華, 徐娟華, 何金春. 女貞子和小蠟果的致適應(yīng)作用J.中藥材, 1999, 22(12)：643.3莊劍青，施建蓉，曾兆麟，等. 紅景天及其復(fù)方對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)能力和能量代謝影響的研究J.中國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志, 1998, 17(2)：124.4龔晨睿，李宇紅，馬良，等. 紅景天復(fù)合制劑對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)代謝指標(biāo)的影響J.湖北預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志, 2002, 13(6)：5.5包文芳，李保樺，楊寶云. 西洋參藥理作用的研究進(jìn)展J.天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，1998, 10(10)：103.6張雪香，張掛英，王寶貴，等. 西洋參人參皂苷抗疲勞

14、作用的實(shí)驗(yàn)研究J.中國(guó)公共衛(wèi)生學(xué)報(bào), 1998, 17(4)：238.上一頁(yè)  1 2         中醫(yī)認(rèn)為，經(jīng)脈失于濡養(yǎng)，心血不足為血虛。當(dāng)歸具有補(bǔ)血活血之功效。本研究證明當(dāng)歸水煎液能明顯改善環(huán)磷酰胺所致血虛小鼠的體征，并使小鼠體重增加，同時(shí)明顯升高血虛小鼠RBC，Hb，WBC水平，即具有補(bǔ)血作用。    血虛是慢性疲勞綜合征的病機(jī)之一。中華人民共和國(guó)保健食品檢驗(yàn)和評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范（試行）2004版中緩解體力疲勞功能檢測(cè)方法中指出：負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)

15、結(jié)果陽(yáng)性，且血乳酸、血尿素氮、肝糖原/肌糖元三項(xiàng)生化指標(biāo)中任兩項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，可判定該受試樣品具有緩解體力疲勞功能的作用。 運(yùn)動(dòng)耐力的提高是抗疲勞能力加強(qiáng)的表現(xiàn)，游泳時(shí)間的長(zhǎng)短可以反映動(dòng)物運(yùn)動(dòng)疲勞的程度5。在肌肉劇烈收縮時(shí)，因供氧不足單靠有氧氧化不能滿足能量的要求，必須加速糖酵解的供能過(guò)程。在無(wú)氧情況下，肌肉在通過(guò)糖酵解反應(yīng)得到能量的同時(shí)，也產(chǎn)生了大量的乳酸，乳酸解離生成的氫離子占肌肉中酸性物質(zhì)解離的85%以上。乳酸的增加使肌肉中氫離子濃度上升，pH下降，進(jìn)而引起一系列生化變化，是導(dǎo)致疲勞的重要原因6，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，6 g/（kg·d）高劑量當(dāng)歸水煎液能顯著延長(zhǎng)小鼠游泳時(shí)間和降低運(yùn)動(dòng)后

16、小鼠的乳酸累積。機(jī)體在長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)動(dòng)不能通過(guò)糖、脂肪分解代謝獲得足夠的能量時(shí)，蛋白質(zhì)和氨基酸代謝加強(qiáng)，從而產(chǎn)生血尿素氮（BUN），血清尿素氮的含量與運(yùn)動(dòng)呈直線關(guān)系，其在體內(nèi)的蓄積是引起運(yùn)動(dòng)性疲勞的一個(gè)重要原因。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，6 g/（kg·d）高劑量當(dāng)歸水煎液能顯著降低血清尿素氮含量。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了當(dāng)歸提高血虛小鼠的抗疲勞能力?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1馮海蓮，黃秀梅，王寧萍. 考察復(fù)方鎖陽(yáng)膠囊的溫腎助陽(yáng)作用J.中成藥, 2005, 27(1)：103.2談玲華, 徐娟華, 何金春. 女貞子和小蠟果的致適應(yīng)作用J.中藥材, 1999, 22(12)：643.3莊劍青，施建蓉，曾兆麟，等. 紅景天及其