川芎嗪和尼莫地平對血管內皮細胞分泌ET和NO的影響

1、川芎嗪和尼莫地平對血管內皮細胞分泌ET和NO的影響    摘要為探討川芎嗪和尼莫地平在心腦血管疾病防治中的作用機制，我們采用內皮細胞體外培養(yǎng)的方法，觀察尼莫地平和川芎嗪對內皮細胞分泌內皮素（ET）和一氧化氮（NO）的影響。實驗結果發(fā)現，兩藥均能不同程度地抑制正常體外培養(yǎng)的內皮細胞產生內皮素，改變ET和NO的比例，從而起到防治心腦血管疾病的作用。關鍵詞川芎嗪尼莫地平內皮細胞內皮素一氧化氮血管內皮細胞在心腦血管疾病中的作用越來越受到重視，內皮細胞的功能改變與疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關。本實驗采用內皮細胞體外培養(yǎng)的方法，觀察臨床廣泛應用于心腦血管疾病治療的藥物尼

2、莫地平和川芎嗪對內皮細胞分泌內皮素（ET）和一氧化氮（NO）的影響，探討兩藥在心腦血管疾病治療中的作用機制。材料和方法一、材料1尼莫地平(簡稱NM），為德國拜耳（Bayer）公司制造的尼莫通注射液（批號：00519885M-D），每瓶50ml，含尼莫地平10mg。使用前用細胞培養(yǎng)液稀釋成所需實驗濃度。2鹽酸川芎嗪注射液（簡稱LZ或川芎嗪），由北京第四制藥廠生產（批號960426），每支2ml，含鹽酸川芎嗪40mg。使用前用細胞培養(yǎng)液稀釋成所需實驗濃度。3一氧化氮試劑盒（硝酸還原酶法），由南京建成生物工程研究所提供。4內皮素放射免疫測定藥盒，由北京東亞免疫技術研究所提供。二、方法1含藥物培養(yǎng)液的

3、配制：分別在RPMI-1640培養(yǎng)液中加入川芎嗪和尼莫地平，配制成含川芎嗪100gml、20gml和含尼莫地平10gml、2gml的含藥培養(yǎng)液。2實驗分組：根據處理因素的不同，將實驗共分成5組。其中1組為正常對照組；25組分別在培養(yǎng)液中加入川芎嗪100gml、 20gml和尼莫地平10gml、2gml。每12孔為一實驗組。3人臍靜脈內皮細胞（EC）培養(yǎng)：按Jaffe等的方法稍加改進，獲取臍靜脈內皮細胞，加入RPMI-1640培養(yǎng)液(其中含20小牛血清，青霉素105UL、鏈霉素105UL、L-谷氨酰胺2mM），將pH調至7.2左右，用乳頭吸管輕輕吹打均勻后，吸取2ml接種于6孔塑料培養(yǎng)板（Fal

4、con）的每孔中，置5CO2培養(yǎng)箱中（37）培養(yǎng)，每2天換液一次。4藥物對EC的影響：原代培養(yǎng)細胞將鋪滿培養(yǎng)孔底時，吸出培養(yǎng)液，經PBS沖洗后，用加樣器吸取含有不同濃度藥物的培養(yǎng)液2ml加入每孔中。繼續(xù)培養(yǎng)24小時后，吸出培養(yǎng)液分別用放射免疫方法測定ET含量，用硝酸還原酶法測定NO代謝產物NOx含量。每孔中加入0.05胰酶0.02EDTA溶液0.5ml，將細胞消化后收集，再加入1.5mlPBS沖洗后以血球計數臺計數細胞數。5統(tǒng)計學處理：首先，根據各樣本(孔)細胞計數，將所測得的ET和NOx濃度換算成1×105細胞ml的含量，其中NOx再去除各組培養(yǎng)前培養(yǎng)液中的本底含量。然后采用隨機分

5、組設計資料的方差分析方法進行統(tǒng)計學處理。結果正常內皮細胞24小時ET分泌量為1226.8±118.5ngL×105細胞L，用藥各組內皮素分泌量均有不同程度的減少，除LZ2組外，均有顯著差異（P0.01）（見附表）。尼莫地平作用較川芎嗪為強（P0.05或P0.01）。兩者均以大劑量組作用為強（P0.01）。正常內皮細胞24小時NOx產生量為33.0±5.9molL。用藥各組NOx含量無顯著差異（P0.05）（見附表）。附表川芎嗪和尼莫地平對內皮細胞分泌ET和NOx的影響 n ET含量（ngL） NOx含量（molL） 對照組 12 1226.8±

6、118.5 33.0±5.9 LZ1 12 1052.2±66.7* 34.2±7.2 LZ2 12 1219.4±94.0 32.6±8.2 NM1 12 881.5±90.0* 31.0±10.2 NM2 12 1096.7±95.6* 34.2±10.4與對照組比較*P0.01討論ET和NO是近年來發(fā)現的器官局部調節(jié)因子。血管內皮細胞通過釋放ET收縮血管和促進內皮細胞增殖，同時釋放NO松馳血管平滑肌和抑制內皮細胞的增殖。正常情況下，ET和NO處于動態(tài)平衡狀態(tài)，維持著血管舒縮功能1。兩種血管作用物質平

7、衡破壞時便導致血管收縮，產生高血壓、動脈硬化等一系列心血管疾病。本實驗結果發(fā)現，川芎嗪和尼莫地平能不同程度地抑制正常體外培養(yǎng)內皮細胞產生內皮素，從而改變ET和NO的比例。這對臨床心腦血管病的防治具有重要意義。川芎嗪和尼莫地平在臨床血管性疾病的治療中已取得明顯療效，尤其對缺血性腦血管病，它們能擴張腦血管，增加局部腦血流量，從而改善腦血液循環(huán)和能量代謝功能，降低乳酸酸中毒，減少缺血性腦損傷的發(fā)生25。但這些作用的機制尚不清楚。本實驗在體外培養(yǎng)的內皮細胞研究中發(fā)現，川芎嗪和尼莫地平均能抑制內皮細胞產生ET，從而可使ET和NO的平衡狀態(tài)得到改善，進而減輕病變血管的收縮或痙攣，增加缺血區(qū)的血液供應，改善

8、缺血組織的代謝狀態(tài)，減輕組織損傷。因而，本實驗結果進一步揭示了川芎嗪和尼莫地平的上述臨床作用機制，為兩藥的臨床應用提供了可靠的實驗和理論依據。臨床大劑量應用尼莫地平可引起血壓下降、皮膚潮紅等血管擴張現象3，而川芎嗪的降壓作用則較弱4，5。這與我們在實驗中發(fā)現的尼莫地平抑制ET產生的作用較川芎嗪強這一結果相符。因而，本實驗結果從細胞水平進一步證明，川芎嗪和尼莫地平在心腦血管的防治中具有良好的應用前景。 參考文獻1Ehrenreich H，et alCleve Clin J Med 1995；62（2）：1052Fieschi C，et alJ Carolivase Pharmacol 1998；12（Sup-ple6）：s833王桂紅綜述國外醫(yī)學腦血管疾病分冊 1997；5（2）：