女金丸檢驗(yàn)操作規(guī)程

1、太原大寧堂藥業(yè)有限公司GMP管理文件題 目女金丸檢驗(yàn)操作規(guī)程共6頁(yè)第1頁(yè)編 碼JS-CJ-013版 本 號(hào)01制 定 人審 核 人批 準(zhǔn) 人制定日期審核日期批準(zhǔn)日期制定部門質(zhì)量管理部頒發(fā)部門GMP辦實(shí)施日期分發(fā)部門質(zhì)量管理部、質(zhì)量檢驗(yàn)科。變更記錄變更原因及目的：修訂后的藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年版目的：本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了女金丸成品的檢驗(yàn)方法和操作要點(diǎn)，使其檢驗(yàn)規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化。范圍：適用于本公司女金丸成品的質(zhì)量檢驗(yàn)。責(zé)任人：質(zhì)量檢驗(yàn)員、微生物檢測(cè)員、質(zhì)量檢驗(yàn)科科長(zhǎng)。內(nèi)容：1. 引用標(biāo)準(zhǔn)：中華人民共和國(guó)藥典2010年版一部P4742. 試劑：甘油、水合氯醛、甲苯、硅藻土、乙醚、丙酮、硅膠G、環(huán)己烷、

2、醋酸乙酯、鹽酸、三氯化鐵、乙醇、冰醋酸、二硝基苯肼、甲醇、苯、正丁醇、石油醚（6090）、氫氧化鈉、乙酸乙酯、稀碘化鉍鉀、氨、三氯甲烷、三氯化鋁。3. 對(duì)照品：丹皮酚對(duì)照品、黃芩苷對(duì)照品、桂皮醛對(duì)照品、鹽酸水蘇堿對(duì)照品、芍藥苷對(duì)照品、延胡索對(duì)照藥材、黃芩對(duì)照藥材、陳皮對(duì)照藥材、橙皮苷對(duì)照品。4. 儀器與用具：顯微鏡、甲苯水分測(cè)定器、水浴鍋、微量進(jìn)樣器、薄層析、層析缸、超聲波儀、電子天平、架盤天平、恒溫培養(yǎng)箱、高效液相色譜儀、揮發(fā)油測(cè)定器。5. 操作步驟：5.1性狀 通過(guò)目測(cè)、嗅覺(jué)、味覺(jué)等方法直觀檢驗(yàn)，本品為棕褐色至黑棕色的大蜜丸；氣芳香，味甜、微苦。5.2外觀 通過(guò)目測(cè)、手拭等方法直觀檢驗(yàn)，本

3、品應(yīng)圓整均勻，色澤一致，細(xì)膩?zhàn)虧?rùn)，軟硬適中。5.3鑒別： 5.3.1顯微鑒別，照藥材及成方制劑顯微鑒別操作規(guī)程（JS-TJ-001）試驗(yàn)。5.3.1.1糊化淀粉團(tuán)塊淡黃色（延胡索）。太原大寧堂藥業(yè)有限公司 JS-CJ-013 共6頁(yè)第2頁(yè)5.3.1.2不規(guī)則分枝狀團(tuán)塊無(wú)色，遇水合氯醛試液溶化；菌絲無(wú)色或淡棕色，直徑46µm（茯芩）。5.3.1.3非腺毛13細(xì)胞，稍彎曲，壁有疣狀突起（益母草）。5.3.1.4草酸鈣方晶成片存在于薄壁組織中(陳皮)。5.3.1.5纖維單個(gè)散在，長(zhǎng)梭行，直徑2450µm，壁厚，木化（肉桂） 5.3.1.6內(nèi)種皮厚壁細(xì)胞黃棕色或棕紅色，表面觀類多角

4、形，壁厚，胞腔含硅質(zhì)塊（砂仁）。5.3.1.7纖維束周圍薄壁細(xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維（甘草）。5.3.1.8韌皮纖維淡黃色，梭形，壁厚，孔溝細(xì)（黃芩）。5.3.1.9纖維成束，紅棕色或黃棕色，壁甚厚（香附）。5.3.1.10薄壁組織灰棕色至黑棕色，細(xì)胞多皺縮，內(nèi)含棕色核狀物（熟地黃）。5.3.1.11薄壁細(xì)胞紡錘形，壁略厚，有極微細(xì)的斜向交錯(cuò)紋理（當(dāng)歸）。5.3.1.12不規(guī)則塊片半透明，邊緣折光較強(qiáng)，表面有纖細(xì)短紋理和小孔及細(xì)裂隙（鹿角霜）。5.3.2丹皮酚對(duì)照鑒別，照薄層色譜操作規(guī)程（JS-TJ-005）試驗(yàn)。5.3.2.1取大蜜丸18g，研碎，置500ml圓底燒瓶中，加水200ml，

5、連接揮發(fā)油測(cè)定器，自測(cè)定器上端加水至刻度并溢流入燒瓶時(shí)為止，再加石油醚（6090）1ml,連接回流冷凝管，加熱并保持微沸1小時(shí)，放冷，取食油醚液作為供試品溶液。5.3.2.2另取丹皮酚對(duì)照品，加石油醚（6090）制成每lml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。5.3.2.3照薄層色譜（附錄VI B）試驗(yàn)，吸取上述量種溶液各2µl，分別點(diǎn)于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(3:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇-鹽酸（50：1）的混合溶液,5.3.2.4供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。5.3.3桂皮醛對(duì)照鑒別，照薄

6、層色譜操作規(guī)程（JS-TJ-005）試驗(yàn)。5.3.3.1取桂皮醛對(duì)照品，加石油醚（6090）制成每lml含0.5µl的溶液，作為對(duì)照品溶液。5.3.3.2照薄層色譜（附錄VI B）試驗(yàn)，吸取5.3.2.1項(xiàng)下的供試品溶液5µl及上述對(duì)照品溶液2µl，分別點(diǎn)于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以石油醚（6090）-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液。太原大寧堂藥業(yè)有限公司 JS-CJ-013 共6頁(yè)第3頁(yè)5.3.3.3供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。5.3.4照薄層色譜操作規(guī)程（JS-TJ-005）試驗(yàn)。

7、5.3.4.1取大蜜丸9g,剪碎，加水60ml，攪拌使溶解，加熱回流30分鐘，放冷，離心，取上清液，用稀鹽酸調(diào)pH值至12，離心，取上清液，濾過(guò)，濾液通過(guò)732清型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱（內(nèi)徑為10mm,柱高為15cm），流速為每分鐘1.01.5ml以水洗至洗脫液近無(wú)色，棄去洗脫液，再以氨溶液（15-100）30ml洗脫，收集洗脫液，水浴蒸干，殘?jiān)?0%乙醇10ml分次溶解，加再2活性炭-中性氧化鋁柱（活性炭100目以上，0.3g；中性氧化鋁100200目，2g;混勻，裝柱，內(nèi)徑為15mm,）上，用80%乙醇 20ml洗脫，收集流出液與洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml,使溶解，作為供試品溶液。5

8、.3.4.2另取鹽酸水水蘇堿對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。5.3.4.3照薄層色譜法（附錄VI B）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各25µl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-乙酸乙酯-鹽酸（8：1：3）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干12小時(shí)以上，噴以稀碘化鉍鉀試液，放置2.5小時(shí)，在次噴稀碘化鉍鉀試液。5.3.4.4供試品色譜中，在于對(duì)照色譜相應(yīng)的位置上，相同顏色的斑點(diǎn)。5.3.5照薄層色譜操作規(guī)程（JS-TJ-005）試驗(yàn)。5.3.5.1取大蜜丸18g,剪碎，加硅藻土10g，研勻，加濃氨試液10ml，密塞，振搖，放置10分鐘，加三氯甲烷60ml，加熱回流30分

9、鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至約10ml,用0.5mol/L鹽酸溶液振搖提取2次，每次10ml，合并提取液，加濃氨試液5ml，（使pH值至11以上），用三氯甲烷振搖提取2次，每次10ml,合并三氯甲烷液，水浴蒸干，殘?jiān)萌燃淄槿芙馐钩?.5ml，作為供試品溶液。5.3.5.2另取延胡索對(duì)照藥材0.5g，加濃氨試液0.5ml，振搖，放置10分鐘，加三氯甲烷20ml，同法制成對(duì)照藥材溶液。5.3.5.3照薄層色譜法（附錄VI B）試驗(yàn)，吸取供試品溶液1020µl ，對(duì)照藥材溶液10µl，分別點(diǎn)于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮（9：2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干

10、，噴以稀碘化鉍鉀試液，太原大寧堂藥業(yè)有限公司 JS-CJ-013 共6頁(yè)第4頁(yè)5.3.5.4供試品色譜中，再與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)。5.3.6照薄層色譜操作規(guī)程（JS-TJ-005）試驗(yàn)。5.3.6.1取大蜜丸9g,剪碎，加硅藻土5g,研勻，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，用脫脂棉濾過(guò)，濾液通過(guò)D101型打孔吸附樹(shù)脂柱（1660目，內(nèi)就能夠?yàn)?.5cm，柱高為15cm）,流速為每分鐘1.01.5cm，一次以水，30%乙醇各50ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)?0%乙醇5ml溶解，通過(guò)聚酰胺

11、柱（100200目，1g，內(nèi)徑為1cm，濕法裝柱），用50%乙醇10ml洗脫，收集流出液及洗脫液，備用；繼用乙醇10ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。5.3.6.2另取黃芩對(duì)照藥材，0.1g,加甲醇5ml，超聲處理10分鐘，搖勻，靜置，取上清液作為對(duì)照藥材溶液。5.3.6.3照薄層色譜法（附錄VI B）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4µl ，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液。5.3.6.4供試品色譜中，在于對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。5.3.7照薄層色譜操作規(guī)程（JS-TJ-0

12、05）試驗(yàn)。5.3.7.1取5.3.6.1項(xiàng)下的備用溶液，水浴蒸去乙醇，加水至約5ml，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次5ml，水溶液備用；合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。5.3.7.2另取陳皮對(duì)照藥材0.1g，加甲醇5ml，超聲處理10分鐘，靜置，取上清液作為對(duì)照藥材溶液。5.3.7.3照薄層色譜法（附錄VI B）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各2µl ，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（28：10：1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，再105加熱約5分鐘，置紫外光燈（365nm）下檢視。5.3.7.4供試品色譜中，在于對(duì)照藥材色譜相

13、應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。5.3.8照薄層色譜操作規(guī)程（JS-TJ-005）試驗(yàn)。5.3.8.1取5.3.7.1項(xiàng)下的備用水溶液，用水飽和的正丁醇真要提取2次，每次8ml，合并正丁醇提取液，蒸干，殘?jiān)眉状?ml分次溶解，加在中性氧化鋁柱（100200目，2g，內(nèi)徑為1cm，）上，用80%甲醇20ml洗脫，收集流出液及洗脫液，蒸太原大寧堂藥業(yè)有限公司 JS-CJ-013 共6頁(yè)第5頁(yè)干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。5.3.8.2另取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液 ，作為對(duì)照品溶液。5.3.8.3照薄層色譜法（附錄VI B）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各2µ

14、;l ，分別點(diǎn)于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15：40：18：10）10以下放置分層的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%香草醛硫酸溶液，在105加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。5.3.8.4供試品色譜中，在對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。5.4檢查：5.4.1重量差異：見(jiàn)重量、裝量差異檢查操作規(guī)程（JS-TJ-037）。5.4.2水分：見(jiàn)水分測(cè)定操作規(guī)程（JS-TJ-025）第2法。5.4.3微生物限度檢查：5.4.3.1細(xì)菌、霉菌檢查：見(jiàn)細(xì)菌、霉菌（酵母菌）計(jì)數(shù)檢查操作規(guī)程（JS-TJ-041）。5.4.3.2大腸埃希菌檢查：見(jiàn)大腸埃希

15、菌檢查操作規(guī)程（JS-TJ-043）。5.4.3.3大腸菌群檢查：見(jiàn)大腸菌群檢查操作規(guī)程（JS-TJ-053）。5.4.3.3活螨檢查：見(jiàn)活螨檢查操作規(guī)程（JS-TJ-046）。5.5含量測(cè)定：照高效液相色譜法操作規(guī)程（JS-TJ-008）測(cè)定。5.5.1色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵和硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液（12：13：75）為流動(dòng)相（必要時(shí)，每次進(jìn)樣測(cè)定后增加乙腈的比例，盡快沖出雜質(zhì)成分）；檢測(cè)波長(zhǎng)為284nm。理論板數(shù)按橙皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于7000。5.5.2對(duì)照品溶液的制備 取橙皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含30µl 的溶液，即得。5.5.3供試品溶液的制備 取重量差異項(xiàng)下的大蜜丸，剪碎，混勻，取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇補(bǔ)足檢視的重量，稱定重量，超聲處理（功率400W，頻率40kHz）15分鐘使溶散，加熱回流