醫(yī)療器械無(wú)菌和初始污染菌檢驗(yàn)學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1醫(yī)療器械無(wú)菌和初始醫(yī)療器械無(wú)菌和初始(ch sh)污染菌檢驗(yàn)污染菌檢驗(yàn)第一頁(yè)，共68頁(yè)。 用于檢查要求無(wú)菌的醫(yī)療器械是否無(wú)菌的一種方法。若供試品符合無(wú)菌檢查法的規(guī)定，僅表明了供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。 無(wú)菌試驗(yàn)的目的：將醫(yī)療器械或其浸提液接種(jizhng)于培養(yǎng)基內(nèi)，以檢驗(yàn)供試品是否有細(xì)菌和真菌污染。什么(shn me)是無(wú)菌檢查法？ 第1頁(yè)/共68頁(yè)第二頁(yè)，共68頁(yè)。醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)(jinyn)標(biāo)準(zhǔn)GB/T 14233.2 -2005 醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法 第2部分：生物學(xué)試驗(yàn)(shyn)方法2010年版中國(guó)藥典無(wú)菌檢查法第2頁(yè)/共68頁(yè)第三頁(yè)，共68頁(yè)。

2、醫(yī)療器械無(wú)菌試驗(yàn)檢查(jinch)要點(diǎn)指南（2010版） 無(wú)菌檢驗(yàn)是無(wú)菌醫(yī)療器械產(chǎn)品生產(chǎn)控制過(guò)程中的一項(xiàng)重要內(nèi)容。其檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)結(jié)果判定及檢驗(yàn)人員業(yè)務(wù)能力等因素直接影響產(chǎn)品的質(zhì)量和安全。作為無(wú)菌醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)，其無(wú)菌檢驗(yàn)工作應(yīng)由本企業(yè)獨(dú)立完成(wn chng)。并要求企業(yè)的檢驗(yàn)人員能當(dāng)場(chǎng)操作或口述無(wú)菌檢驗(yàn)的過(guò)程。 第3頁(yè)/共68頁(yè)第四頁(yè)，共68頁(yè)。 培養(yǎng)基: 是人工配制的生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，即用人工的方法將多種物質(zhì)按各種微生物生長(zhǎng)繁殖的需要配成的一種混合營(yíng)養(yǎng)物。微生物: 必須用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能(cinng)觀察到的微小生物。微生物具有一定的形態(tài)與結(jié)構(gòu),并能在適宜的環(huán)境中迅速地生長(zhǎng)和繁殖

3、,如細(xì)菌、病毒、真菌等。無(wú)菌：是指某一物體或某一環(huán)境中不含有活的微生物。凡能殺滅物體中所有活的微生物的作用稱(chēng)為滅菌。第4頁(yè)/共68頁(yè)第五頁(yè)，共68頁(yè)。 細(xì)菌：為單細(xì)胞微生物,其細(xì)胞分化不完善，無(wú)完整(wnzhng)細(xì)胞核及核膜、核仁，直徑一般為1m 10m。第5頁(yè)/共68頁(yè)第六頁(yè)，共68頁(yè)。 真菌：為多細(xì)胞或單細(xì)胞微生物，其細(xì)胞分化完善，有細(xì)胞核和各種細(xì)胞器，故易在體外生長(zhǎng)繁殖，直徑(zhjng)一般為10m 100m。第6頁(yè)/共68頁(yè)第七頁(yè)，共68頁(yè)。醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)所需設(shè)備(shbi) 超凈工作臺(tái)第7頁(yè)/共68頁(yè)第八頁(yè)，共68頁(yè)。醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)所需設(shè)備(shbi)恒溫(hngwn)培養(yǎng)箱

4、（至少2臺(tái)）第8頁(yè)/共68頁(yè)第九頁(yè)，共68頁(yè)。醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)所需設(shè)備(shbi)壓力(yl)蒸汽滅菌器第9頁(yè)/共68頁(yè)第十頁(yè)，共68頁(yè)。醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)所需設(shè)備(shbi)電熱(dinr)干燥箱第10頁(yè)/共68頁(yè)第十一頁(yè)，共68頁(yè)。醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)所需設(shè)備(shbi)集菌儀第11頁(yè)/共68頁(yè)第十二頁(yè)，共68頁(yè)。醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)所需設(shè)備(shbi)生物安全柜:（從試驗(yàn)安全性考慮，建議陽(yáng)性(yngxng)對(duì)照試驗(yàn)使用生物安全柜）第12頁(yè)/共68頁(yè)第十三頁(yè)，共68頁(yè)。醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)所需設(shè)備(shbi)電子天平第13頁(yè)/共68頁(yè)第十四頁(yè)，共68頁(yè)。醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)所需設(shè)備(shbi)光學(xué)(gung

5、xu)顯微鏡第14頁(yè)/共68頁(yè)第十五頁(yè)，共68頁(yè)。醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)所需設(shè)備(shbi)過(guò)濾裝置(zhungzh)（無(wú)油真空泵、濾杯、濾頭、濾瓶、微孔濾膜、夾子） 第15頁(yè)/共68頁(yè)第十六頁(yè)，共68頁(yè)。環(huán)境及人員(rnyun)要求第16頁(yè)/共68頁(yè)第十七頁(yè)，共68頁(yè)。無(wú)菌檢查法 環(huán)境(hunjng)要求第17頁(yè)/共68頁(yè)第十八頁(yè)，共68頁(yè)。無(wú)菌檢查法 環(huán)境(hunjng)要求第18頁(yè)/共68頁(yè)第十九頁(yè)，共68頁(yè)。TSA瓊脂平皿在30 35培養(yǎng)(piyng)48h證明無(wú)菌取3只放無(wú)菌操作臺(tái)或超凈工作臺(tái)平均位置打開(kāi)上蓋，暴露30min后蓋好3只培養(yǎng)皿上生長(zhǎng)的菌落數(shù)平均應(yīng)不超過(guò)1個(gè)無(wú)菌試驗(yàn)過(guò)程中也應(yīng)檢

6、查空氣中的菌落數(shù)，方法要求同上第19頁(yè)/共68頁(yè)第二十頁(yè)，共68頁(yè)。無(wú)菌檢查法 試驗(yàn)(shyn)前準(zhǔn)備 器具滅菌：與供試液(sh y)接觸的所有器具應(yīng)采用可靠方法滅菌，置壓力蒸汽滅菌器內(nèi)12130min，或置電熱干燥箱內(nèi)1602h。 培養(yǎng)基：可按藥典中的處方制備培養(yǎng)基，亦可使用按該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2 25，一般在3周內(nèi)使用。第20頁(yè)/共68頁(yè)第二十一頁(yè)，共68頁(yè)。第21頁(yè)/共68頁(yè)第二十二頁(yè)，共68頁(yè)。第22頁(yè)/共68頁(yè)第二十三頁(yè)，共68頁(yè)。第23頁(yè)/共68頁(yè)第二十四頁(yè)，共68頁(yè)。需氧菌生長(zhǎng)(shngzhng)厭氧菌生長(zhǎng)第24

7、頁(yè)/共68頁(yè)第二十五頁(yè)，共68頁(yè)。第25頁(yè)/共68頁(yè)第二十六頁(yè)，共68頁(yè)。第26頁(yè)/共68頁(yè)第二十七頁(yè)，共68頁(yè)。第27頁(yè)/共68頁(yè)第二十八頁(yè)，共68頁(yè)。培養(yǎng)基的適用性檢查(jinch)第28頁(yè)/共68頁(yè)第二十九頁(yè)，共68頁(yè)。培養(yǎng)基的適用性檢查(jinch)第29頁(yè)/共68頁(yè)第三十頁(yè)，共68頁(yè)。培養(yǎng)基應(yīng)符合(fh)無(wú)菌性檢查及靈敏度檢查的要求。檢查可在供試品的無(wú)菌檢查前或與供試品的無(wú)菌檢查同時(shí)進(jìn)行。靈敏度檢查所用菌種（藥典2010版規(guī)定）金黃色葡萄球菌銅綠(tngl)假單胞菌枯草芽孢桿菌生孢梭菌白色念珠菌黑曲霉分別(fnbi)接種各菌種新鮮培養(yǎng)物至相應(yīng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，將培養(yǎng)物用0.9%無(wú)菌氯化鈉

8、溶液制成菌懸液（濃度小于100cfu/mL）硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（12mL）9支：分別接種小于100cfu的金葡、銅綠、枯草、生孢各2支，另一支不接種做空白對(duì)照，培養(yǎng)3天改良馬丁培養(yǎng)基（9mL） 5支：分別接種小于100cfu的白念、黑曲霉各2支，另1支不接種做空白對(duì)照，培養(yǎng)5天逐日觀察結(jié)果：空白對(duì)照管應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，若加菌的培養(yǎng)基管均生長(zhǎng)良好，則靈敏度符合規(guī)定。第30頁(yè)/共68頁(yè)第三十一頁(yè)，共68頁(yè)。方法(fngf)驗(yàn)證試驗(yàn)第31頁(yè)/共68頁(yè)第三十二頁(yè)，共68頁(yè)。方法(fngf)驗(yàn)證試驗(yàn)第32頁(yè)/共68頁(yè)第三十三頁(yè)，共68頁(yè)。方法(fngf)驗(yàn)證試驗(yàn)第33頁(yè)/共68頁(yè)第三十四頁(yè)，共68頁(yè)。方法驗(yàn)

9、證(ynzhng)試驗(yàn)：薄膜過(guò)濾法第34頁(yè)/共68頁(yè)第三十五頁(yè)，共68頁(yè)。方法驗(yàn)證所用菌種（藥典2010版規(guī)定）金黃色葡萄球菌大腸埃希菌枯草芽孢(y bo)桿菌生孢梭菌白色念珠菌黑曲霉分別接種各菌種新鮮培養(yǎng)(piyng)物至相應(yīng)培養(yǎng)(piyng)基中培養(yǎng)(piyng)，將培養(yǎng)(piyng)物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成菌懸液（濃度小于100cfu/mL）硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基8支：分別接種小于100cfu的金葡、大腸(dchng)、枯草、生孢各2支，其中1管接入每支培養(yǎng)基規(guī)定的供試品接種量，另1管作為對(duì)照，培養(yǎng)3天。改良馬丁培養(yǎng)基4支：分別接種小于100cfu的白念、黑曲霉各2支，其中1管接入每

10、支培養(yǎng)基規(guī)定的供試品接種量，另1管作為對(duì)照，培養(yǎng)5天。方法驗(yàn)證試驗(yàn)：直接接種法第35頁(yè)/共68頁(yè)第三十六頁(yè)，共68頁(yè)。方法(fngf)驗(yàn)證試驗(yàn)：結(jié)果判斷第36頁(yè)/共68頁(yè)第三十七頁(yè)，共68頁(yè)。供試品的無(wú)菌檢查(jinch)第37頁(yè)/共68頁(yè)第三十八頁(yè)，共68頁(yè)。供試品的無(wú)菌檢查(jinch) 在100級(jí)超凈臺(tái)內(nèi)，酒精燈火焰周?chē)?，以無(wú)菌操作法將規(guī)定量的供試品分別接種至含硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（不少于15ml/管）和改良馬丁培養(yǎng)基（不少于10ml/管）的容器中。 正確的無(wú)菌操作，既不能引入外來(lái)菌污染培養(yǎng)物造成假陽(yáng)性(yngxng)，也要注意接觸供試品的試驗(yàn)用具溫度不可過(guò)高以免將可能存在的菌燙死。第3

11、8頁(yè)/共68頁(yè)第三十九頁(yè)，共68頁(yè)。供試品的無(wú)菌檢查(jinch)第39頁(yè)/共68頁(yè)第四十頁(yè)，共68頁(yè)。無(wú)菌檢查法-直接(zhji)接種法供試品數(shù)量：同一批號(hào)3個(gè) 11個(gè)單位供試品 優(yōu)先(yuxin)采用將供試品或其有代表性的各部分直接投放入培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)。如：棉簽、導(dǎo)尿包中的導(dǎo)尿管、注射器中的液體等第40頁(yè)/共68頁(yè)第四十一頁(yè)，共68頁(yè)。無(wú)菌檢查法-薄膜過(guò)濾法第41頁(yè)/共68頁(yè)第四十二頁(yè)，共68頁(yè)。水溶液供試品取規(guī)定量的供試液，直接過(guò)濾，或混合(hnh)至含適量稀釋液的無(wú)菌容器內(nèi)，混勻，立即過(guò)濾。供試液經(jīng)薄膜過(guò)濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100ml，總沖洗量不得超過(guò)100

12、0mL，以免(ymin)濾膜上微生物受損傷。無(wú)菌檢查法-薄膜過(guò)濾法沖洗后分別將100mL硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基加入相應(yīng)(xingyng)的濾筒內(nèi)，培養(yǎng)。第42頁(yè)/共68頁(yè)第四十三頁(yè)，共68頁(yè)。無(wú)菌檢查法 培養(yǎng)(piyng)及觀察 上述含培養(yǎng)基的容器按規(guī)定的溫度培養(yǎng)14天。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否(sh fu)有菌生長(zhǎng)。如在加入供試品后或在培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無(wú)微生物生長(zhǎng)，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中，細(xì)菌培養(yǎng)2天、真菌培養(yǎng)3天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否(sh fu)再出現(xiàn)渾濁；或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否(sh f

13、u)有菌。第43頁(yè)/共68頁(yè)第四十四頁(yè)，共68頁(yè)。 若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；若供試品管中任何(rnh)一管顯渾濁并確證有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，即生長(zhǎng)的微生物非供試品所含。 試驗(yàn)若經(jīng)確認(rèn)無(wú)效，應(yīng)重試。重試時(shí)，重新取同量供試品，依法檢查，若無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；若有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定。 陽(yáng)性對(duì)照管應(yīng)生長(zhǎng)良好，陰性對(duì)照不得有菌生長(zhǎng)。否則，試驗(yàn)(shyn)無(wú)效。無(wú)菌檢查法 結(jié)果(ji gu)判斷第44頁(yè)/共68頁(yè)第四十五頁(yè)，共68頁(yè)。 當(dāng)符合下列至少一個(gè)條件時(shí)，方可判試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效： （1）無(wú)菌檢查試驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)

14、境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無(wú)菌檢查法的要求； （2）回顧無(wú)菌試驗(yàn)過(guò)程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染(wrn)的因素。 （3）供試品管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無(wú)菌試驗(yàn)中所使用的物品和（或）無(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。無(wú)菌檢查法 結(jié)果(ji gu)判斷第45頁(yè)/共68頁(yè)第四十六頁(yè)，共68頁(yè)。 試驗(yàn)(shyn)若經(jīng)確認(rèn)無(wú)效，應(yīng)重試。重試時(shí)，重新取同量供試品，依法檢查，若無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；若有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定。 無(wú)菌檢查法 結(jié)果(ji gu)判斷第46頁(yè)/共68頁(yè)第四十七頁(yè)，共68頁(yè)。醫(yī)療器械無(wú)菌試驗(yàn)檢查要點(diǎn)(yodin)指南（2010版） 由于無(wú)菌檢驗(yàn)時(shí)間跨度較長(zhǎng)，因此過(guò)程的記錄應(yīng)

15、能夠完整體現(xiàn)試驗(yàn)的全過(guò)程，對(duì)于在試驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)的各種情況，均應(yīng)在記錄中客觀(kgun)反映。第47頁(yè)/共68頁(yè)第四十八頁(yè)，共68頁(yè)。直接接種法試驗(yàn)(shyn)結(jié)果 第48頁(yè)/共68頁(yè)第四十九頁(yè)，共68頁(yè)。薄膜過(guò)濾法試驗(yàn)(shyn)結(jié)果 第49頁(yè)/共68頁(yè)第五十頁(yè)，共68頁(yè)。無(wú)菌檢查法 判定(pndng)第50頁(yè)/共68頁(yè)第五十一頁(yè)，共68頁(yè)。第51頁(yè)/共68頁(yè)第五十二頁(yè)，共68頁(yè)。試驗(yàn)報(bào)告第52頁(yè)/共68頁(yè)第五十三頁(yè)，共68頁(yè)。初始(ch sh)污染菌的檢驗(yàn)初始污染菌：產(chǎn)品消毒、滅菌前的細(xì)菌總數(shù)，可判明檢品受細(xì)菌污染的程度(chngd)以及生產(chǎn)單位所用的原料、工具設(shè)備、工藝流程、生產(chǎn)人員的衛(wèi)生

16、狀況，是對(duì)檢品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)的綜合依據(jù)。第53頁(yè)/共68頁(yè)第五十四頁(yè)，共68頁(yè)。產(chǎn)品種類(lèi)產(chǎn)品種類(lèi)微生物指標(biāo)微生物指標(biāo)初始污染菌初始污染菌cfu/g細(xì)菌菌落總數(shù)細(xì)菌菌落總數(shù)cfu/g或或cfu/mL大腸菌群大腸菌群致病性致病性化膿菌化膿菌真菌菌落總數(shù)真菌菌落總數(shù)cfu/g或或cfu/mL口罩口罩 普通級(jí)普通級(jí) 消毒級(jí)消毒級(jí)10 00020020不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出100不得檢出不得檢出尿布等尿布等 普通級(jí)普通級(jí) 消毒級(jí)消毒級(jí)10 00020020不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出100不得檢出不得檢出注：致病性化膿菌指綠膿

17、桿菌(l nn n jn)、金黃色葡萄球菌與溶血性鏈球菌。第54頁(yè)/共68頁(yè)第五十五頁(yè)，共68頁(yè)。初始(ch sh)污染菌的檢驗(yàn)準(zhǔn)備：平皿洗凈、烘干；牛皮紙包好滅菌 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基配制、滅菌。步驟：采樣(ci yn)，供試液制備，培養(yǎng)，菌落計(jì)數(shù) 在100級(jí)凈化條件下用無(wú)菌方法打開(kāi)至少3個(gè)包裝； 從每個(gè)包裝中取樣，準(zhǔn)確稱(chēng)取10g1g樣品；剪碎后加入200mL無(wú)菌生理鹽水(shnglynshu)中，充分混勻。 液體產(chǎn)品用原液直接做樣液。第55頁(yè)/共68頁(yè)第五十六頁(yè)，共68頁(yè)。初始(ch sh)污染菌的檢驗(yàn)取上清液共接種5個(gè)平皿，每個(gè)平皿中加入(jir)1mL供試液用冷卻至45左右的熔化的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培

18、養(yǎng)基（15 20）mL，倒入每個(gè)平皿內(nèi)混合(hnh)均勻。待瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置35 2 培養(yǎng)48h后，計(jì)算平板上的菌落數(shù)。稀釋度 5細(xì)菌菌落總數(shù)=5塊平板上的細(xì)菌菌落總數(shù)（cfu/g或cfu/mL）如：取10g樣品入200mL生理鹽水中，則稀釋20倍當(dāng)菌落數(shù)在100以內(nèi)，按實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時(shí)采用二位有效數(shù)字。第56頁(yè)/共68頁(yè)第五十七頁(yè)，共68頁(yè)。初始(ch sh)污染菌的檢驗(yàn)計(jì)數(shù)方法：將平板置菌落計(jì)數(shù)器或從平板的背面直接以肉眼用標(biāo)記筆點(diǎn)計(jì)，以投射光襯以暗色背景，仔細(xì)觀察，計(jì)數(shù)。必要時(shí)可以借助于放大鏡、菌落計(jì)數(shù)器。菌落特征： 形態(tài)特征：常為白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、淡黃色。 邊緣

19、整齊或不整齊，表面(biomin)有光滑、粗糙，皺褶、突起或扁平。 大小差異很大。第57頁(yè)/共68頁(yè)第五十八頁(yè)，共68頁(yè)。初始(ch sh)污染菌的檢驗(yàn) 如果樣品菌落總數(shù)超過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，應(yīng)將留存的復(fù)檢樣品依前法復(fù)測(cè)2次， 2次結(jié)果平均值都達(dá)到本標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，則判定(pndng)被檢樣品合格；其中有任何一次結(jié)果平均值超過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，則判定(pndng)被檢樣品不合格。第58頁(yè)/共68頁(yè)第五十九頁(yè)，共68頁(yè)。醫(yī)療器械的無(wú)菌和初始污染菌檢驗(yàn)(jinyn)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)GB/T 14233.2 -2005 醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法 第2部分：生物學(xué)試驗(yàn)方法2010年版中國(guó)藥典無(wú)菌檢查法GB 15979-2002 一次性使用(shyng)衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T 15980-1995 一次性使用(shyng)醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)YY 0033-2000 無(wú)菌醫(yī)療器具生產(chǎn)管理規(guī)范第59頁(yè)/共68頁(yè)第六十頁(yè)，共68頁(yè)。（9 9）潔凈