口腔頜面部惡性腫瘤化療藥物敏感性臨床分析

1、    口腔頜面部惡性腫瘤化療藥物敏感性臨床分析        摘要：目的惡性腫瘤化療的一個(gè)最大問題是腫瘤對(duì)化療藥物的耐藥性。MTT腫瘤藥敏檢測(cè)是一種定量比色體外藥敏測(cè)定方法。本研究的目的是初步評(píng)價(jià)MTT藥敏檢測(cè)結(jié)果對(duì)指導(dǎo)口腔腫瘤個(gè)體化化療的臨床意義。方法應(yīng)用30例口腔頜面外科手術(shù)或活檢的惡性腫瘤標(biāo)本，進(jìn)行常規(guī)MTT藥敏檢測(cè)，同時(shí)將檢測(cè)結(jié)果與臨床資料進(jìn)行對(duì)比性分析。檢測(cè)藥物共有6種：DDP、5-Fu、VDS、MTX、E-ADM、PYM。結(jié)果(1) 病變部位以舌部為主，占30%

2、，藥物敏感性與腫瘤部位有關(guān)；(2) 檢測(cè)30例口腔頜面部惡性腫瘤組織的藥敏性，所得結(jié)果與臨床資料進(jìn)行分析。8例采用傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)用藥方案進(jìn)行化，其療效與MTT法檢測(cè)的藥敏結(jié)果一致；(3) 大部分腫瘤對(duì)DDP、5-Fu有中度以上敏感性，但也有少部分存著抗DDP、5-Fu現(xiàn)象，這也是臨床上采用傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)用藥方案，有些腫瘤化療效果不理想的原因之一。結(jié)論通過腫瘤藥敏檢測(cè)，找出對(duì)惡性腫瘤有效的化療藥物組成聯(lián)合用藥方案，可以做到化療方案的個(gè)體化，進(jìn)而提高療效。關(guān)鍵詞：口腔癌；藥物敏感性；化學(xué)治療中分類號(hào)：739.8文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1005-4979(2000)02-0134-04 CLINICAL ANA

3、LYSIS OF CHEMOSENSITIVITIESOF ORAL AND MAXILLOFACIAL CANCERSZHOU Xiao-jing, CHEN Wang-tao, LIN Li-song, et alDept. of Oral & Maxillofacial Surgery, School of Stomatology, Shanghai Second Medical UniversityAbstract： ObjectiveA major problem associated with chemotherapy for cancers is drug-resista

4、nce. The MTT assay is a quantitative colorimetric system for the determination of the chemosensitivity of tumor cells in vitro. The aim of the present study is to evaluated the clinical significance of chemosensitivity testing on cells culture from fresh specimens for individual chemotherapy. Method

5、sThirty patients with oral and maxillofacial cancers were entered in this study. The samples which obtained from surgical and biopsical specimens were examined using MTT method, and climical data and chemosensitivity were analyzed and compared. The antitumor drugs tested were cisplation (DDP), 5-Flu

6、orouracial (5-Fu), Vindesine (VDS), Methortrexatum (MTX), Pyromycin (PYM), Epi-adriamycinum (E-ADM).Results(1) The most common lesion was tongue, accouting for 30%, (2) 8 patients were treated with conventional chemotherapy, and the clinic outcomes were similar to results of chemosensitivity tesing

7、using MTT assay; (3) Most of cancers showed the chemosensitivity to DDP、5-Fu, but some cancers still were resistanted to DDP、5-Fu. this was the one of causes of poor chemotherapeutic effect to some cancers.ConclusionChemosensitivity testing using MTT assay appeared to be useful in selecting chemothe

8、rapeutic agents for patients with oral and maixllofacial cancers. This assay might be useful on an individual basis to optimize chemotherapy.Key words： oral cancer; chemosensitivity; chemotherapy口腔頜面部中、晚期惡性腫瘤必須采用綜合性治療，才能取得較好的治療效果。化療是綜合治療主要手段之一，治療方案的選擇是化療成敗的關(guān)鍵1；而有效的化療方案確定取決于對(duì)腫瘤敏感性藥物的選擇和應(yīng)用。應(yīng)用MTT方法對(duì)腫瘤藥

9、物敏感性檢測(cè)，為敏感藥物選擇提供了條件。本文對(duì)30例口腔頜面部惡性腫瘤組織標(biāo)本的藥物敏感性測(cè)試結(jié)果與其臨床資料進(jìn)行分析，希望對(duì)口腔頜面部惡性腫瘤化療方案制定提供有效參考。1材料與方法1.1材料1.1.1組織標(biāo)本30例口腔頜面部惡性腫瘤組織新鮮標(biāo)本來自我院1999年6月1999年11月手術(shù)和活檢組織標(biāo)本，所有病例均有明確的病理診斷。1.1.2藥敏檢測(cè)選用藥物順鉑(DDP)齊魯制藥廠，氨甲喋呤(MTX)上海華聯(lián)制藥廠，氟脲嘧啶(5-Fu)旭東海普藥業(yè)，長(zhǎng)春地辛(VDS)杭州民生藥廠，平陽霉素(BYM)天津太河制藥廠，表阿霉素(E-ADM)深圳萬樂藥廠。1.1.3試劑MTT四甲基偶氮唑藍(lán)，3-(4,

10、5-dimthy-2-2 thiazoly)2,5-dipheny-2H-tetrazoliun bromide；DNA酶、膠原酶、透明質(zhì)酸酶、RPHI-1640培養(yǎng)劑均購(gòu)自GIBCO試劑公司。1.1.4設(shè)備材料PG3022酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)國(guó)營(yíng)華東電子管廠聯(lián)合研制，波長(zhǎng)570nm,參數(shù)波長(zhǎng)450nm)；96孔培養(yǎng)板(Corning公司)。1.2MTT藥物檢測(cè)方法采用MTT assay2并作以下修改：(1) 將組織標(biāo)本用PBS(含丁胺卡那霉素200u/ml、青霉素500u/ml)浸泡20min后，膠原酶2mg/ml、DNA酶0.4mg/ml、透明質(zhì)酸酶0.017mg/m

11、l消化40min，200目濾網(wǎng)收集細(xì)胞，PBS洗一次。(2) 取96孔板每孔加200l細(xì)胞懸液每四孔為一組，設(shè)對(duì)照組及各藥物組。(3) 培養(yǎng)板置37°C含5%CO2濕度培養(yǎng)24h后，加入實(shí)驗(yàn)藥物(10倍的血漿濃度)于培養(yǎng)孔中，繼續(xù)培養(yǎng)48h。(4) 每孔加MTT試劑(5mg/ml)20l，再于37°C CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h以上。(5) 離心(2000r/min)5min，吸除上清液，加200l DMSO以終止反應(yīng)及溶解甲?FDA3?結(jié)晶。(6) PG3022酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀波長(zhǎng)450nm測(cè)OD值。(7) 腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率計(jì)算公式：腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率=(1-A/B)

12、5;100%A=試驗(yàn)孔平均OD值B=對(duì)照孔平均OD值(8) 藥物敏感性判斷標(biāo)準(zhǔn)敏感：細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率>70%，中度敏感：細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率>50%，低度敏感：細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率30%，不敏感：細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率<30%。2結(jié)果2.1標(biāo)本來源30例病人選自1999年6月1999年11月我科收治的口腔頜面部惡性腫瘤住院患者。年齡范圍1380歲，平均52歲，男女之比1.21。腫瘤原發(fā)部位以舌部最多見，占30%；牙齦占23%、頰部占20%；上頜竇、腭部、顴部、顳下凹等部位共占27%；發(fā)病部位與化療藥物敏感性關(guān)系見表1。2.2術(shù)前化療患者的術(shù)后標(biāo)本對(duì)的化療藥物敏感的檢測(cè)施行術(shù)前化療病人8例，采用VM

13、化療方案治療6例，其中5例病理診斷為鱗狀細(xì)胞癌，1例惡性多形性腺癌。1例用5-Fu單藥化療；另外1例用MTX+DDP聯(lián)合化療，治療結(jié)果，自覺疼痛緩解，但臨床療效不明顯。術(shù)前化療6例病人的術(shù)后標(biāo)本的化療藥物敏感檢測(cè)結(jié)果見表2。表1鱗癌3種發(fā)病部位對(duì)6種抗腫瘤藥物敏感性化療藥物敏感性舌部(%)頰部(%)牙齦(%)DDP敏感02040中度敏感04040低度敏感22.200不敏感77.840205-Fu敏感02020中度敏感04020低度敏感000不敏感1004060PYM敏感0020中度敏感0400低度敏感02040不敏感1004040VDS敏感000中度敏感11.100低度敏感0200不敏感88.

14、980100MTX敏感0020中度敏感04020低度敏感11.100不敏感88.96060E-ADM敏感000中度敏感11.100低度敏感000不敏感88.8100100表2化療后病例藥物敏感檢測(cè)結(jié)果(例)敏感性藥物DDPMTX5FuPYMVDSE-ADM敏感1中度敏感32低度敏感112不敏感378668表3原發(fā)性與復(fù)發(fā)性腫瘤對(duì)6種抗癌藥物敏感性化療藥物敏感性原發(fā)腫瘤(%)復(fù)發(fā)腫瘤(%)DDP敏感833.3中度敏感5016低度敏感833.3不敏感3417.45-Fu敏感816中度敏感1616低度敏感80不敏感6868PYM敏感016中度敏感160低度敏感1616不敏感6868VDS敏感00中度

15、敏感1616低度敏感80不敏感7684MTX敏感00中度敏感160低度敏感1616不敏感6884E-ADM敏感00中度敏感816低度敏感00不敏感91842.3原發(fā)性與復(fù)發(fā)性腫瘤對(duì)抗腫瘤藥物的敏感性本組病例病程自發(fā)病至確診時(shí)間最短3月余，最長(zhǎng)2年余，絕大多數(shù)的36個(gè)月；腫瘤大小1cm×16cm×4cm大小不等；30例病人中，21例為原發(fā)性腫瘤，復(fù)發(fā)腫瘤9例，原發(fā)性與復(fù)發(fā)性腫瘤對(duì)6種抗腫瘤藥物的敏感性關(guān)系見表3，其TNM分類與化療藥物敏感性關(guān)系見表4。2.4腫瘤病理類型與藥物敏感性關(guān)系本組病例鱗狀細(xì)胞癌級(jí)20例，級(jí)1例。腺樣囊性癌5例，粘液表皮樣癌2例，肉瘤2例。3討論口腔頜

16、面部惡性腫瘤的化學(xué)治療是綜合治療手段之一，對(duì)化療藥物的選擇直接影響療效，我們對(duì)30例口腔頜面部惡性腫瘤組織標(biāo)本采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法進(jìn)行了藥物敏感性檢測(cè)，進(jìn)一步將其藥物敏感性與臨床資料間關(guān)系進(jìn)行了分析研究。表4臨床分期與化療敏感性關(guān)系(例)化療藥物敏感性T1T2期腫瘤(例)T3T4期腫瘤(例)DDP敏感02中度敏感23低度敏感10不敏感545-Fu敏感02中度敏感01低度敏感10不敏感76PYM敏感01中度敏感03低度敏感01不敏感84VDS敏感01中度敏感13低度敏感21不敏感54MTX敏感00中度敏感03低度敏感12不敏感74E-ADM敏感00中度敏感02低度敏感11不敏感77

17、本組資料中病變以舌部為多，占30%。22%對(duì)DDP低度敏感，11%對(duì)MTX低度敏感，11%對(duì)VDS、E-ADM中度敏感，5-Fu、PYM無1例敏感。頰部腫瘤對(duì)DDP、5-Fu敏感者各占20%，PYM、MTX、5-Fu中度敏感各占40%，牙齦部DDP敏感占40%，其次5-Fu占20%，MTX占20%，中度敏感DDP占40%，5-Fu占20%，MTX占20%，表明惡性腫瘤病理類型相同，部位相同，不同個(gè)體的藥物敏感性不盡相同3。所以單憑臨床經(jīng)驗(yàn)和腫瘤組織類型等來確定化療方案有不足之處，未體現(xiàn)腫瘤的“個(gè)體化”原則，有必要做藥敏檢測(cè)，為臨床選擇有效治療方案提供依據(jù)。術(shù)前化療8例，6例應(yīng)用VM方案，1例用

18、5-Fu，1例MTX+DDP，臨床治療效果不令人滿意。術(shù)后標(biāo)本MTT檢測(cè)結(jié)果顯示：3例對(duì)所測(cè)6種化療藥物均不敏感，5例對(duì)DDP不同程度敏感，2例對(duì)VDS中度敏感，而對(duì)MTX僅有1例低度敏感。表明MTT法檢測(cè)體外藥敏結(jié)果與臨床化療效果基本相符合。所以有必要對(duì)化療前腫瘤病人做MTT藥敏檢測(cè)，篩選敏感性藥。據(jù)UICC4制定的惡性腫瘤TNM分類標(biāo)準(zhǔn)對(duì)惡性實(shí)體腫瘤的治療方案制定和預(yù)后判斷有重要價(jià)值。本組病例T1-T2N0M0期對(duì)DDP無1例敏感，中度敏感2例，而T3-T4N1M0期卻有2例對(duì)DDP敏感，中度敏感有3例，5-Fu同樣有類似情況。我們認(rèn)為TNM分類能客觀反映腫瘤療效，并幫助評(píng)價(jià)預(yù)后，對(duì)選擇綜

19、合治療方案具有重要的價(jià)值。本組復(fù)發(fā)病例為30%，藥敏檢測(cè)結(jié)果示：3例對(duì)所測(cè)化療藥物均無效，其他6例中腺源性腫瘤2例，纖維肉瘤1例，這3例均有肺部轉(zhuǎn)移。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移主要與腫瘤的病理類型有關(guān)，與個(gè)體轉(zhuǎn)移基因易感性有關(guān)。其他3例中有1例3年前患牙齦癌術(shù)后用PYM，3年后復(fù)發(fā)做MTT藥敏檢測(cè)結(jié)果，仍對(duì)PYM有效，對(duì)其它化療藥卻無效，說明以前有效藥3年后仍有效。但也有作者報(bào)道，一些經(jīng)過首次化療后復(fù)發(fā)的病例對(duì)初次所用化療藥物產(chǎn)生耐藥性。故只有對(duì)化療前病人進(jìn)行MTT藥敏檢測(cè)，才有可能選擇針對(duì)該腫瘤的敏感性藥物5。本組資料中，口腔頜面部鱗狀上皮來源的惡性腫瘤21例，占總數(shù)2/3，其中19%對(duì)任何藥物不敏感。從表1

20、、表3可以看出，腫物的藥物敏感順序?yàn)镈DP、5-Fu、MTX、PYM、VDS。腺上皮5例，2例對(duì)所測(cè)試藥物不敏感，占40%；DDP 1例敏感，1例低度敏感，1例不敏感；5-Fu、VDS各1例中度敏感，其敏感順序?yàn)镈DP、5-Fu、VDS。顯示，DDP、5-Fu是傳統(tǒng)化療的主要藥物，其殺傷鱗狀細(xì)胞癌的效果優(yōu)于腺上皮腫瘤，與臨床化療結(jié)果相吻合。但也有一部分腫瘤對(duì)DDP、5-Fu、MTX是不敏感的，故在腫瘤化療前進(jìn)行藥物敏感性檢測(cè)是十分必要的。本文校對(duì)：史宏男作者簡(jiǎn)介：周曉鍵(1950-)，女，上海人，主管技師周曉健（上海第二醫(yī)科大學(xué)附屬第九人民醫(yī)院口腔頜面外科 200011）陳萬濤（上海第二醫(yī)科大學(xué)附屬第九人民醫(yī)院口腔頜面外科 200011）林李嵩（上海第二