直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)對淋巴化療和區(qū)域緩釋化療藥物聚集濃度的影

1、直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)對淋巴化療和區(qū)域緩釋化療藥物聚集濃度的影響         【摘要】  目的 研究直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)對區(qū)域緩釋化療(regional extended release chemotherapy，RERC)和淋巴化療(lymphatic chemotherapy，LC)藥物聚集濃度的影響。方法 分別采取RERC組和LC組直腸癌腸上、腸旁淋巴結(jié)、腸系膜血管旁和腸系膜血管根部淋巴結(jié)，進行病理學(xué)及淋巴結(jié)內(nèi)藥物濃度分析。結(jié)果 LC組和RERC組直腸癌3站腫瘤轉(zhuǎn)移陽性與陰性淋巴結(jié)內(nèi)藥物濃度進行比

2、較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論 直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)對RERC和LC淋巴結(jié)內(nèi)藥物濃度聚集無明顯影響。 【關(guān)鍵詞】  直腸腫瘤 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 淋巴化療 藥物聚集濃度   Effect of tumor metastasis status of rectal cancer lymph nodes on drug concentration for lymphatic chemotherapy and regional extended release chemotherapy  MENG Qiang, MENG Ronggui, CUI Long. D

3、epartment of Surgery, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China   【Abstract】  Objective  To study the influnence of tumor metastasis status of rectal cancer lymph nodes in drug concentration for lymphatic chemotherapy (LC) and regional extended

4、 release chemotherapy (RERC).  Methods  The lymph nodes in LC group and RERC group were collected from rectal cancer, side colon, side and root site of mesentery blood vessel for pathological observation and drug concentration analysis. Results  There is no statistical difference on d

5、rug concentration for LC or RERC in lymph nodes in both groups with or without tumor metastasis (P0.05). Conclusion  Tumor metastasis status of rectal cancer lymph nodes exerts insignificant effect on drug concentration for LC and RERC.   【Key words】  Rectal cancer; Lymph node me

6、tastasis; Lymphatic chemotherapy; Drug concentration   淋巴化療可以在局部淋巴系統(tǒng)內(nèi)形成高藥物濃度，對防治腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有重要意義。但是腫瘤出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移后，可能堵塞淋巴管，是否會影響藥物分布尚未可知。故探討直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)對淋巴化療藥物聚集濃度的影響以判斷療效。   1  資料和方法   1.1  臨床資料   選擇2004年4月至2006年3月第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院肛腸外科進行手術(shù)治療的直腸癌患者40例，男22 例，女18例，年齡22

7、64歲，中位年齡47歲。全部患者腫塊位置距齒狀線10 cm以內(nèi)， 術(shù)前病理活檢均診斷為腺癌。入院后常規(guī)行腹盆腔CT，直腸腔內(nèi)超聲檢查， 術(shù)前分期為Dukes C期或以上。   入組條件：白細(xì)胞計數(shù)4×109/L，血小板計數(shù)100×109/L，排除心、肝、腎功能異常及糖尿病，排除術(shù)前放、化療及腹、盆腔手術(shù)史。采取刮卡方式分為兩組，每組20例，分別為區(qū)域緩釋化療組(regional extended release chemotherapy，RERC組)和淋巴化療組(lymphatic chemotherapy，LC組)。本課題研究已通過長海醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員

8、會批準(zhǔn)，所有受試患者均取得知情同意權(quán)。   1.2  制劑制備   1 ml注射用水充分溶解絲裂霉素(MMC)粉針劑4 mg后與1 ml國產(chǎn)納米炭(CNP)混合并振蕩15 min。再次應(yīng)用前仍需重復(fù)振蕩15 min。   1.3  儀器   Waters600E高效液相色譜儀，美國Waters 公司產(chǎn)；WatersEmpower色譜管理軟件工作站；氦氣在線脫氣裝置；Waters2487雙通道紫外光度檢測器；XW80A型漩渦混合器，上海醫(yī)科大學(xué)化學(xué)儀器廠產(chǎn)；LXJ離心沉淀機，上海醫(yī)用分析儀器廠產(chǎn)；

9、組織勻漿機(PTMR2100型)，瑞士產(chǎn)。   1.4  藥物應(yīng)用方法   淋巴靶向制劑分別于術(shù)前48、24 h瘤周黏膜下均勻點狀分散注射1 ml。區(qū)域緩釋化療于術(shù)前48 h瘤周黏膜下點狀植入4 mg。   1.5  標(biāo)本取材   (1)摘取的部位：自腫瘤旁剖開直腸系膜，尋找腫瘤腸上、腸旁、腸系膜血管旁和腸系膜血管根部腫大淋巴結(jié)，分別命名為第1站、第2站、第3站淋巴結(jié)。(2)摘取淋巴結(jié)的大?。阂话闱闆r下將找到的淋巴結(jié)切下1/2，保留另1/2于標(biāo)本上。將切下的1/2分別進行病理學(xué)和藥物濃度檢測。特

10、別小的淋巴結(jié)摘取后標(biāo)記位置，由病理科醫(yī)師行最小體積選材進行病理檢測，剩余部分進行藥物濃度檢測。所有摘取標(biāo)本即刻存放于液氮瓶中，然后轉(zhuǎn)移至深低溫冰箱(-70 )保存?zhèn)溆谩?#160;  1.6  藥物濃度測定1-2   取淋巴結(jié)樣品適量，切碎成肉糜，稱取(0.50±0.01)g，置10 ml具塞離心試管中。向試管中加入水0.20 ml，渦旋混勻，放置2 min。再加入碳酸氫鈉溶液1.0 ml，勻漿。勻漿后加入HCl溶液1.0 ml，渦旋混勻。以3 000 r/min離心30 min。分取上清液2.0 ml于另一10 ml具塞試管中。向上清液中加硫

11、酸銨0.20 g，渦旋混勻。再加乙酸乙酯4.0 ml，渦旋3 min，3000 r/min離心10 min。將上層液體盡量完全吸移至另一試管中。殘渣再加乙酸乙酯4.0 ml。仿前操作，進行第2次提取。合并兩次提取液。將提取液置負(fù)壓恒溫箱中，控制溫度30 ，抽真空，使乙酸乙酯揮盡，留下油狀濃縮物。向濃縮物加入流動相0.1 ml，即以密封膜封口。小心旋轉(zhuǎn)試管角度使浸潤完全，渦旋510 min，使藥物溶解。最后經(jīng)0.22 m微孔濾膜濾過，得供試液。組織空白樣的處理：完全仿上處理，僅將組織樣品改為空白組織樣品。組織對照樣的處理：仿組織空白樣處理，僅將加水0.2 ml步驟改成加適量絲裂霉素對照品溶液。取

12、供試液20.0 l注入色譜儀，記錄色譜圖。對各圖譜中的MMC峰進行定性識別，然后計算各圖譜中的MMC峰面積，按對照樣與供試樣的峰面積之比定量。            1.7  統(tǒng)計學(xué)處理   使用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件，藥物濃度數(shù)據(jù)采用±s表示。所取淋巴結(jié)陽性率的比較采用四格表資料的2檢驗，兩樣本均數(shù)的比較用t檢驗。   2  結(jié)果   2.1  LC組和RERC組淋巴結(jié)采取情況(表1)表1&

13、#160; LC組和RERC組淋巴結(jié)采取數(shù)量   2.2  LC組和RERC組隨機分組情況的比較LC組和RERC組所取材淋巴結(jié)陽性率比較，21.094，P0.331，表明2個試驗組所取淋巴結(jié)腫瘤轉(zhuǎn)移陽性率之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，即2個試驗組樣本均衡(表2)。表2  LC組和RERC組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性率的比較   2.3  LC組和RERC組直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)對藥物聚集濃度的影響 LC組和RERC組組內(nèi)站內(nèi)轉(zhuǎn)移和未轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)藥物濃度相比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)，表明不論LC組還是RERC組組內(nèi)各站轉(zhuǎn)移和未轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)藥

14、物濃度無明顯差別(表3)。表3  LC組和RERC組直腸癌各站淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)的 藥物聚集濃度比較   3  討論   復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致直腸癌術(shù)后最終死亡的主要原因3。越來越多的證據(jù)表明淋巴途徑轉(zhuǎn)移在實體瘤轉(zhuǎn)移中占有重要地位。化療藥物持續(xù)高濃度作用的時間和范圍與化療效果有關(guān)系。常規(guī)輔助化療難以形成藥物大范圍持續(xù)高濃度。淋巴化療后藥物在淋巴系統(tǒng)內(nèi)可以形成高濃度，但分布范圍與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)的關(guān)系尚未可知。   本研究中LC組和RERC組均有患者第3站沒有采集到淋巴結(jié)，不排除漏檢是可能的原因之一，但有研究表明可能與腫瘤

15、惡性程度高和機體免疫反應(yīng)差有關(guān)。兩受試組所采集淋巴結(jié)腫瘤轉(zhuǎn)移陽性率進行比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，表明兩受試組之間對照均衡。   活性炭與脂質(zhì)體是目前應(yīng)用最廣的兩種淋巴化療藥物載體，活性炭同時還具備淋巴示蹤功能4。我們選擇CNP吸附MMC進行研究。CNP是由直徑為21 nm的光滑炭粒所聚集形成的納米團，通過腫瘤轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)時可能會受到影響，但是否可通過淋巴網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中的其他途徑到達(dá)，或藥物在淋巴管內(nèi)的擴散而達(dá)到藥物持續(xù)均衡分布尚未可知。檢測腫瘤轉(zhuǎn)移陽性淋巴結(jié)和陰性淋巴結(jié)中藥物濃度，并進行比較是可靠的驗證方法。   統(tǒng)計分析顯示，LC組未發(fā)生癌轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)藥物濃度

16、略高于轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)，但兩者之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示淋巴結(jié)內(nèi)的癌轉(zhuǎn)移灶對CNP吸附MMC進入淋巴結(jié)不構(gòu)成顯著影響。這與陳江浩4對乳腺癌淋巴化療時所檢測結(jié)果一致。從而證明淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)不是影響淋巴化療效果的因素，而僅僅是淋巴化療的目的。   但是在應(yīng)用納米炭進行前哨淋巴結(jié)導(dǎo)航時，黑染范圍往往有限。這可能與注射后納米炭粒在淋巴管中運行的時間有關(guān)5，運行時間越長，分布的范圍越廣。直腸癌淋巴化療持續(xù)48 h，所以炭粒分布范圍較廣，炭粒經(jīng)淋巴循環(huán)最終通過肺和消化道排出體外，完全排出需要13個月6。   本研究中RERC組腫瘤轉(zhuǎn)移陽性與轉(zhuǎn)移陰性淋巴結(jié)內(nèi)藥物濃度比較

17、差異無統(tǒng)計統(tǒng)計學(xué)意義。分析原因可能為RERC主要通過藥物在組織內(nèi)擴散進行分布，所以血流或淋巴液流速對其分布將造成一定程度的影響，而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)影響不明顯?！緟⒖嘉墨I】  1 劉煒,陳建海,任非，等.絲裂霉素C聚氰基丙烯酸正丁酯磁性納米球血藥濃度的測定J.第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2005,25(4):413-415.2 鐘小斌,黃振光,吳闖,等.HPLC測定組織中絲裂霉素C的濃度J.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志,1998,15(4):46-48.3 Raj G V, Moreno J G, Gomella L G. Utilization of polymerase chain reaction technology in the detection of solid tumorsJ. Cancer,1998,82(8):1419-1442.4 陳江浩，楊引明，李開宗,等.乳腺癌淋巴化療與靜脈化療后腋窩淋巴結(jié)藥物濃度的比較J.癌癥，200