老年下呼吸道感染患者外周血細(xì)胞免疫表型分析

1、老年下呼吸道感染患者外周血細(xì)胞免疫表型分析         【摘要】  目的： 了解老年人下呼吸道感染時(shí)機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài)，為合理有效的干預(yù)提供一定的參考。方法: 采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)老年下呼吸道感染患者及健康老年組外周血淋巴細(xì)胞免疫表型（CD3，CD4，CD8，CD4/CD8比值，CD16，CD19），觀察老年人下呼吸道感染時(shí)機(jī)體細(xì)胞免疫功能變化。結(jié)果: 老年健康組CD3、CD4 較對(duì)照組降低， CD4/CD8比值降低。老年感染組CD3、CD4、CD4/CD8比值、CD19較對(duì)照組及老年健康組均降低，CD8

2、水平升高，差異均有顯著性（P0.05）。結(jié)論: 老年人下呼吸道感染的發(fā)生、發(fā)展與機(jī)體的細(xì)胞免疫功能紊亂有關(guān)。對(duì)細(xì)胞免疫功能的監(jiān)測(cè)，可作為評(píng)估老年個(gè)體免疫狀態(tài)及對(duì)老年人下呼吸感染的預(yù)防、治療以及合理有效干預(yù)的參考。 【關(guān)鍵詞】  呼吸道感染； 免疫，細(xì)胞； 老年人   Abstract Objective:  To collect information of the cellular immunity of aged patients with lower respiratory infection, and so as to provide refer

3、ence for reasonable and effective intervention of the disease. Methods: The contents of lymphocytes CD3, CD4, CD8, CD4/CD8, CD16, CD19 in peripheral blood of aged patients with lower respiratory tract infection (group LRI) and healthy old people (group HOP) were detected with flow cytometry. Results

4、: The levels of CD3, CD4, and CD4/CD8 in the group HOP were lower than those of young control group (YCG). The levels of CD3, CD4, CD4/CD8, and CD19 in group LRI were lower than those of groups YCG and HOP. The level of CD8 was higher in group LRI than that in YCG. The difference was significant(P0.

5、05). Conclusions: The occurrence and the progress of lower respiratory tract infection in aged people are related to disorder of cellular immunity. Monitoring on the changes of immunological function is helpful to the evaluation of individual immunity condition of aged people, and can provide refere

6、nce to the prevention, treatment and effective intervention of the disease.   Key words respiratory tract infections; immunity,cellular; aged   隨著社會(huì)人口的老齡化，下呼吸道感染是嚴(yán)重危害老年人健康的常見(jiàn)感染性疾病。也是造成老年人死亡的重要原因之一。而老年人對(duì)感染性疾病的易感性和難治性始終成為困擾老年病治療的一大難題。采用流式細(xì)胞儀對(duì)老年人群與老年下呼吸道感染患者外周血淋巴細(xì)胞表型進(jìn)行分析，旨在了解老年人下呼吸道

7、感染時(shí)機(jī)體細(xì)胞免疫功能的變化，為合理有效的干預(yù)提供一定的參考。    1  對(duì)象與方法   1.1  研究對(duì)象   老年下呼吸道感染患者30例，年齡6595歲，平均（76±8.3）歲，均為男性。為2005年11月2007年12月在貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院綜合病房住院的老年患者。健康老年組26例，男24例，女2例，年齡6384歲，平均（68±5.8）歲，為同期健康體檢者。健康志愿者30例作為正常對(duì)照組。所有人員均無(wú)腫瘤病史，未使用影響免疫功能的藥物。   1.2  診斷標(biāo)

8、準(zhǔn)   社區(qū)獲得性肺炎（CAP）診斷符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)2006年修定的社區(qū)獲得性肺炎診斷和治療指南1；慢性阻塞性肺疾病急性加重（AECOAP）診斷符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)1997年制定的COPD的診治規(guī)范（草案）。   1.3  檢測(cè)方法    1.3.1  淋巴細(xì)胞免疫功能檢測(cè)  靜脈取血2 ml，以EDTAK2抗凝，立即送檢，2 h內(nèi)進(jìn)行熒光抗體染色。所有熒光抗體為Simultest IMK-lymphocyte試劑（美國(guó)Becton Dickinson產(chǎn)品）。每份標(biāo)本同時(shí)做6管即

9、IgG1/Ig2a(對(duì)照管),CD45/CD14（對(duì)照管），CD3/CD19，CD3/CD4，CD3/CD8，CD3/CD16+56，分別加入相應(yīng)熒光抗體20 l和100 l抗凝血于各管底部，徹底混合后，置室溫暗處孵育20 min，然后加入溶血素（FACS溶解液）2 ml，迅速于混旋器上混勻，置室溫處放置8 min，棄上清液，加入PBS 2 ml洗滌，并以1 000 r/min離心5 min，棄上清液，加入100 l PBS混勻后立即上流式細(xì)胞儀檢測(cè)。   1.3.2  流式細(xì)胞儀檢測(cè)  采用美國(guó)BD 公司流式細(xì)胞儀FACSCalibur,以三色熒光標(biāo)準(zhǔn)

10、微球，啟動(dòng)FACSCom 軟件，使儀器處于最佳工作狀態(tài)。用 Simulset軟件分析淋巴細(xì)胞CD3/CD19、CD3/CD4、CD3/CD8、CD3/CD16+56、CD4/CD8。            1.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理   采用SPSS軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，各項(xiàng)測(cè)定值用x+s表示，組間比較采用單因素方差分析。    2  結(jié)果   2.1  T淋巴細(xì)胞亞群   健康老

11、年組CD3、CD4、CD4/CD8水平較正常對(duì)照組降低，差異有顯著性（P0.05）。老年感染組CD3、CD4低于健康老年組,CD8水平高于正常對(duì)照組及健康老年組，CD4/CD8水平低于正常對(duì)照組。   2.2  B淋巴細(xì)胞（CD19）   CD19老年感染組低于正常對(duì)照組及健康老年組，CD16+56老年健康組及老年感染組均高于正常對(duì)照組，差異有顯著性（P0.05）。各組間淋巴細(xì)胞結(jié)果見(jiàn)表1。表1  各組外周血淋巴細(xì)胞測(cè)定結(jié)果 (1)與對(duì)照組比較,P0.05；(2)P0.01。(3)與健康老年組比較，P0.05;(4)P0.01

12、0;  3  討論   研究表明，衰老現(xiàn)象是一個(gè)循序漸進(jìn)的自然過(guò)程，生物個(gè)體隨著時(shí)間的推移而發(fā)生的特征性的表型變化與疾病衰老不同。免疫系統(tǒng)功能隨衰老而不斷下降，而免疫衰老最突出表現(xiàn)之一是T淋巴細(xì)胞功能的減退。本研究采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)老年下呼吸道感染患者及健康老年體檢者外周血淋巴細(xì)胞免疫表型進(jìn)行分析。本文觀察的T細(xì)胞亞群CD3、CD4、CD8、CD16均是T細(xì)胞重要的表面抗原標(biāo)志（屬T細(xì)胞輔助抗體），它們作為免疫效應(yīng)細(xì)胞在直接殺傷靶細(xì)胞進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮著重要的功能。   T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫在機(jī)體免疫方面起著核心作用。T細(xì)胞亞群

13、中的CD3是總T細(xì)胞的表面標(biāo)志，CD4是輔助T細(xì)胞（Th）和效應(yīng)T細(xì)胞的表面標(biāo)志，CD8是細(xì)胞毒T細(xì)胞和抑制T細(xì)胞（Ts）的表面標(biāo)志,CD19是B淋巴細(xì)胞的表面標(biāo)志。Th通過(guò)釋放多種細(xì)胞因子輔助B細(xì)胞和效應(yīng)T細(xì)胞活化，上調(diào)機(jī)體的免疫功能。本組資料顯示，老年人外周血CD3、CD4均有明顯降低。CD4 /CD8比例降低，構(gòu)成了老年人的細(xì)胞免疫表型，與文獻(xiàn)報(bào)道相似。  隨著增齡， T細(xì)胞隨胸腺細(xì)胞數(shù)的減少而減少，而CD8 T細(xì)胞的增加是T細(xì)胞受體表面基因多樣性受損的變化，CD4/CD8比例下降直接反應(yīng)了宿主T細(xì)胞亞群的紊亂狀態(tài)。該現(xiàn)象造成T細(xì)胞的抗原識(shí)別譜變窄，對(duì)病原體及變異株的清除能力下

14、降4，5。機(jī)體的免疫狀態(tài)與感染防御能力是甚為相關(guān)的，而老年人免疫功能的降低也是老年人易患各種感染性疾病的重要原因。老年肺炎組CD3、CD4、CD19的水平較健康老年組明顯降低，提示老年人感染后會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞免疫功能的更加低下。表明感染因素對(duì)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能具有抑制作用，致細(xì)胞免疫應(yīng)答反應(yīng)遲緩，抗原提呈細(xì)胞功能降低，T細(xì)胞殺傷作用及產(chǎn)生細(xì)胞因子能力減弱，成為老年肺炎發(fā)病后病情重、易遷延、病死率高的原因之一。CD16能識(shí)別NK細(xì)胞，NK細(xì)胞是無(wú)需抗原預(yù)先致敏就能殺傷腫瘤細(xì)胞的淋巴樣細(xì)胞。本組資料中老年健康組、老年感染組與對(duì)照組差異有顯著性，表明年齡及感染狀態(tài)也可能影響機(jī)體細(xì)胞免疫中的非特異性成分。有

15、可能是在機(jī)體效應(yīng)T細(xì)胞減少、對(duì)外界病原微生物感染的免疫應(yīng)答作用減弱時(shí)，非特異性免疫應(yīng)答可能具有更重要的意義，借以維持機(jī)體免疫應(yīng)答的相對(duì)穩(wěn)定狀態(tài) 。這一免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)是極其精細(xì)、復(fù)雜的過(guò)程，其詳細(xì)機(jī)制有待更深入的研究。   綜上所述，老年人下呼吸道感染的發(fā)生、發(fā)展與機(jī)體的細(xì)胞免疫功能紊亂有關(guān)。臨床醫(yī)生應(yīng)重視老年人下呼吸道感染后T細(xì)胞免疫功能的變化，以作為評(píng)估老年個(gè)體免疫狀態(tài)，并對(duì)老年人下呼吸感染的預(yù)防、治療以及對(duì)細(xì)胞免疫功能合理有效干預(yù)的參考?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì).社區(qū)獲得性肺炎診斷和治療指南J.中華結(jié)核和呼吸雜志，2006（10）：651-655.中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì) . COPD的診治規(guī)范（草案）J.中華結(jié)核和呼吸雜志，1997(20)：199-203.Globerson RB Effros. Aging of lymphocytes and lymphocytes in