亞抑菌濃度抗生素對(duì)銅綠假單胞菌生物膜形成的影響

1、. 青島大學(xué)碩士學(xué)位論文亞抑菌濃度抗生素對(duì)銅綠假單胞菌生物膜形成的影響姓名：李俊娟申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（呼吸病學(xué)）指導(dǎo)教師：蔣捍東20110526.; 亞抑菌濃度抗生素對(duì)銅綠假單胞菌生物膜形成的影響目的：研究四種抗生素在不同亞抑菌濃度下對(duì)銅綠假單胞菌生物膜形成的影環(huán)丙沙星和阿米卡星的諏街峙嘌芯和痩。靜態(tài)造膜結(jié)果：在校婷顧嘏時(shí)能抑制生物膜的形成，而在濃度時(shí)促進(jìn)生物膜的形成；在培養(yǎng)基中，阿奇霉素濃度為時(shí)均促進(jìn)銅綠假單胞茵生物膜形成。亞抑菌濃度的頭孢他啶和環(huán)丙沙星在蚅嘌芯種粕錟緯桑話卓竊贛培養(yǎng)基中濃度為關(guān)鍵詞：銅綠假單胞菌，生物膜，阿奇霉素，亞抑菌濃度 ， 琫 疘琧簆， 引言引言在人類感染

2、疾病中有的非社區(qū)獲得性感染與生物膜相關(guān)】。很多細(xì)菌如銅 材料和方法第一章論文菌株來源頭孢他啶：葛蘭素史克產(chǎn)品戊二醛蝦硫代硫酸鈉無水物本翹嘶邢薰無水氯化鈣奇杞;邢薰硝酸銀嘌粢嘶嫌邢拊鶉喂對(duì)苯二酚氈救呋喃酮細(xì)菌培養(yǎng)箱氈恒溫?fù)u床媯醫(yī)用硅膠片鉦謔辛V諼耙迪鶿蕓萍加邢薰 青島大學(xué)碩士學(xué)位論文先將菌種取出于固體培養(yǎng)平板劃線，置于溫箱內(nèi)過夜培養(yǎng)，后挑取單菌落取菌液用酶標(biāo)儀測(cè)值，稀釋菌液至在孔內(nèi)混勻后取出尤氳煸群笤偃轉(zhuǎn)至第校來渭又戀趖。先將菌種取出于固體培養(yǎng)平板上劃線，置于溫箱內(nèi)過夜培養(yǎng)，后挑取單菌用滅菌水新配置四種抗生素，并加入到上述四個(gè)試管中，使得阿奇霉素、頭孢他啶、環(huán)丙沙星及阿米卡星的終濃度均為。做好標(biāo)

3、記挑取單菌落接種子四個(gè)試管中，于恒溫?fù)u床中培養(yǎng)分別于，菌液測(cè)定值描繪細(xì)菌生長曲線微管靜置造膜，繪制生物膜生長時(shí)間曲線離心管鬮亂補(bǔ)培養(yǎng)用對(duì)菌液進(jìn)行適當(dāng)稀釋； 材料和方法孔板靜置造膜，繪制生物膜生長時(shí)間曲線將孔板倒扣于吸水紙上，將水分吸干；新配置四種抗生素，并于管中倍比稀釋至一系列的亞抑菌濃度在孔板中第入已倍比稀釋的抗生素好靠準(zhǔn)尤。每列為一個(gè)亞抑菌濃度，每個(gè)濃度有鮒馗礎(chǔ)贚蚆培養(yǎng)基中分別造膜。其中在加入阿奇霉素的銅綠假單胞菌造膜中，另外測(cè)定阿奇霉素濃度為和試管內(nèi)靜態(tài)造膜 青島大學(xué)碩士學(xué)位論文用滅菌水新配制阿奇霉素，在用雙蒸水多次充分漂洗，去掉浮游菌。蒸餾水清洗蒸餾水清洗跛嵋芤悍從 蒸餾水漂洗蒸餾水漂

4、洗 結(jié)果第二節(jié)結(jié)果環(huán)丙沙星及阿米卡星在兩種培養(yǎng)基中一致，分別為痩及。生長曲線測(cè)定在培養(yǎng)基培養(yǎng)時(shí)，四種抗生素阿奇霉素、頭孢他啶、環(huán)丙沙星和阿米乏至三蘭麓麓微管生物膜生長曲線測(cè)定 青島大學(xué)碩士學(xué)位論文微圖疚狿裝逕錟氖奔淝摺門嘌狹髓培養(yǎng)基?？v 時(shí)，阿奇霉素濃度為時(shí)的硅膠片生物膜形成最多，空白組居中，不同濃度的阿奇霉素對(duì)銅綠假單胞菌生物膜形成的影響：在嘌校婷顧嘏任、及時(shí)生物膜形成量少于空白對(duì)照組，與空白對(duì)照組比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義注：·表示與空白對(duì)照組比較， 青島大學(xué)碩士學(xué)位論文物膜形成量多于空白對(duì)照組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，任，鏼跏對(duì)亞抑菌濃度的環(huán)丙沙星星對(duì)銅綠假單胞菌生物膜形成的影響：、時(shí)生物

5、膜形成量均少于空白對(duì)照組，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，尺迪曇 虹巍蜼亞抑菌濃度的阿米卡星對(duì)生物膜形成的影響：時(shí)所形成的生物膜量明顯少于空白對(duì)照組，與空白對(duì)照組比較差別有生物膜形成量明顯多于空白對(duì)照組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義釵迪曇 青島大學(xué)碩士學(xué)位論文 討論第三節(jié)討論并且極易形成生物膜。在呼吸科，肺部結(jié)構(gòu)病變的患者往往會(huì)伴有的感染，如肺，、支氣管擴(kuò)張及慢性阻塞性肺部疾病等患者往往存在銅綠假單胞菌的持續(xù)的慢性感染，常常可形成銅綠假單胞菌生物膜。細(xì)菌生物膜是指在多聚糖、蛋白質(zhì)和核酸等組成的基質(zhì)內(nèi)相互粘連粘附于物體表面的細(xì)菌群體。細(xì)菌生物膜一旦形成，固著態(tài)的耐藥性將在原來浮游態(tài)的基礎(chǔ)上增加數(shù)倍至數(shù)千倍，常規(guī)藥敏試驗(yàn)敏感的藥

6、物可能已經(jīng)耐藥，導(dǎo)致感染難以清除。極易形成生物膜，這也是導(dǎo)致臨床上抗茵治療失敗的重要原因之一。是近年來感染領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)，主要集中于其耐藥機(jī)制的研究：如可產(chǎn)生抗生素滅活酶或抗生素修飾酶，如一內(nèi)酰胺酶、氨基糖苷鈍化酶等；改變抗菌藥物作琇嘌信嘌鋇腗值為痩?？梢姴煌囵B(yǎng)條件下浮游菌對(duì) 青島大學(xué)碩士學(xué)位論文的形成，對(duì)于其機(jī)制尚不明確。膜結(jié)果亦提示亞抑菌濃度的阿奇霉素能促進(jìn)生物膜的形成。亞抑菌濃度抗生素對(duì)細(xì)菌生物膜形成的調(diào)控隨抗生素種類、濃度、作用時(shí)間和菌種 討論依據(jù)本實(shí)驗(yàn)條件，亞抑菌濃度的阿奇霉素能抑制浮游菌的生長，但是卻促株生物膜的形成過程如下：發(fā)現(xiàn)菌株在左右即開始在玻片表面黏附聚集，在培養(yǎng)熳笥沂保

7、皇淺醪叫緯繕錟天時(shí)基本具備生物膜三維結(jié)構(gòu)，此后生物膜逐漸達(dá)到平衡狀態(tài)。但在本實(shí)驗(yàn)在孔板、玻璃試管內(nèi)及硅膠片靜置造膜時(shí)，的阿奇霉素與空白對(duì)照組比較抑制了的胞外多糖的產(chǎn)生。故推斷在本實(shí)驗(yàn)中培 青島大學(xué)碩士學(xué)文論文對(duì)生物膜的促進(jìn)作用，并非通過激活發(fā)揮主要作用的，這也是與眾多研究在嘌信嘌保繁承橋任狹時(shí)均可以抑制生物膜 大，故本實(shí)驗(yàn)選用了倍比稀釋的方法，這樣就不可避免導(dǎo)致兩個(gè)濃度間距太大。但是目前關(guān)于亞抑菌濃度頭孢他啶和環(huán)丙沙星對(duì)銅綠假單胞菌生物膜的影響研究并不且根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出：亞抑菌濃度阿奇霉素促進(jìn)生物膜的形成；而亞抑菌濃度的頭孢他啶、環(huán)丙沙星及阿米卡星對(duì)生物膜的影響與濃度和培養(yǎng)基有密切的關(guān)系。對(duì)于

8、亞抑菌濃度抗生素對(duì)銅綠假單胞菌生物膜的影響的機(jī)制尚不清楚，尤其是大環(huán)內(nèi)酯類阿奇霉素所表現(xiàn)的促進(jìn)生物膜形成的作用，本實(shí)驗(yàn)可以除系統(tǒng)引起的作用，對(duì)于其具體機(jī)制需要進(jìn)一步探討。 霉素的敏感性亦不同。件密切相關(guān) 附圖空白圖婷顧嘏任杞浩炷峁放大倍數(shù)醅二··二、：了一。懈。 青島大學(xué)碩士學(xué)位論文、：冀。骸鬻蘩鎏、，“：鬻遂摹攀。：建摹琷茹裫鬻箋一 口痩痩 ： 甈琈琣甂瓸，瓵甆珺：·：珿甒；鰨瓸簃 ；：銠齲炊嘌圓煌竿碳俚錟舾行緣撓跋靃山東醫(yī)藥，甴海痺產(chǎn)産痯狟琓： ·。 ，： 青島大學(xué)碩士學(xué)位論文志，：成的動(dòng)態(tài)觀察諶醬笱：，：，甁琍觶琍 ，】，：；珻琍，琘琕 珺 ： 瓾

9、珼 銅綠假單胞菌生物膜的治療進(jìn)展銅綠假單胞菌為一種機(jī)會(huì)性致病菌，它是院內(nèi)感染四大條件致病菌之一，可引起呼吸道感染、敗血癥、骨髓炎、心內(nèi)膜炎、牙髓炎及尿路感染等各種疾病。該菌耐藥性較強(qiáng)，耐藥機(jī)制復(fù)雜，并且極易形成生物膜。隨著各種侵入性檢查、體內(nèi)人工留置物的廣泛使用，如氣管插管、中心靜脈置管、導(dǎo)尿管、心內(nèi)起搏器及人工關(guān)節(jié)等，銅綠假單胞菌的感染日趨增多，常常會(huì)引起生物膜相關(guān)感染。所謂生物膜是指附著在有生命或無生命的物體表面的由細(xì)菌自身產(chǎn)生的多聚基少，可能已處于解聚階段。階段，發(fā)現(xiàn)有如下變異：一種為鞭毛和其他移形性變異，導(dǎo)致細(xì)菌不能很好的粘附于異物表面；另一種為突變體無法生成發(fā)樣附屬物一菌毛，使細(xì)菌只

10、能在物質(zhì)表面形成單層細(xì)菌而不能形成微生物菌落。這些都可能影響生物被膜形成的最初粘附階段。細(xì)菌粘附到異物表面后同時(shí)會(huì)吸引周圍同種細(xì)菌并增殖為有組織的小菌落。小菌落間相互傳遞化學(xué)信號(hào)分子嘲，即基因表達(dá)蛋白質(zhì)等物質(zhì)生成，在生長繁殖的同時(shí)分泌大量的胞外基質(zhì)粘附單個(gè)細(xì)胞而形成微生物菌落，基質(zhì)隨著生物被膜的成熟而增加，主要成分包括胞外多糖、蛋白質(zhì)、死細(xì)胞、磷脂等，其中以胞合成的基因在生物被膜形成的過程中上調(diào)，在生物膜菌和浮游菌中有多達(dá)種不同 青島大學(xué)碩士學(xué)位論文和表面擴(kuò)散，具體調(diào)控機(jī)制目前尚不清楚。細(xì)菌一旦形成生物膜會(huì)造成耐藥性顯著增加，抗生素不易滲透，細(xì)菌表面抗原位點(diǎn)被覆蓋等后果，繼而表現(xiàn)為耐藥和抗吞噬

11、等特點(diǎn)。生物膜與浮游菌之間的區(qū)主要?jiǎng)e在于：在生物膜內(nèi)細(xì)菌密度高于浮游狀態(tài)，導(dǎo)致生物膜內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣缺乏，同時(shí)代謝產(chǎn)物、廢物和細(xì)菌分泌的一些因子的水平抗生素為阿奇霉素、紅霉素、羅紅霉素及克拉霉素等。理論上大環(huán)內(nèi)酯類抗生素不一、體外實(shí)驗(yàn)中亞抑菌濃度大環(huán)內(nèi)酯類藥物對(duì)生物膜的影響的形成，其機(jī)制如下： 是通過抑制胞外的多糖來抑制生物膜的形成。粘液菌株胞外多糖是藻酸鹽，而非粘液多糖較對(duì)照組減少了。萵蝴研究了從患者痰中分離的株株粘液其粘附的抑制作用沒有完全的相關(guān)性。因?yàn)榘⑵婷顾貙?duì)非粘液菌株為種迫禾甯杏琎系統(tǒng)，減少信號(hào)分子的產(chǎn)生。 青島大學(xué)碩士學(xué)位論文基因組成，編碼猘卜加到一定的濃度，分別與和蛋白特異性結(jié)合

12、并激活轉(zhuǎn)錄，從而調(diào)節(jié)一系列然虻謀澩鋃偈溝緣鞍酌浮钚緣鞍酌浮舛舅谹等生成；察生物膜的形成。旌笠吧蚉可形成成較厚、有孔狀通道的成熟生物膜結(jié)構(gòu)，、基因缺陷型黏附、聚集形成明顯稀薄的早期生物膜結(jié)構(gòu)?？梢娀蛉毕菘捎绊戙~綠假單胞菌體外形成生物膜的能呈薄膜狀，均顯著吧薄于野生型菌株。這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)證明了群體感應(yīng)系統(tǒng)在生物膜形厚于突變菌株，突變菌株生物膜厚度僅為野生型生物膜的，也證明了群體感應(yīng)系統(tǒng)基因缺陷明顯影響生物膜的分化成熟過程。并且盯突變株形成的突變菌株在生物膜形成和對(duì)抗生素的敏感性方面與野生株存在明顯差異。擾研究表明大環(huán)內(nèi)酯類抗生素能抑制的系統(tǒng)，抑制信號(hào)感應(yīng)分 發(fā)揮了的作用。患者中分離的在體外可以表達(dá)上

13、述兩種嘲，從患者痰中也可檢測(cè)得到口副，對(duì)于的研究經(jīng)歷了一個(gè)不斷認(rèn)識(shí)的過程。一開始，萂叫研究了例，并且信號(hào)分子系統(tǒng)在患者銅綠的感染疾病中，對(duì)在生物膜內(nèi)缺氧的環(huán)境中生存發(fā)揮了重要的作用矣蒀籋控制表達(dá)的鼠李糖脂在維持生物膜結(jié)構(gòu)方面是必需的“射。以上這些發(fā)現(xiàn)都提示了在生物膜形成中的作用比之前想象的重要的多，主要是之前的研究所用的菌株為其生成的能力得到破壞，故而得出上述結(jié)論。游銑擅傅謀澩錚羌偕榪贍蓯欽廡干倭康南碌骷純梢緣賈虜鶤大幅度 青島大學(xué)碩士學(xué)位論文的兩者生物膜形成無差別，故而得出的阿奇霉素沒有殺滅成熟銅綠假單胞 總之，無論是體外還是體內(nèi)試驗(yàn)，大環(huán)內(nèi)酯類抗生素對(duì)抗銅綠假單胞菌有比較樂觀的研究，但是眾

14、多試驗(yàn)也證明亞抑菌濃度大環(huán)內(nèi)酯類藥物婷顧對(duì)生物膜的影響，隨著實(shí)驗(yàn)條件和所研究的菌株的不同而不同，隨著亞抑菌濃度和作用時(shí)間的不同出現(xiàn)相反的結(jié)果。在這一領(lǐng)域很多方面都沒達(dá)成共識(shí)，尤其是對(duì)于系統(tǒng)中各個(gè)因子之間的相互聯(lián)系和作用需要進(jìn)一步的探討。需要研究的空間還很大：而且體外的環(huán)境與體內(nèi)環(huán)境相差太大，需要進(jìn)一步探索實(shí)驗(yàn)條件，為更好的研究在體內(nèi)的治病機(jī)制提供條件。三、藥物的聯(lián)合應(yīng)用治療感染關(guān)于聯(lián)合抗生物膜的研究中，不同藥物聯(lián)合對(duì)生物膜的作用亦不同。其中過體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，羅紅霉素可以抑鋁多糖蛋白復(fù)合物合成，從而增強(qiáng)氟羅沙星滲透過細(xì)菌生物膜能力，對(duì)氟羅沙星殺滅細(xì)菌生物膜中的有增效作用。聶大平等刪可減少細(xì)菌的粘附

15、和被膜存活菌數(shù)：與環(huán)丙沙星，頭孢他啶聯(lián)合用藥能增強(qiáng)其殺菌作的頭孢他啶作用鋝牧媳礱嬡雜邢婦婊睿陌卓親饔等 青島大學(xué)碩士學(xué)位論文對(duì)于聯(lián)合治療生物膜感染效果好于單藥治療，篩選系統(tǒng)，利用這種篩選系統(tǒng)他們發(fā)現(xiàn)了兩種具有群體感應(yīng)顯著抑制作用的藥物： 參考文獻(xiàn)瓵琀甁：瓸，瓸：甗： 瓺?，C 琕：琓，甂 ，： ， 青島大學(xué)碩士學(xué)位論文甌。 ，珿，瓽珼琣瓵瓹，： 瓸，：， ，琂， ： 參考文獻(xiàn)， ，：珻琍，琘琕 琍臠，甊，甁琣瓽，甁，甋，甁 ，甀甌 青島大學(xué)碩士學(xué)位論文甈瓺珽，甁琑琣 ： ，甊，琈琒簍，瓹珻瓻琒，琂琑琂 ，甋，瓼，甅簉：，琘琘，甅，甇琣 青島大學(xué)碩士學(xué)位論文瓽甌甂 ：琈 琌琄 珹甀，珼，珹虬 ：，：陳遷，王睿，方向群，等羅紅霉素與氟羅沙星聯(lián)合應(yīng)用對(duì)銅綠假單胞菌生物被膜的影響聶大平跤衩，王衛(wèi)東等大環(huán)內(nèi)酯類藥物與環(huán)丙沙星，頭孢他啶聯(lián)合