廣西藤茶提取物TTF體外抗腫瘤作用的實驗研究

1、廣西藤茶提取物TTF體外抗腫瘤作用的實驗研究         06-07-01 10:27:00     作者：楊柯，曾春暉，李玲芝    編輯：studa20 【摘要】  目的  觀察廣西藤茶提取物(簡稱TTF)體外抗腫瘤作用。方法  采用MTT法，觀察TTF及含藥血清對肉瘤細胞(S180)、肝癌細胞(H22)、白血病細胞株(L1210)的細胞毒性及對細胞增殖的抑制作用。結(jié)果  TTF

2、及其含藥血清在體外對S180細胞、H22細胞和L1210細胞均有明顯的抑制作用。結(jié)論  TTF體外具有抑制S180、H22、L1210腫瘤細胞增殖，且對S180細胞株的作用明顯優(yōu)于對H22、L1210的作用。        【關(guān)鍵詞】  TTF；S180、H22、L1210腫瘤細胞株；體外抗腫瘤作用        【Abstract】  Objective  To study the anticancer activities

3、 of TTF in vitro.Methods  The anticancer effect of the TTF in vitro was studied by MTT assay，studied the toxicity and inhibition effect of the TTF to the proliferation of S180 cells，H22 cells and L1210 cells.Results  S180-cells，H22-cells and L1210-cells were obviously inhibited by the TTF

4、in vitro.Conclusion  TTF had the anticancer effect on S180-cells，H22-cells and L1210-cells in vitro.        【Key words】  TTF；S180、H22、L1210 cells；anticancer effect in vitro        藤茶Ampelopis grossedentata(Hand-Mazz)W.T.Wang系葡萄科蛇葡

5、萄屬植物顯齒蛇葡萄的嫩莖葉。主要分布于廣西、云南、廣東、貴州、湖南、湖北、江西、福建等省，為瑤族民間常用的草藥之一。該藥相傳是瑤族王盤王遺傳下來的，至今已有數(shù)百年的應(yīng)用歷史。其性涼，味甘、淡，具有清熱解毒、消腫止痛、祛風(fēng)濕、強筋骨等功效，主治黃疸型肝炎、感冒風(fēng)熱、咽喉腫痛、急性結(jié)膜炎等。藤茶主要含黃酮類化合物，含量約45.52%3，其中的主要活性成分為雙氫楊梅樹皮素、楊梅樹皮素，以雙氫楊梅樹皮素含量最多?，F(xiàn)代藥理研究表明藤茶總黃酮具有抗炎、保肝、降酶，抗血栓、降血糖等作用4，雙氫楊梅樹皮素對體外白血病細胞HL-60、K562、肝癌細胞Bel-7402、人鼻咽癌HK-1細胞、人乳腺癌MCF-7細

6、胞的增殖及體內(nèi)小鼠移植性B16黑色素瘤的生長均有顯著的抑制作用5，6。以上資料提示藤茶具有良好的抗腫瘤作用，故我們對廣西藤茶提取物TTF的抗腫瘤作用進行研究，現(xiàn)報告如下。        1  材料        1.1  細胞  肉瘤S180細胞：廣西中醫(yī)藥研究所惠贈；肝癌H22細胞：廣西民族醫(yī)院惠贈；白血病細胞株L1210：廣西中醫(yī)學(xué)院新藥開發(fā)中心惠贈。以上瘤株于動物身上以腹水形式傳代保種。     &#

7、160;  1.2  動物  昆明種小白鼠(廣西中醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，合格證號：桂醫(yī)動字第11004號)。        1.3  藥物  TTF：由本院中藥化學(xué)教研室提供，為一淡黃色粉末，純度達85%；環(huán)磷酰胺：上海華聯(lián)制藥有限公司，批號：040914。        1.4  試劑  RPMI1640培養(yǎng)基：GIBCO公司產(chǎn)品，批號1243098；新生牛血清(NBS)：杭州四季青公司，批號04022

8、8；MTT：北京拜爾迪生物公司分裝，Amressco 0793；二甲基亞砜(DMSO)：生工生物工程(上海)有限公司，批號54186；注射用生理鹽水：四川奇力制藥有限公司，批號041018。        1.5  器材  二氧化碳培養(yǎng)箱(美國Forma公司)；倒置相差顯微鏡(德國Leica公司)；酶標儀(奧地利Sunrise公司)；吉爾森微量移液器(法國Pipetman公司)；十萬分之一電子天平(德國賽多利斯)；手提式消毒器(上海國營紅衛(wèi)醫(yī)療器械廠)。      

9、  2  方法7與結(jié)果        2.1  S180細胞、H22細胞、L1210細胞體外培養(yǎng)  分別取接種后第8天的瘤源動物，頸椎脫臼處死，用75%酒精浸泡，于超凈工作臺中用一次性注射器抽取1ml腹水置于4ml不含血清的RPMI1640溶液中，滴管沖吸均勻，離心(1000rpm，10min)，重復(fù)2次，最后將細胞重懸于4ml含10%新生牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中，制成細胞懸液。取5l稀釋20倍后加0.4%臺盼藍染色，計數(shù)活細胞，活細胞達95%以上。用含10%新生牛血清的RPMI1640

10、培養(yǎng)液將S180細胞懸液稀釋為5×個/ml，H22細胞、L1210細胞懸液稀釋為1×105個/ml后接種于96孔培養(yǎng)板，100l/孔，平行設(shè)空白對照孔(只加培養(yǎng)液，不加細胞)。接種后置于37，5%CO的二氧化碳培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)24h，然后進行以下體外實驗。        2.2  TTF對S180、H22、L1210細胞毒性實驗(MTT法)  將藥物加入已進行預(yù)培養(yǎng)24h的S180、H22、L1210細胞96孔培養(yǎng)板，共9個濃度，終濃度分別為1000g/ml、500g/ml、250g/ml、125

11、g/ml、62.5g/ml、31.25/ml、15.63g/ml、7.81g/ml、3.91g/ml，100l/孔，每濃度3孔。平行設(shè)細胞對照孔3孔(加100l含10%新生牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液)。加藥后繼續(xù)培養(yǎng)48h，然后加入5mg/ml MTT溶液(生理鹽水配制)，10l/孔。繼續(xù)培養(yǎng)4h。離心(2000rpm，15min)，棄去上清，加入DMSO，200l/孔，輕輕振搖10min，以空白對照孔調(diào)零，在550nm波長處用酶標儀測定OD值。按Reed-Muench法計算IC、，結(jié)果見表1、2、3。 表1  TTF對S180細胞的體外毒性實驗  (n=3)表2  TTF對H22細胞的體外毒性實驗  (n=3)表3  TTF對L1210細胞的體外毒性實驗  (n=3)     結(jié)果顯示，TTF對