通用蛋白質(zhì)分子量規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)參照物(精)

1、十、常用蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)參照物高分子量標(biāo)準(zhǔn)參照 中分子量標(biāo)準(zhǔn)參物 低分子量標(biāo)準(zhǔn)參照蛋白質(zhì)Mr蛋白質(zhì)Mr蛋白質(zhì)Mr肌球蛋白212 000磷酸化酶 B97 400碳酸酐酶31 000半乳糖苷酶116 000牛血清清蛋白66 200大豆胰蛋白酶制劑21 500磷酸化酶 B97 400谷氨酸脫氫酶55 000馬心肌球蛋白16 900牛血清清蛋白66 200卵清蛋白42 700溶菌酶14 400過氧化氫酶57 000醛縮酶40 000肌球蛋白（ F1 ）8 100醛縮酶40 000碳酸酐酶31 000肌球蛋白（ F2 ）6 200大豆胰蛋白酶抑制劑21 500肌球蛋白（ F3 ）2 500溶菌酶14 4

2、00一、層析法常用數(shù)據(jù)表及性質(zhì)一） 離子交換纖維素目前常用的離子交換纖維素列于下表DEAE纖維素形狀長(zhǎng)度（微米）交換當(dāng)量（毫克當(dāng)量/克）蛋白吸附容量 （毫克 / 克）床體積（毫升 / 克）胰島素（ pH8.5 ）牛血清清蛋白（ pH8.5 ）pH6.0pH7.5DE-22DE-23DE-32DE-52CM- 纖維素CM-22CM-23CM-32CM-52改良纖維性 * 同上（除細(xì)粒） 微粒性（干粉） 同上（溶脹）改良纖維性 同上（除細(xì)粒） 微粒性（干粉） 同上（溶脹）12400184002463246312400184002461.0 ±0.11.0 ±0.11.0

3、77;0.11.0 ±0.10.6 ±0.060.6 ±0.061.0 ±0.11.0 ±0.1750750850850溶菌酶(pH5.0)6006001,2601,2604504506606607S球蛋白 ( pH5.0 )1501504004007.78.36.06.0 pH5.07.79.16.86.87.79.16.36.3pH7.57.79.16.76.732463* ：英國(guó) Whatman 廠的型號(hào)，原來有舊型號(hào)如 DE-1 ，為長(zhǎng)纖維性，長(zhǎng)度 1000 微米。還有DE-11 ，纖維性， 50 250 微米，對(duì)牛血清清蛋白的吸附容量

4、僅為 130 毫克 /克。二）聚丙烯酰胺凝膠的技術(shù)數(shù)據(jù)型號(hào)排阻的下限（ Mr ）分級(jí)分離的范圍（ Mr ）膨脹后的床體積 （ mL/g 干凝膠）膨脹所需最少時(shí)間（室溫，小時(shí)）Bio-gel-P-21 6002002 0003.824Bio-gel-P-43 6005004 0005.824Bio-gel-P-64 6001 0005 0008.824Bio-gel-P-1010 0005 00017 00012.424Bio-gel-P-3030 00020 00050 00014.91012Bio-gel-P-6060 00030 00070 00019.01012Bio-gel-P-100

5、100 00040 000100 00019.024Bio-gel-P-150150 00050 000150 00024.024Bio-gel-P-200200 00080 000300 00034.048Bio-gel-P-300300 000100 00040040.048000注：上述各種型號(hào)的凝膠都是親水性的多孔顆粒，在水和緩沖溶液中很容易膨脹，生產(chǎn)廠為Bio-Rad Laboratories,Rich-mond, California, U. S. A.三）瓊脂糖凝膠的技術(shù)數(shù)據(jù)瓊脂糖是瓊脂內(nèi)非離子型的組分，它在0 4 ，pH 49 范圍內(nèi)是穩(wěn)定的。 ）名稱、型號(hào)凝膠內(nèi)瓊脂糖百分 含

6、量（ W/W ）排阻的下限（Mr ）分級(jí)分離的范圍（ Mr ）生產(chǎn)廠商Sagavac 10102.5 ×1051×10 42.5 ×10 5SeravacSagavac 887×1052.5 ×10 47 ×105Laboratories,Sagavac662×1065×10 42 ×106Maidenhead,Sagavac4415 ×10 62×10 515 ×10 6EnglandSagavac22150 ×10 65×10 515 ×10

7、 7Bio-GelA-0.5100.5 ×105<1 ×10 42.5 ×10 6Bio-RadM81.5 ×106<1 ×10 41.5 ×10 6Laboratories,Bio-GelA-1.565×1061×10 45 ×106California,U.S.A.M415 ×10 54×10 415 ×10 6Bio-GelA-5M250 ×10 61×10 550 ×10 6Bio-GelA-15M1150 ×10

8、61×10 6150 ×10 6Bio-GelA-50MBio-GelA-150M四）凝膠過濾層析介質(zhì)的技術(shù)數(shù)據(jù)凝膠過濾介質(zhì)顆粒pH 穩(wěn)定耐壓最快名稱分離范圍大小特性 /應(yīng)用性工作（ Mpa ）流速（ m ）（ cm/h ）Superdex 30<100002444肽類、寡糖、小蛋白等3120.3100Superdex 7530007002444重組蛋白、細(xì)胞色素3120.3100002444單抗、大蛋白3120.3100Superdex2000002040蛋白、肽類、多糖、核酸3120.430Superose 6006000002040蛋白、肽類、寡糖、多糖3120

9、.730Superose 1250005 ×1062575肽類、小蛋白3110.22039Sephacryl1000300000S-100 HR10002575蛋白，如清蛋白3110.22039SephacrylS-200 HR1000002575蛋白、抗體3110.22039SephacrylS-300 HR50002500002575多糖、具延伸結(jié)構(gòu)的大分3110.22039Sephacryl100001.5×子如蛋白多糖、脂質(zhì)體S-400 HR106平均 90巨大分子2120.1300Sepharose 6Fast Flow200008×106平均 90巨大

10、分子如重組乙型肝2120.1250炎表面抗原Sepharose 4Fast Flow100004660200蛋白、大分子復(fù)合物、病490.00410×10 6Sepharose毒、不對(duì)稱分子如核酸和2B6000020×多糖（蛋白多糖）490.00811.510645165蛋白、多糖0.021445165蛋白、多糖Sepharose700004060200490.005154B×蛋白、大分子復(fù)合物、病106Sepharose毒、不對(duì)稱分子如核酸和6B多糖（蛋白多糖）3130.0122645165Sepharose6000020×45165蛋白、多糖3130

11、.0230CL-2B106×106蛋白、多糖100004Sepharose7000040×CL-4B106SepharoseCL-6B6000020×105100004×106凝膠過濾介質(zhì)名稱分離范圍顆粒大?。?m ）特性 /應(yīng)用pH穩(wěn)定性工作干凝膠溶脹體積 （ mL/g ）溶脹最少 平衡時(shí)間（ h）最快 流速 （cm/h）室溫沸水SephadexG-1<700干粉212331250<53.3125SephadexG-1干粉21551000500040120脫鹽及交換 緩 沖液36225用46SephadexG-2干粉

12、215 Coarse10005 000100300脫鹽及交換 緩 沖液36225用46SephadexG-25Medium10005000干粉脫鹽及交換 緩 沖液21622550150用346SephadexG-25 Fine10005000脫鹽及交換 緩 沖液6225干粉 2080用2146SephadexG-235 Superfine15003000小分子蛋白質(zhì)分離62250干粉 1040911SephadexG-5小分子蛋白質(zhì)分離21036225Coarse15003000干粉小分子蛋白質(zhì)分離9110100300SephadexG-50 Medium干粉小分子蛋白質(zhì)分離021911622

13、5SephadexG-515003000050150中等蛋白質(zhì)分離62250 Fine干粉 2080中等蛋白質(zhì)分離021911SephadexG-50 Superfine150030000中等蛋白質(zhì)分離121524372SephadexG-7干粉 1040中等蛋白質(zhì)分離021121524316530008000干粉SephadexG-7040120稍大蛋白質(zhì)分離211520485475 Superfine300070000干粉 1040稍大蛋白質(zhì)分離0152048511SephadexG-10040001.5 ×干粉40120較大蛋白質(zhì)分離021203072521SephadexG-

14、100105干粉 1040較大蛋白質(zhì)分離2118227255.6SuperfineSephadexG-140001105×干粉03040725115040120217252.850003×02025SephadexG-1105干粉 10405021Superfine50001.5×0105干粉SephadexG-240120002150006×干粉 10400SephadexG-21050021Superfine50002.5×0105210210SephadexLH100干粉特別為使用有機(jī)溶劑而設(shè)計(jì)。適合分離脂類、膽固醇、脂肪酸、激素、204

15、 00025106維生素及其他小生物分子。此分離范圍指以酒精為溶劑的分離（ 嗜脂性 ）五）離子交換層析介質(zhì)的技術(shù)數(shù)據(jù)離子交換介質(zhì)名稱最高載量顆粒大?。?m ）特性/ 應(yīng)用pH 穩(wěn) 定 性工作耐壓（ MPa ）最快 流速 （cm/h）SOURCE 15 Q25mg 蛋白1521241800SOURCE 15 S25mg 蛋白1521241800Q Sepharose H.P.70mg BSA24 442120.3150SP SepharoseH.P.55mg 核糖核酸酶24 443120.3150Q Sepharose F.F.120mgHSA45 1652120.2400SP Sepharos

16、eF.F.75mg BSA45 1654130.2400DEAE SepharoseF.F.110mgHSA45 165290.2300CM SepharoseF.F.50mg 核糖核酸酶100 3006130.2300Q SepharoseBig Beads100 3002120.31200 1800SP SepharoseBig Beads60mg BSA干粉40 1204120.31200 1800離子交換 介質(zhì)名稱最高載量顆粒大?。?m ）特性/ 應(yīng)用pH 穩(wěn)定性 工作耐壓 (MPa)最快 流速（ cm/h ）QAESephadex1.2mg 甲狀腺 球蛋白干粉40 純化低分子量蛋 白

17、、多肽、核苷以 及巨大分子 （ Mr>200000 ） ,2100.11475A-2580mgHSA120在工業(yè)傳統(tǒng)應(yīng)用上具有重要作用QAESephadexA-501.2mg 甲狀腺 球蛋白 80mgHSA干粉40 120批量生產(chǎn)和預(yù)處理 用，分離中等大小 的生物分子( 30 200000 )2110.0145SP SephadexC-251.1mg IgG 70mg 牛 羰 合 血紅蛋白 230mg 核糖核 酸酶干粉40 120純化低分子量蛋 白、多肽、核苷以 及巨大分子 ( Mr>200000 ) , 在工業(yè)傳統(tǒng)應(yīng)用上 具有重要作用2100.13475SP SephadexC-

18、508mg IgG110mg 牛羰合 血紅蛋白干粉40 120批量生產(chǎn)和預(yù)處理 用，分離中等大小 的生物分子 (30 200000 )2100.0145DEAESephadexA-251mg 甲狀 腺球蛋白 30mg HAS 140mg a- 乳清 蛋白干粉40 120純化低分子量蛋 白、多肽、核苷以 及巨大分子 ( Mr>200 000 ), 在工業(yè)傳統(tǒng)應(yīng)用上 具有重要作用290.11475DEAESephadexA-502mg 甲狀 腺球蛋白 110mg HSA干粉40 120批量生產(chǎn)和預(yù)處理 用，分離中等大小 的生物分子( Mr>200 000 )， 在工作傳統(tǒng)應(yīng)用上 具有重

19、要作用290.1145CMSephadexC-251.6mg IgG 70mg 牛羰合 血紅蛋白 190mg 核糖核 酸酶干粉40 120純化低分子量蛋 白、多肽、核苷以 及巨大分子 ( Mr>200 000 )， 在工業(yè)傳統(tǒng)應(yīng)用上 具有重要作用6130.13475CM Sephadex C-507mg IgG140mg 牛羰合 血紅蛋白120mg 核糖核 酸酶干粉40 120批量生產(chǎn)和預(yù)處理 用，分離中等大小 的生物分子 (30 200000 )6100.0145十二、常用緩沖溶液的配制方法1 甘氨酸 鹽酸緩沖液（ 0.05mol/L ）X 毫升 0.2 mol/L 甘氨酸 +Y 毫升

20、 0.2 mol/L HCI ，再加水稀釋至 200 毫升pHXYpHXY2.05044.03.05011.42.45032.43.2508.22.65024.23.4506.42.85016.83.6505.0甘氨酸分子量 = 75.07 ，0.2 mol/L 甘氨酸溶液含 15.01 克/ 升。2鄰苯二甲酸 鹽酸緩沖液（ 0.05 mol/L ）X 毫升 0.2 mol/L 鄰苯二甲酸氫鉀 + 0.2 mol/L HCl ，再加水稀釋到 20 毫升pH(20 )XYpH(20 )XY2.254.0703.251.4702.453.9603.450.9902.653.2953.650.597

21、2.852.6423.850.2633.052.022鄰苯二甲酸氫鉀分子量= 204.23 ， 0.2mol/L 鄰苯二甲酸氫溶液含 40.85 克/ 升3磷酸氫二鈉檸檬酸緩沖液pH0.2 mol/L0.1 mol/LpH0.2 mol/L0.1 mol/LNa 2HPO 4檸檬酸Na 2HPO 4檸檬酸（毫升）（毫升）（毫升）（毫升）2.20.4010.605.210.729.282.41.2418.765.411.158.852.62.1817.825.611.608.402.83.1716.835.812.097.913.04.1115.896.012.637.373.24.9415.0

22、66.213.226.783.45.7014.306.413.856.153.66.4413.566.614.555.453.87.1012.906.815.454.554.07.7112.297.016.473.534.28.2811.727.217.392.614.48.8211.187.418.171.834.69.3510.657.618.731.274.89.8610.147.819.150.855.010.309.708.019.450.55Na 2HPO 4分子量 = 14.98 ，0.2 mol/L 溶液為 28.40 克/升。Na 2HPO 4-2H 2O分子量 = 178.

23、05 ，0.2 mol/L 溶液含 35.01 克/升。C4H2O7·H2O分子量 = 210.14 ，0.1 mol/L 溶液為 21.01 克/升。4檸檬酸 氫氧化鈉 - 鹽酸緩沖液pH鈉離子濃度 （ mol/L ）檸檬酸（克）C6H8O7·H2O氫氧化鈉 （克 ）NaOH97%鹽酸（毫升）HCl （濃）最終體積（升） 2.20.2021084160103.10.2021083116103.30.2021083106104.30.202108345105.30.3524514468105.80.45285186105106.50.3826615612610使用時(shí)可以每升

24、中加入 1 克克酚，若最后 pH 值有變化，再用少量 50% 氫氧化鈉溶液或濃鹽酸調(diào)節(jié)，冰箱保存。5檸檬酸 檸檬酸鈉緩沖液（ 0.1 mol/L ）pH0.1 mol/L 檸檬酸 （毫升）0.1 mol/L 檸檬酸鈉（毫升）pH0.1 mol/L 檸檬酸 （毫升）0.1 mol/L 檸檬酸鈉（毫升）3.018.61.45.08.211.83.217.22.85.27.312.73.416.04.05.46.413.63.614.95.15.65.514.53.814.06.05.84.715.34.013.16.96.03.816.24.212.37.76.22.817.24.411.48.6

25、6.42.018.04.610.39.76.61.418.64.89.210.8檸檬酸 C6H8O7·H2O：分子量 210.14 ，0.1 mol/L 溶液為 21.01 克/升。檸檬酸鈉Na 3 C6H5O7·2H 2O ：分子量 294.12 ，0.1 mol/L 溶液為 29.41克/毫升。6 乙酸 乙酸鈉緩沖液（ 0.2mol/L )0.2 mol/L0.3 mol/L0.2 mol/L0.3 mol/LpH(18 )NaAcHAcpH(18 )NaAcHAc（毫升）（毫升）（毫升）（毫升）2.60.759.254.85.904.103.81.208.805.07

26、.003.004.01.808.205.27.902.104.22.657.355.48.601.404.43.706.305.69.100.904.64.905.105.89.400.60Na 2Ac ·3H 2O分子量 = 136.09 ，0.2 mol/L 溶液為27.22 克/升。7磷酸鹽緩沖液1）磷酸氫二鈉 磷酸二氫鈉緩沖液（ 0.2 ）pH0.2 mol/LNa 2HPO 4 （毫升）0.3 mol/L NaH 2PO4 （毫升）pH0.2 mol/LNa 2HPO 4 （毫升）0.3 mol/LNaH 2PO4 （毫升）5.88.092.07.061.039.05.91

27、0.090.07.167.033.06.012.387.77.272.028.06.115.085.07.377.023.06.218.581.57.481.019.06.322.577.57.584.016.06.426.573.57.687.013.06.531.568.57.789.510.56.637.562.57.891.58.56.743.556.57.993.07.06.849.551.08.094.75.36.955.045.0Na 2HPO 4·2H 2O 分子量= 178.05，0.2mol/L溶液為85.61克/升。Na 2HPO 4·2H 2O 分子

28、量= 358.22，0.2mol/L溶液為71.64克/升。Na 2HPO 4·2H 2O 分子量= 156.03，0.2mol/L溶液為31.21克/升。2）磷酸氫二鈉 磷酸二氫鉀緩沖液（1/15mol/L）pHmol/L/15Na 2HPO4（毫升）mol/L/15KH 2PO4（毫升）pHmol/L/15Na 2HPO4（毫升）mol/L/15KH 2PO4（毫升）4.90.109.907.17.003.0020.509.5078.002.005.21.009.007.39.001.0092.008.0089.500.505.93.007.007.79.750.2514.006

29、.0039.900.106.25.005.008.010.00046.46.004.0048.376.648.646.878.116.988Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 178.05 ，1/15M 溶液為 11.876 克/ 升。KH 2PO 4分子量 = 136.09 ， 1/15M 溶液為 9.078 克/升。8 磷酸二氫鉀 氫氧化鈉緩沖液（ 0.05M ）X毫升 0.2M K 2PO4 + Y 毫升 0.2N NaOH 加水稀釋至 29 毫升pH(20 )X ( 毫升 )Y（毫升）pH(20 )X ( 毫升 )Y（毫升）5.850.3727.052.9636.05

30、0.5707.253.5006.250.8607.453.9506.451.2607.654.2806.651.7807.854.5206.852.3658.054.6809巴比妥鈉 -鹽酸緩沖液（ 18 ）pH0.04M 巴比妥0.2V 鹽酸pH0.04M巴比0.2N 鹽酸 （毫鈉溶液妥鈉溶液 升）（毫升）6.810018.48.41005.217.010017.88.61003.827.210016.78.81002.527.410015.39.01001.657.610013.49.21001.137.810011.479.41000.708.01009.399.61000.358.21

31、007.21100巴比妥鈉鹽分子量 =206.18;0.04M 溶液為 8.25 克/ 升10 Tris 鹽酸緩沖液（ 0.05M ，25 ） 50 毫升 0.1M 三羥甲基氨基甲烷（ Tris）溶液與 X 毫升 0.1N 鹽酸混勻后，加水稀釋至 100毫升。pHX（毫升 ）pHX（毫升）7.1045.78.1026.27.2044.78.2022.97.3043.48.3019.97.4042.08.4017.27.5040.38.5014.77.6038.58.6012.47.7036.68.7010.37.8034.58.808.57.9032.08.907.08.0029.2三羥甲基氨

32、基甲烷（ Tris ）HOCH2CH2OHHOCH2 NH2分子量 =121.14;0.1M 溶液為 12.114 克 / 升。 Tris 溶液可從空氣中吸收二氧化碳，使用時(shí)注意將瓶蓋嚴(yán)。11 硼酸 硼砂緩沖液（ 0.2M 硼酸根）pH0.05M 硼 砂（毫升）0.2M 硼 砂（毫升）pH0.05M 硼砂（毫升）0.2M 硼 酸（毫升）7.41.09.08.23.56.57.61.58.58.44.55.57.82.08.08.76.04.08.03.07.09.08.02.0硼砂 Na 2B4O7·H2O,分子量 =381.43;0.05M 溶液（ =0.2M 硼酸根）含 19.0

33、7 克/ 升。硼酸 H2BO3,分子量 =61.84,0.2M 溶液為 12.37 克/ 升。硼砂易失去結(jié)晶水，必須在帶塞的瓶中保存。11 硼酸 - 硼砂緩沖液（ 0.2M 硼酸根）pH0.05M 硼 砂（毫升）0.2M 硼 酸（毫升）pH0.05M 硼砂（毫升）0.2M 硼 酸（毫升）7.41.09.08.23.56.57.61.58.58.44.55.57.82.08.08.76.04.08.03.07.09.08.02.0硼砂 Na 2B4O7·10H 2O,分子量 =381.43;0.05M 溶液（ =0.2M 硼酸根）含 19.07 克 /升。硼酸 H2BO3，分子量 =6

34、1.84, 0.2M 溶液為 12.37 克/升。硼砂 易 失去結(jié)晶水，必須在帶塞的瓶中保存。12 甘氨酸 氫氧化鈉緩沖液（ 0.05M ）X 毫升 0.2M 甘氨酸 +Y 毫升 0.2NnaOH 加水稀釋至 200 毫升pHXYpHXY8.6504.09.65022.48.8506.09.85027.29.0508.810.05032.09.25012.010.45038.69.45016.810.65045.5甘氨酸分子量 =75.07;0.2M 溶液含 15.01 克/ 升。13 硼砂 - 氫氧化鈉緩沖液（ 0.05M 硼酸根）X 毫升 0.05M 硼砂 +Y 毫升 0.2NNaOH 加

35、水稀釋至 200 毫升pHXYpHXY9.3506.09.85034.09.45011.010.05043.09.65023.010.15046.0硼砂 Na 2B4O7·10H 2O,分子量 =381.43;0.05M 溶液為 19.07 克/ 升。14 碳酸鈉 - 碳酸氫鈉緩沖液（ 0.1M ）Ca 2+ 、 Mg 2+ 存在時(shí)不得使用pH0.1MNa 2CO3（毫升 ）0.1MN 2HCO 3（毫升 ）20379.169.409.519.789.9010.1410.2810.5310.838.779.129.409.509.729.9010.0810.2810.57123456

36、789987654321Na 2CO2·10H 2O 分子量 =286.2;0.1M 溶液為 28.62 克/ 升。N 2HCO 3分子量 =84.0;0.1M 溶液為 8.40 克/ 升。15 “PBS ”緩沖液PH7.67.47.27.0H2O100010001000100mlNaCl8.58.58.58.5gNa 2HPO 42.22.22.22.2gNaH 2PO40.10.20.30.4g十三、實(shí)驗(yàn)室中常用酸堿的比重和濃度名稱分子式分子量比重面分濃度 %（ W/W ）當(dāng)量濃度（粗略） N配 1 升 1N 溶液所需 毫升數(shù)鹽酸HCl36.471.1937.212.0841.1

37、835.411.81.1020.06.0硫酸H 2SO498.091.8495.636.0281.1824.86.0硝酸HNO 263.021.4270.9816.0631.4065.314.51.2032.366.1冰乙酸CH 3COOH60.051.0599.517.459乙酸CH 3COOH98.06366.0磷酸H 2PO435.051.7185.015,30,45（ 依反應(yīng)而 定）67（ 以 15N計(jì)）氨水NH 4OH0.9015670.90427.014.3700.9125.013.40.9610.05.6氫氧化NaOH40.01.550.01953鈉溶液十四、硫酸銨飽和度的常用表1調(diào)整硫酸銨溶液飽和度計(jì)算表（ 25 ）硫整硫酸銨終濃度 ,% 飽和度12025303335404550556065707580901000每 1 升溶液加固體硫酸銨的克數(shù)硫0511141719202427313539434751566676酸64466937310026127銨157861113151821252832364044495969初08