強肌健力飲對腎陽虛大鼠下丘腦—垂體—性腺軸作用的實驗研究

1、強肌健力飲對腎陽虛大鼠下丘腦垂體性腺軸作用的實驗研究        核心提示：作者：趙慧榮向路陳芝喜陳津巖李志強何贊厚【摘要】【目的】觀察強肌健力飲對腎陽虛大鼠下丘腦垂體性腺                             

2、0;  作者：趙慧 榮向路 陳芝喜 陳津巖 李志強 何贊厚 【摘要】  【目的】觀察強肌健力飲對腎陽虛大鼠下丘腦垂體性腺軸作用的影響?！痉椒ā繉D大鼠隨機分為正常對照組，腎陽虛模型組，強肌健力飲低、中、高劑量組(劑量分別為7.8、15.6、23.4g·kg-1·d-1)、右歸丸組（劑量為5.8g·kg-1·d-1），除正常對照組外，均采用氫化可的松（劑量為25mg·kg-1·d-1）肌肉注射復(fù)制腎陽虛大鼠模型。觀察動物的一般狀態(tài)，計算下丘腦、睪丸指數(shù)并對睪丸做組織形態(tài)觀察，采用放射免疫分析法檢測血清睪酮（T）和雌

3、二醇（E2）含量。【結(jié)果】強肌健力飲能顯著降低下丘腦指數(shù)，升高腎陽虛模型大鼠血清T含量及降低E2/T比值（均P0.01），而E2含量無明顯變化（P0.05）；組織形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，強肌健力飲各劑量組睪丸曲精小管內(nèi)精細(xì)胞體積明顯大于腎陽虛模型組，精原細(xì)胞核染色質(zhì)和初級精母細(xì)胞核染色體比較顯著?！窘Y(jié)論】強肌健力飲防治中醫(yī)腎陽虛證的作用機制可能與其能調(diào)控性腺軸的水平有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  強肌健力飲/治療作用； 重癥肌無力/中藥療法； 腎陽虛證； 睪酮/血液； 雌二醇/血液； 疾病模型，動物； 大鼠 強肌健力飲是著名中醫(yī)藥專家鄧鐵濤教授治療重癥肌無力的經(jīng)驗方。鄧?yán)险J(rèn)為重癥肌無力多屬脾胃虧虛，筋

4、脈失養(yǎng)之本虛證，至中后期，往往脾虛損及腎，而表現(xiàn)為脾腎陽虛，故脾虛、腎虛是致病之本，因而固護、調(diào)節(jié)先后天之本是治療本病的關(guān)鍵。根據(jù)該方的臨床主治特點，我們分別從脾虛證、腎陽虛證著手，對該方進行了一系列的實驗研究1-4，初步證明強肌健力飲可促進脾虛小鼠核酸和蛋白質(zhì)合成，改善腎陽虛證大鼠腎上腺軸的水平，但針對該方對腎陽虛證性腺軸的影響結(jié)果尚未報道。本實驗觀察了該方對腎陽虛大鼠下丘腦垂體性腺軸作用的影響，現(xiàn)報道如下。     1  材料與方法     1.1  動物與分組  清潔級SD大鼠，雄性，4月齡，體質(zhì)量

5、（200±20）g,由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供，許可證號為粵監(jiān)證字2006A015。大鼠在適應(yīng)性喂養(yǎng)2d后，采用隨機法將71只動物分為正常對照組10只，腎陽虛模型組13只，強肌健力飲低、中、高劑量組各12只，右歸丸組12只。     1.2  藥物及試劑  強肌健力飲由黃芪、黨參、白術(shù)、當(dāng)歸、升麻、柴胡、陳皮、甘草等組成（均購自廣州致信藥業(yè)，經(jīng)中藥學(xué)院張丹雁老師鑒定），采用回流提取法，經(jīng)過2次提取并收集揮發(fā)油，藥液濃縮至3g/mL，4保存?zhèn)溆?；右歸丸購于北京同仁堂廣州藥業(yè)有限公司，批號6013022；氫化可的松注射液由揚州制藥有限公

6、司生產(chǎn)（批號：20060302）；睪酮（T）、雌二醇（E2）放免試劑盒由北京科美東雅生物技術(shù)有限公司提供。 1.3  造模5-6與給藥  腎陽虛模型組動物肌肉注射氫化可的松25mg·kg-1·d-1，同時灌服蒸溜水2mL/d；正常對照組動物肌肉注射生理鹽水1mL/d，同時灌服蒸餾水2mL/d；強肌健力飲低、中、高劑量組（即中藥低、中、高劑量組，劑量分別為7.8、15.6、23.4g·kg-1·d-1）動物肌肉注射氫化可的松25mg·kg-1·d-1，同時灌服相應(yīng)劑量的強肌健力飲2mL/d；右歸丸組動物肌肉注射氫化可

7、的松25mg·kg-1·d-1，同時灌服右歸丸（劑量為5.8g·kg-1·d-1） 2mL/d，均連續(xù)14d。     1.4  主要觀察指標(biāo)  造模灌藥期間，每日觀察動物的一般狀態(tài)（包括飲食、毛發(fā)、精神、活動等）。于實驗第15天（即最后1次給藥16h后）眼球取血，離心，取上清液，-4保存待測；采用放射免疫分析法檢測各組大鼠血清T、E2含量。然后處死大鼠，立即摘取下丘腦、睪丸稱質(zhì)量，計算各組臟器指數(shù)（w）:w=m臟器/mbody。睪丸放入體積分?jǐn)?shù)10%福爾馬林液內(nèi)固定過夜，然后包埋、切片、蘇木素伊紅（HE

8、）染色處理，做組織形態(tài)學(xué)觀察。     1.5  統(tǒng)計學(xué)方法  采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理。     2  結(jié)果     2.1  動物死亡原因  實驗過程中因灌胃操作失誤及造模所用藥物損傷等原因引起腎陽虛模型組大鼠死亡1只，中藥高劑量組死亡3只，右歸丸組死亡1只，最終進入結(jié)果分析為66只。     2.2  各組臟器指數(shù)比較  表1結(jié)果顯示，腎陽虛模型組大鼠下丘腦及睪丸指數(shù)與正常對照組比較

9、均升高（P0.05或P0.01）；而中藥低、中、高劑量組和右歸丸組的下丘腦指數(shù)顯著降低，與腎陽虛模型組比較差異有顯著性意義（P0.01），睪丸指數(shù)無明顯變化（P0.05）。     2.3  各組大鼠血清T、E2水平的比較  表2結(jié)果顯示，與正常對照組比較，腎陽虛模型組大鼠血清T含量顯著下降，E2含量及E2/T比值顯著升高（均P0.01）；而中藥低、中、高劑量組T含量較腎陽虛模型組顯著升高，E2/T比值顯著降低（均P0.01），但E2含量無明顯變化（P0.05）。而且強肌健力飲的作用與右歸丸相仿。 表1  各組大鼠臟器指數(shù)比較統(tǒng)計方法

10、：t檢驗；P0.05，P0.01，與正常對照組比較；P0.01，與腎陽虛模型組比較表2  各組大鼠血清性激素水平的比較統(tǒng)計方法：t檢驗；P0.01，與正常對照組比較；P0.01，與腎陽虛模型組比較     2.4  各組大鼠睪丸的組織形態(tài)學(xué)觀察  腎陽虛模型組大鼠睪丸曲精小管內(nèi)精細(xì)胞體積小于正常對照組，精原細(xì)胞核染色質(zhì)和初級精母細(xì)胞核染色體不明顯。中藥低、中、高劑量組睪丸曲精小管內(nèi)精細(xì)胞體積明顯大于腎陽虛模型組，精原細(xì)胞核染色質(zhì)和初級精母細(xì)胞核染色體比較顯著。右歸丸組睪丸組織未見明顯變化。結(jié)果見圖1。a.正常對照組b.腎陽虛模型組c.

11、中藥低劑量組     3  討論     本實驗選用國內(nèi)目前較為經(jīng)典的氫化可的松法復(fù)制“腎陽虛”證動物模型。模型組大鼠于實驗第5天開始出現(xiàn)豎毛、身體蜷縮、扎堆，眼睛半瞇、小便次數(shù)多等現(xiàn)象，第1114天腎陽虛癥狀更加明顯：體質(zhì)量減輕，毛發(fā)枯燥松弛、肢冷，身體瘦削、喜蜷縮扎堆、目光無神，反應(yīng)遲鈍，少動、瞇眼或閉眼，行動遲緩，叫聲低而無力，飲食和飲水量減少，小便次數(shù)及小便量均增多，與中醫(yī)腎陽虛證的癥狀特點相似。而應(yīng)用右歸丸灌服的動物,其腎陽虛癥狀較腎陽虛模型組有所改善,表明右歸丸對腎陽虛證大鼠有一定的保護作用,這與腎陽虛證的理法方

12、藥相吻合。     重癥肌無力是一種難治性疾病，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)多采用抗膽堿酯酶、免疫抑制等治療，然而副作用大，停藥后易復(fù)發(fā)。鄧鐵濤教授認(rèn)為本病多屬脾胃虧虛，筋脈失養(yǎng)之本虛證。脾為后天之本，主四肢肌肉、主運化；胃主受納，脾胃虛弱，氣血生化不足，無以生肌，四肢不得稟水谷之氣，故出現(xiàn)四肢肌肉萎縮，肌肉無力。腎為作強之官，主骨生髓。脾虛及腎，又可出現(xiàn)四肢肌肉萎縮、肢體無力，骨枯髓虛，形削肉萎，腰脊四肢痿軟無力。本方通過補脾而滋腎，先后天相互資生和促進，脾陽賴腎陽溫煦而生化精微，腎陽賴脾之滋養(yǎng)而充盛，調(diào)整機體陰陽平衡，增強機體免疫力和抗病能力。臨床應(yīng)用強肌健力飲治療脾胃虛弱型萎證

13、療效確切7。     中醫(yī)認(rèn)為腎藏精，主生殖，是生長、發(fā)育功能的樞紐，而腎中陽氣是生殖機能的主要動力來源，因而性激素的水平反映了腎氣的盛衰，性激素內(nèi)環(huán)境的改變是腎虛發(fā)生和發(fā)展的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。臨床腎虛患者多伴隨性激素水平的變化，研究發(fā)現(xiàn)8：腎陽虛證中老年人存在嚴(yán)重的性激素紊亂，表現(xiàn)形式是男性T值顯著降低，E2/T比值、E2值顯著升高，顯示了腎陽虛證存在下丘腦垂體性腺軸的功能減退。從臨床角度提示調(diào)整E2/T比值，保持E2與T之間的平衡是治療腎陽虛證的關(guān)鍵及藥物療效的判定標(biāo)準(zhǔn)之一。本實驗結(jié)果顯示：腎陽虛模型組大鼠血清T含量下降，E2含量與E2/T比值升高（均P0.01）

14、，這與臨床的結(jié)論一致。服用強肌健力飲低、中、高劑量中藥復(fù)方后，能使T含量顯著升高，E2/T比值降低（均P0.01），但E2含量無明顯變化（P0.05）。而強肌健力飲療效與右歸丸相仿9，提示該方能使腎陽虛證性腺軸上紊亂的激素水平得到調(diào)節(jié)。     睪酮是人體最重要的雄激素，由睪丸間質(zhì)細(xì)胞分泌。生理狀態(tài)下，下丘腦接受神經(jīng)系統(tǒng)其他部分傳來的信息，引起促性腺激素釋放激素（GnRH）的釋放，GnRH被運送至腺垂體，促使促卵泡刺激素（FSH）和黃體生成素（LH）的釋放，LH能刺激睪丸間質(zhì)細(xì)胞的發(fā)育并分泌睪酮。本研究結(jié)果顯示，腎陽虛模型組T水平下降的同時，下丘腦、睪丸指數(shù)反而升

15、高，可能是由于機體在激素刺激下的代償性反應(yīng)，同時中藥復(fù)方組能使下丘腦指數(shù)下降，說明強肌健力飲通過調(diào)整下丘腦中樞神經(jīng)的變化，進一步影響睪丸性激素的分泌。形態(tài)與功能變化相關(guān)而同步，灌服低、中、高劑量強肌健力飲后，大鼠睪丸曲精小管內(nèi)精細(xì)胞體積明顯大于腎陽虛模型組，精原細(xì)胞核染色質(zhì)和初級精母細(xì)胞核染色體比較顯著。     綜上分析，強肌健力飲通過改善下丘腦質(zhì)量，影響中樞神經(jīng)功能，進一步調(diào)節(jié)睪丸分泌性激素水平，同時使睪丸病理損傷得以修復(fù)，從而調(diào)節(jié)下丘腦垂體性腺軸的變化，這可能是該方防治氫化可的松所致腎陽虛大鼠的作用機制之一。 【參考文獻(xiàn)】  1陳芝喜，徐志偉，劉小斌，等. 強肌健力口服液對脾虛小鼠DNA 合成的影響J.中國臨床康復(fù)，2006，10（15）：141. 2陳芝喜，徐志偉，劉小斌，等. 強肌健力口服液對脾虛小鼠蛋白質(zhì)合成的影響J.中國臨床康復(fù)，2006，10（35）：97. 3陳芝喜，徐志偉，劉小斌，等. 強肌健力口服液對脾虛小鼠RNA 合成的影響J.中國臨床康復(fù)，2006，10（43）：129. 4趙慧，陳芝喜，陳津巖，等. 強肌健力飲對腎陽虛大鼠CRH、ACTH、Cor水平的影響J.放射免疫學(xué)雜志，2007，20（4）：324.5陳小野.實用中醫(yī)證候動