大孔吸附樹脂分離富集土貝母總皂苷的研究

1、大孔吸附樹脂分離富集土貝母總皂苷的研究馬挺軍 屠鵬飛 3 呂飛杰1北京大學(xué) 藥學(xué)院 北京1中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院 北京1中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京 摘要 目的優(yōu)化大孔吸附樹脂分離純化土貝母總皂苷的工藝條件 方法 以土貝母總皂苷的吸附量和解 吸率為指標(biāo)大范圍篩選樹脂 并通過單因素試驗(yàn) ! 正交試驗(yàn)及方差分析確定了土貝母總苷分離富集的優(yōu)選操作條 件 結(jié)果 樹脂具有較好的吸附性能和解吸效果 優(yōu)選吸附條件為上樣含生藥量 # 樹脂色譜柱的 徑高比 藥材 樹脂為 吸附完全后 先以水洗脫 除去雜質(zhì) 再以 乙醇洗脫 可以得到純度較好的土貝 母總苷 結(jié)論 樹脂對土貝母總苷的吸附量大 解吸容易 確定的吸附與

2、洗脫條件簡單可行 所得產(chǎn)品的色澤 好 ! 純度高此工藝具有良好的產(chǎn)業(yè)化前景 關(guān)鍵詞 土貝母土貝母總苷 生產(chǎn)工藝 大孔吸附樹脂 中圖分類號(hào) 1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 文章編號(hào) 2 2 2 收稿日期 2 2 通訊作者 3屠鵬飛 × 2 1 1 土貝母為葫蘆科植物土貝母 µµ2µ ¬ 1 干燥的塊莖 有清熱解 毒 消腫散結(jié)之功效 主治乳癰 瘰疬痰核 瘡瘍腫 毒 疣贅 蛇蟲咬傷 其主要成分為甾醇 ! 三萜皂苷 等 土貝母皂苷主要組分為土貝母苷甲 ! 乙 ! 丙 苷甲含量達(dá) 1 具有抗 腫瘤 ! 抗病毒等多種藥理活性 為了更好地開發(fā)和應(yīng)用土貝母資源 對土貝母 總苷

3、的提純工藝進(jìn)行了研究 結(jié)果表明 利用型大孔吸附樹脂純化土貝母總苷具有工藝簡單 操 作方便 總苷純度高等優(yōu)點(diǎn) 1 藥材 !試劑與儀器 土貝母采自山西省絳縣 經(jīng)北京大學(xué)藥學(xué)院屠鵬 飛教授鑒定為葫蘆科植物土貝母 1µ的 干燥塊莖 紫外分光光度計(jì) ° 2 大孔樹脂 2 南開大學(xué)化工 廠 ° ° ° 滄州寶恩化工有限公 司 天津農(nóng)藥總廠 土貝母苷甲 對照品 自制 光譜鑒定結(jié)構(gòu)為苷甲 ° 檢測純度 大于 香草醛 ! 冰醋酸 ! 高氯酸和甲醇均為分析 純 2 方法與結(jié)果 211 含量測定21111 標(biāo)準(zhǔn)曲線考察 精密稱取土貝母苷甲對照品 1 置 量

4、瓶中 加甲醇超聲溶解并定容至刻度 備用 分別吸取對照品溶液 1 11 1 1 1 置 具塞試管中水浴蒸干 然后放入 烘箱中烘 待冷 卻后分別加入 的香草醛 2冰醋酸溶液 1 振搖溶解后加入濃硫酸 1 搖勻后置于 水浴中加熱然后冰水冷卻 再各加入冰醋 酸 冰水冷卻 后于 測定吸光度 得到回歸方程 1 1 1在 1 1 時(shí) 線性關(guān)系良好 21112 樣品含量 精密量取供試液 放入 具塞試管中 水浴蒸干然后放入 烘箱中烘 待冷卻后按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法測定吸光度 并計(jì)算總皂苷的含量 21113 上樣溶液制備 稱取粉碎的土貝母藥材加入 乙醇 加熱回流提取 次 每次 減壓蒸干得浸膏 上樣時(shí)加入適量水配

5、制不同含量備用 212 大孔吸附樹脂選擇21211 靜態(tài)吸附量考察 分別精密稱取預(yù)處理過 的大 孔 吸 附 樹 脂 ° ° 2 ° 各 置于#量瓶中分別加入 土貝母藥材提取溶液 含生藥量為 #放置過夜 濾過 分別測 定原液和濾液中土貝母總苷的含量 測定 種樹脂的 含水量 計(jì)算各干樹脂的靜態(tài)凈吸附量 結(jié)果見圖 圖 不同樹脂對土貝母總皂苷的靜態(tài)最大吸附率從圖中可以看出 不同類型的大孔吸附樹脂對 土貝母總苷的靜態(tài)吸附效果有較大的差異 種樹 脂中吸附效果最好的為 其次為 ° 和 ° 的吸附容量最小 因此 選 擇吸附效果較好的 種樹脂 ° &#

6、176; 進(jìn)行進(jìn)一步考察 21212 大孔吸附樹脂洗脫度考察 稱取預(yù)處理過的 種大孔樹脂 ° ° 各干重 裝柱 分別取 土貝母水提液 每毫 升 生藥 上樣 然后分別依次用去離子水乙醇各 洗脫收集洗脫液 測定總皂苷的含量 計(jì)算不 同含量乙醇的洗脫量 結(jié)果見圖 圖 不同大孔樹脂對土貝母總苷的解吸曲線 可以看出 種大孔樹脂吸附土貝母總苷后均 能由不同含量的乙醇解吸出總皂苷 在 乙醇含量區(qū)間內(nèi) 隨著乙醇含量的增大 洗脫量也隨 之增大 且 乙醇洗脫效果最好 此外 可以看 出 樹脂的洗脫量整體上均超過其他 種樹 脂 綜合以上試驗(yàn) 表明 種樹脂中 大孔樹 脂對土貝母總苷吸附量最大 解吸率

7、最高 其最佳 的洗脫溶劑為 乙醇 因此以 大孔樹脂為 吸附填料進(jìn)行進(jìn)一步的考察 21213 最大動(dòng)態(tài)吸附量考察 精密稱取樹 脂 干重 裝柱 柱體積約 徐徐注入含量為每毫升 生藥的土貝母水提溶液 上柱流速調(diào)節(jié)為 # 收集流出液 每份 × 檢 識(shí)直至出現(xiàn)苷甲斑點(diǎn) 以流出液體積為橫坐標(biāo) 總 皂苷含量為縱坐標(biāo) 作圖 即得 樹脂對土貝母總苷的動(dòng)態(tài)吸附曲線圖 結(jié)果見圖圖 樹脂對土貝母總苷的動(dòng)態(tài)吸附曲線從上圖可以看出 樹脂對土貝母總苷具有 良好的動(dòng)態(tài)吸附性能 泄漏時(shí)間較長 才開始 出現(xiàn)泄漏 并較長時(shí)間保持低濃度泄漏 直到流出 液達(dá)到 時(shí) 流出液中總皂苷的含量才達(dá)到1 #左右 當(dāng)流出液的體積到達(dá) 時(shí)

8、已達(dá)到吸附平衡 此時(shí)大孔吸附樹脂的飽和動(dòng)態(tài) 吸附量約為每克干樹脂 總皂苷 相當(dāng)于 1生藥 與靜態(tài)吸附特征基本一致 213 大孔樹脂吸附條件的優(yōu)化為考察上樣時(shí)樣品溶液的濃度 ! 樹脂柱的徑高 比和生藥與樹脂的比例 個(gè)條件對 樹脂吸附 土貝母總苷的影響采用表 的正交設(shè)計(jì)分別裝柱 ! 上樣 并計(jì)算各柱子對應(yīng)的樹脂的吸附量 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 及方差分析分別見表 表正交試驗(yàn)因素水平水平 上樣含量#樹脂色譜柱 徑高比藥材 樹脂 表 正交試驗(yàn)結(jié)果1動(dòng)態(tài)吸附量1 1 1 1 1 1 1 11#表 正交試驗(yàn)方差分析方差來源 離均差平方和 自由度 均方 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 誤差 1 1注 11由表

9、 可知 因素 無顯著性差異 說明了上 樣含量在 # 內(nèi)對 吸附土貝母 總苷的效率無顯著性影響 水平 對應(yīng)的動(dòng)態(tài)吸附 率相對高些 因此選擇 # 的樣品含量上 樣 因素 和因素 均有顯著性差異 說明在正交 設(shè)計(jì)的 個(gè)水平內(nèi) 因素的變化對總皂苷的吸附 率有較大的影響 根據(jù)試驗(yàn)數(shù)據(jù)并結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)考 慮 最后確定最佳吸附條件為 即上樣含量 為 # 色譜柱的徑高比確定為 藥材 樹脂比例為 214乙醇含量對洗脫效果的影響取 大孔吸附樹脂依法上柱 按上 述實(shí)驗(yàn)確定的吸附條件進(jìn)行吸附 吸附完全后 以梯 度乙醇洗脫 收集洗脫液 濃縮至干后稱重并測定總 皂苷的含量 計(jì)算雜質(zhì)累積洗脫率和總皂苷累積洗 脫率 以乙醇含量

10、為橫坐標(biāo) 以洗脫率為縱坐標(biāo)作 圖 結(jié)果見圖 從圖 可以看出 吸附后用水洗脫可以除去 圖 乙醇含量對洗脫效果的影響的雜質(zhì)成份 乙醇可以除去 以上的雜 質(zhì) 但是有少量的皂苷損失 在要求終產(chǎn)品的純度較 高時(shí) 可以忽略不計(jì) 因此 吸附后可以用水或者 乙醇洗脫除雜 隨著醇濃度的增加 總皂 苷的洗脫率也得以提高 當(dāng)乙醇含量達(dá)到 時(shí) 以上的總皂苷都被洗脫下來 此后再增加乙醇 濃度解吸率雖有提高 但變化不明顯 而且乙醇濃 度過高 生產(chǎn)成本增加 而且存在安全隱患 因此采 用 乙醇為最終的洗脫濃度 3討論樹脂對土貝母總皂苷的吸附量大 解吸容 易 大孔樹脂的飽和動(dòng)態(tài)吸附量約為每克干樹脂 總皂苷 與靜態(tài)吸附特征相符 確定的吸附與洗 脫條件簡單易行 可作為土貝母總皂苷的純化方法 參考文獻(xiàn) 中國藥典 1一部 1 1 1 于立堅(jiān) 馬潤娣 于廷曦 1土貝母苷甲和苷乙的抗腫瘤作用 1中國新藥雜志 1µµµµµµ× 2 × ° 2