微生物檢測樣品的處理方法(共6頁)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上1. 化妝品微生物檢測樣品的處理（摘至GB7918） 樣品的采集1.1所采集的樣品，應(yīng)具有代表性，一般視每批化妝品數(shù)量大小，隨機(jī)抽取相應(yīng)數(shù)量的包裝單位。檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別從兩個(gè)包裝單位以上的樣品中共取10g或10mL。包裝量小于20g的樣品，采樣時(shí)可適當(dāng)增加樣品包裝數(shù)量。1.2 供檢驗(yàn)樣品，應(yīng)嚴(yán)格保持原有的包裝狀態(tài)。容器不應(yīng)有破裂，在檢驗(yàn)前不得打開，防止樣品被污染。1.3 接到樣品后，應(yīng)立即登記，編寫檢驗(yàn)序號，并按檢驗(yàn)要求盡快檢驗(yàn)。如不能及時(shí)檢驗(yàn)，樣品應(yīng)放在室溫陰涼干燥處，不要冷藏或冷凍。1.4 若只有一個(gè)樣品而同時(shí)需做多種分析，如細(xì)菌、毒理、化學(xué)等，則宜先取出部分樣品做

2、細(xì)菌檢驗(yàn)，再將剩余樣品做其它分析。1.5 在檢驗(yàn)過程中，從打開包裝到全部檢驗(yàn)操作結(jié)束，均須防止微生物的再污染和擴(kuò)散，所用器皿及材料均應(yīng)事先滅菌，全部操作應(yīng)在符合生物安全要求的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。供檢樣品的制備2.1 液體樣品2.1.1 水溶性的液體樣品，可量取10mL加到90mL滅菌生理鹽水中，混勻后，制成1：10檢液。2.1.2 油性液體樣品，取樣品10g，先加5mL滅菌液體石蠟混勻，再加10mL 滅菌的吐溫80，在4044水浴中振蕩混合10min，加入滅菌的生理鹽水75mL（在4044水浴中預(yù)溫），在4044水浴中乳化，制成1：10的懸液。2.2 膏、霜、乳劑半固體狀樣品5.2.1 親水性的樣品

3、：稱取10g，加到裝有玻璃珠及90mL 滅菌生理鹽水的三角瓶中，充分振蕩混勻，靜置15min。用其上清液作為1:10的檢液。2.2.2 疏水性樣品：稱取10g，放到滅菌的研缽中，加10mL滅菌液體石蠟，研磨成粘稠狀，再加入10mL滅菌吐溫80，研磨待溶解后，加70mL滅菌生理鹽水，在4044水浴中充分混合，制成1：10檢液。2.3 固體樣品稱取10g，加到90mL滅菌生理鹽水中，充分振蕩混勻，使其分散混懸，靜置后，取上清液作為1：10的檢液。如有均質(zhì)器，則采用無菌樣品袋，將上述水溶性膏、霜、粉劑等，稱10g樣品加入90mL 滅菌生理鹽水，均質(zhì)1min2min；疏水性膏、霜及眉筆、口紅等，稱10

4、g樣品，加10mL 滅菌液體石蠟，10mL吐溫80，70mL滅菌生理鹽水，均質(zhì)3min5min。補(bǔ)充知識：石蠟：不溶于水、甘油、冷。溶于苯、氯仿、熱乙醇。與除蓖麻油外大多數(shù)脂肪油能任意混合，樟腦、薄荷腦及大多數(shù)天然或人造均能被溶解。吐溫80：本品在水、乙醇、甲醇或醋酸乙酯中，在礦物油中極微溶解。吐溫80是一個(gè)親水性的表面活性劑，具有很強(qiáng)的破裂細(xì)胞膜的作用而引起刺激性，溶血性和組胺釋放（致敏性）。微生物繁殖速度：微生物一般20min繁殖一代，故微生物從稀釋到倒平板不宜超過20min。食品微生物檢測樣品的處理（摘自GB4789）1 樣品的稀釋1.1 固體和半固體樣品：稱取25 g 樣品置盛有 22

5、5 mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000 r/min 10000 r/min均質(zhì)1 min2 min，或放入盛有225 mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min2 min，制成1:10 的樣品勻液。 1.2 液體樣品：以無菌吸管吸取25 mL 樣品置盛有225 mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10 的樣品勻液。1.3 用1 mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10 樣品勻液1 mL，沿管壁緩慢注于盛有9 mL稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1 支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均

6、勻，制成1:100 的樣品勻液。2 樣品的采集 2.1 采樣原則 2.1.1 根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康摹⑹称诽攸c(diǎn)、批量、檢驗(yàn)方法、微生物的危害程度等確定采樣方案。 2.1.2 應(yīng)采用隨機(jī)原則進(jìn)行采樣，確保所采集的樣品具有代表性。 2.1.3 采樣過程遵循無菌操作程序，防止一切可能的外來污染。 2.1.4 樣品在保存和運(yùn)輸?shù)倪^程中，應(yīng)采取必要的措施防止樣品中原有微生物的數(shù)量變化，保持樣品的原有狀態(tài)。 2.2 采樣方案 2.2.1 類型 采樣方案分為二級和三級采樣方案。二級采樣方案設(shè)有n 、c 和m值，三級采樣方案設(shè)有n 、c 、m和M 值。 n ：同一批次產(chǎn)品應(yīng)采集的樣品件數(shù)； c ：最大可允許超出m值的樣

7、品數(shù)； m：微生物指標(biāo)可接受水平的限量值； M： 微生物指標(biāo)的最高安全限量值。 注1： 按照二級采樣方案設(shè)定的指標(biāo)，在n個(gè)樣品中，允許有c 個(gè)樣品其相應(yīng)微生物指標(biāo)檢驗(yàn)值大于m值。GB 4789.12010 注2： 按照三級采樣方案設(shè)定的指標(biāo)，在n 個(gè)樣品中，允許全部樣品中相應(yīng)微生物指標(biāo)檢驗(yàn)值小于或等于m 值；允許有c 個(gè)樣品其相應(yīng)微生物指標(biāo)檢驗(yàn)值在m 值和M值之間；不允許有樣品相應(yīng)微生物指標(biāo)檢驗(yàn)值大于M值。 例如：n=5 ，c=2 ，m=100 CFU/g ，M=1 000 CFU/g。含義是從一批產(chǎn)品中采集5 個(gè)樣品，若5 個(gè)樣品的檢驗(yàn)結(jié)果均小于或等于m值（100 CFU/g ），則這種情況

8、是允許的；若2 個(gè)樣品的結(jié)果（X）位于m值和M 值之間（100 CFU/g <X1 000 CFU/g），則這種情況也是允許的；若有3 個(gè)及以上樣品的檢驗(yàn)結(jié)果位于m值和M 值之間，則這種情況是不允許的；若有任一樣品的檢驗(yàn)結(jié)果大于M 值（>1 000 CFU/g ），則這種情況也是不允許的。 2.2.2 各類食品的采樣方案 按相應(yīng)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)中的規(guī)定執(zhí)行。 2.2.3 食源性疾病及食品安全事件中食品樣品的采集 2.2.3.1 由工業(yè)化批量生產(chǎn)加工的食品污染導(dǎo)致的食源性疾病或食品安全事件，食品樣品的采集和判定原則按4.2.1和4.2.2執(zhí)行。同時(shí)，確保采集現(xiàn)場剩余食品樣品。 2.2.3.2

9、 由餐飲單位或家庭烹調(diào)加工的食品導(dǎo)致的食源性疾病或食品安全事件，食品樣品的采集按GB 14938中衛(wèi)生學(xué)檢驗(yàn)的要求，以滿足食源性疾病或食品安全事件病因判定和病原確證的要求。 2.3 各類食品的采樣方法 采樣應(yīng)遵循無菌操作程序，采樣工具和容器應(yīng)無菌、干燥、防漏，形狀及大小適宜。 2.3.1 即食類預(yù)包裝食品 取相同批次的最小零售原包裝，檢驗(yàn)前要保持包裝的完整，避免污染。2.3.2 非即食類預(yù)包裝食品 原包裝小于500 g的固態(tài)食品或小于500 mL的液態(tài)食品，取相同批次的最小零售原包裝；大于500 mL的液態(tài)食品，應(yīng)在采樣前搖動(dòng)或用無菌棒攪拌液體，使其達(dá)到均質(zhì)后分別從相同批次的n 個(gè)容器中采集5

10、倍或以上檢驗(yàn)單位的樣品；大于500 g 的固態(tài)食品，應(yīng)用無菌采樣器從同一包裝的幾個(gè)不同部位分別采取適量樣品，放入同一個(gè)無菌采樣容器內(nèi), 采樣總量應(yīng)滿足微生物指標(biāo)檢驗(yàn)的要求。 2.3.3 散裝食品或現(xiàn)場制作食品 根據(jù)不同食品的種類和狀態(tài)及相應(yīng)檢驗(yàn)方法中規(guī)定的檢驗(yàn)單位，用無菌采樣器現(xiàn)場采集5 倍或以上檢驗(yàn)單位的樣品，放入無菌采樣容器內(nèi), 采樣總量應(yīng)滿足微生物指標(biāo)檢驗(yàn)的要求。 2.3.4 食源性疾病及食品安全事件的食品樣品 采樣量應(yīng)滿足食源性疾病診斷和食品安全事件病因判定的檢驗(yàn)要求。 2.4 采集樣品的標(biāo)記 應(yīng)對采集的樣品進(jìn)行及時(shí)、準(zhǔn)確的記錄和標(biāo)記，采樣人應(yīng)清晰填寫采樣單（包括采樣人、采樣地點(diǎn)、時(shí)間

11、、樣品名稱、來源、批號、數(shù)量、保存條件等信息）。 2.5 采集樣品的貯存和運(yùn)輸 采樣后，應(yīng)將樣品在接近原有貯存溫度條件下盡快送往實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。運(yùn)輸時(shí)應(yīng)保持樣品完整。如不能及時(shí)運(yùn)送，應(yīng)在接近原有貯存溫度條件下貯存。3.1 樣品處理 3.1.1 實(shí)驗(yàn)室接到送檢樣品后應(yīng)認(rèn)真核對登記, 確保樣品的相關(guān)信息完整并符合檢驗(yàn)要求。3.1.2 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按要求盡快檢驗(yàn)。若不能及時(shí)檢驗(yàn)，應(yīng)采取必要的措施保持樣品的原有狀態(tài)，防止樣品中目標(biāo)微生物因客觀條件的干擾而發(fā)生變化。 3.1.3 冷凍食品應(yīng)在 45 以下不超過15 min ，或2 5 不超過 18 h 解凍后進(jìn)行檢驗(yàn)。 3.2 檢驗(yàn)方法的選擇 3.2.1 應(yīng)選擇

12、現(xiàn)行有效的國家標(biāo)準(zhǔn)方法。 3.2.2 食品微生物檢驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)中對同一檢驗(yàn)項(xiàng)目有兩個(gè)及兩個(gè)以上定性檢驗(yàn)方法時(shí)，應(yīng)以常規(guī)培養(yǎng)方法為基準(zhǔn)方法。 3.2.3 食品微生物檢驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)中對同一檢驗(yàn)項(xiàng)目有兩個(gè)及兩個(gè)以上定量檢驗(yàn)方法時(shí)，應(yīng)以平板計(jì)數(shù)法為基準(zhǔn)方法。樣品處理（SN 0168 ） 1.1樣品制備1.1.1.以無菌操作取有代表性的樣品盛于滅菌容器內(nèi)。如有包裝，則用75%乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。1.1.2制備樣品勻液1.1.2.1固體或半固體食品:以無菌操作取25 g樣品，放人裝有 225mL稀釋劑的滅菌均質(zhì)杯內(nèi)，于8000 r/min均質(zhì)1-2min，制成1:10的樣品勻液。如樣品均質(zhì)時(shí)間超過2m

13、in，應(yīng)在均質(zhì)杯外加冰水冷卻。4.1.2.2干燥或干粉食品:以無菌操作取25 g樣品，放入裝有225mL稀釋劑和適量玻璃珠的500ml-稀釋瓶中。迅速振搖，將樣品混勻，制成I:10的樣品勻液。振搖時(shí)，幅度為30cm,7s內(nèi)振搖25次，也可用機(jī)械振蕩器振蕩15s代替手搖。4.1.2.3液體食品:用滅菌吸管吸取25 mL樣品，放人裝有225 mL稀釋劑的500 mL稀釋瓶中，按4.1.2.2條中所述方法迅速振搖，制成1:10的樣品勻液。吸取樣品時(shí)，吸管插入液面下不要超過2cm。吸管內(nèi)液體要在2-4s內(nèi)完全排入稀釋劑中。不要在稀釋劑中吹洗吸管。4.2稀釋樣品勻液4.2.1用10mL滅菌吸管準(zhǔn)確吸取10-1的樣品勻液10mL，放入