氣相色譜和高效液相色譜定量技術(shù)知識(shí)點(diǎn)

1、氣相色譜和高效液相色譜定量技術(shù)色譜法因具有強(qiáng)大的分離功能，并且在分離的同時(shí)能夠進(jìn)行定量測(cè)定，在藥物含量測(cè)定中應(yīng)用越來越廣泛。用于定量參數(shù)為峰高或峰面積。1定量方法在一定的色譜操作條件下，流入檢測(cè)器的待測(cè)組分i的量mi（質(zhì)量或濃度）與檢測(cè)器的響應(yīng)信號(hào)（峰面積A或峰高h(yuǎn)）成正比： mi = fiAi mi= fhihi 工作站能自動(dòng)測(cè)量色譜峰面積，對(duì)不同形狀的色譜峰可以采用相應(yīng)的計(jì)算程序自動(dòng)計(jì)算得出準(zhǔn)確的結(jié)果，并由打印機(jī)打出保留時(shí)間和A或h等數(shù)據(jù)。式中，fi、fhi為定量校正因子。要準(zhǔn)確進(jìn)行定量分析，必須準(zhǔn)確測(cè)量響應(yīng)信號(hào)，求出定量校正因子。 式中，fi 稱為絕對(duì)校正因子。因絕對(duì)校正因子與檢測(cè)器性能

2、、待測(cè)組分、流動(dòng)相性質(zhì)以及操作條件等有關(guān)，不易準(zhǔn)確測(cè)量，在定量分析中常用相對(duì)校正因子fi（使用時(shí)常將“相對(duì)”二字省去）。相對(duì)校正因子為待測(cè)組分與某標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的絕對(duì)校正因子之比。 式中， Ai、As 待測(cè)組分和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的峰面積；mi、ms 待測(cè)組分和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的量。常用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為苯。相對(duì)校正因子只與物質(zhì)i和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)s以及檢測(cè)器有關(guān)，而與柱溫、流速、樣品及固定液含量、甚至載氣等條件無關(guān)。一般的參考文獻(xiàn)中都列有許多化合物的校正因子，可在使用時(shí)查閱。校正因子的測(cè)定方法：準(zhǔn)確稱取適量被測(cè)組分的純品（純度大于99%）和標(biāo)準(zhǔn)物，使用色譜純?cè)噭┡渲瞥扇芤海谕瑯拥膶?shí)驗(yàn)條件下進(jìn)樣分析，測(cè)量各峰面積，計(jì)算校正因子。

3、色譜法中用于定量分析的方法較多，各具特點(diǎn)。（1）外標(biāo)法 外標(biāo)法中所用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是待測(cè)組分的純品。藥典中許多藥物的含量測(cè)定均采用了高效液相色譜外標(biāo)法。在相同操作條件下，配制供試溶液和一個(gè)與被測(cè)組分含量相近的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別取等量的標(biāo)樣和試樣進(jìn)行色譜分析，比較兩色譜圖中待測(cè)組分的峰值，由式求出待測(cè)組分的含量。 外標(biāo)法不需要測(cè)定校正因子，操作簡(jiǎn)單、計(jì)算方便、應(yīng)用廣泛，但所需標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的純度高，而且要嚴(yán)格控制操作條件及進(jìn)樣量，否則結(jié)果不準(zhǔn)確。（2）內(nèi)標(biāo)法 內(nèi)標(biāo)法需要選擇合適的內(nèi)標(biāo)物。內(nèi)標(biāo)物必須滿足以下幾個(gè)條件：試樣中不存在的純物質(zhì)；其色譜峰應(yīng)位于待測(cè)組分色譜峰附近或幾個(gè)待測(cè)組分色譜峰之間，并與待測(cè)組分完全分

4、離；不與樣品發(fā)生反應(yīng)。具體做法：準(zhǔn)確稱取m（g）試樣，加入ms（g）內(nèi)標(biāo)物，配成混合試液進(jìn)樣，記錄色譜圖。根據(jù)待測(cè)組分i和內(nèi)標(biāo)物s的質(zhì)量和相應(yīng)的峰面積，由下式計(jì)算待測(cè)組分的含量： 內(nèi)標(biāo)法不受進(jìn)樣量、操作條件以及不同操作者進(jìn)樣技術(shù)的影響，定量準(zhǔn)確，但選擇合適的內(nèi)標(biāo)物有一定困難，且需要測(cè)定待測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)物的校正因子，比較費(fèi)時(shí)。如果測(cè)定校正因子時(shí)，不用苯而用內(nèi)標(biāo)物作標(biāo)準(zhǔn)品，則內(nèi)標(biāo)物的校正因子等于1。（3）歸一化法 如果試樣中所有組分均能流出色譜柱，并在檢測(cè)器上都有響應(yīng)信號(hào)，都能出現(xiàn)色譜峰，可用此法計(jì)算試樣中各待測(cè)組分的含量。其計(jì)算式如下： 歸一化法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，進(jìn)樣量多少不影響定量的準(zhǔn)確性，儀器及操作

5、條件的變動(dòng)對(duì)結(jié)果的影響也較小，尤其適用多組分的同時(shí)測(cè)定。但要求試樣中所有組分必須均能流出色譜柱并出峰，即使不必定量的組分也必須能測(cè)出峰面積，且所有組分的校正因子均需測(cè)定。2氣相色譜儀圖1 氣相色譜儀流程示意圖1-高壓鋼瓶 2-減壓閥 3-載氣凈化干燥管 4-針形閥 5-流量劑 6-壓力表 7-進(jìn)樣器 8-色譜柱 9-檢測(cè)器 10-記錄儀氣路系統(tǒng) 進(jìn)樣系統(tǒng) 分離系統(tǒng) 檢測(cè)系統(tǒng) 信號(hào)記錄系統(tǒng)氣相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)包括氣路系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、柱分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)和信號(hào)記錄系統(tǒng)等，其流程示意如圖1。載氣由高壓鋼瓶1供給，經(jīng)減壓裝置2、凈化裝置3、再經(jīng)調(diào)節(jié)和控制流量后進(jìn)入色譜柱，待基線穩(wěn)定后，即可經(jīng)進(jìn)樣器7進(jìn)樣；樣品經(jīng)氣化室氣化后被載氣帶入色譜柱8，在柱內(nèi)被分離；分離后的組分依次從色譜柱中流出，進(jìn)入檢測(cè)器9，檢測(cè)器將各組分的濃度或質(zhì)量的變化轉(zhuǎn)變成電信號(hào)（電壓或電流），經(jīng)放大器放大后