正交試驗法優(yōu)選菟絲子總黃酮提取工藝

1、正交試驗法優(yōu)選菟絲子總黃酮提取工藝更新日期：2010-06-09 點擊： 郭澄張純邵元福鄭越 提要用正交實驗法對菟絲子中總黃酮的提取工藝進行了探討。實驗確定的最佳提取條件為：用8倍量95%乙醇回流提取6 h。 關(guān)鍵詞正交試驗；菟絲子總黃酮；提取工藝 Orthogonal Test for the Effect of Alcohol Extracting Process to Total Flavones Contents from Cuscuta Seeds Guo Cheng, Zhang Chun, Shao Yuanfu, et al Changzheng Hospital, SMMU,

2、 Shanghai 200003 AbstractConcentration of alcohol, reflowing time and amount of alcohol were tested in orthogonal analysis for alcohol extracting process. Experimental results showed that concentration of alcohol was the significant fact to total flavone content with P0.05. The best extracting proce

3、ss can be described as: the drug powder is reflowed 2 times, 3hrs each, 95% alcohol with 8 times of the amount to drug weight. key wordsOrthgonal test;Cuscuta australis;Extracting techniques 中藥菟絲子為臨床常用壯陽類中藥，具有滋補肝腎、益精明目等功效。菟絲子類生藥含有黃酮、多糖和甾醇等成分1，2，具有多方面的補益活性(郭澄，第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文，1993)3，4，其中黃酮類成分為主要的有效成分。本文采

4、取正交設(shè)計試驗優(yōu)選菟絲子類藥材的主流品種南方菟絲子中總黃酮的提取工藝。 1實驗材料 藥材與試劑：菟絲子藥材(購自上海市黃浦區(qū)藥材公司，經(jīng)郭澄鑒定為南方菟絲子Cuscuta australis R. Br.)，蘆丁對照品(購自中國藥品生物制品檢定所)；島津UV-240紫外分光光度儀。 2方法與結(jié)果 2.1提取工藝的設(shè)計：先將生藥粉碎成粉末，過40目篩，用石油醚加熱回流脫脂2 h，揮干石油醚，殘渣以一定濃度的乙醇回流提取，分2次進行，合并提取液，定容，待測。另精稱0.5 g藥材粉末置索氏提取器中加100 ml石油醚回流脫脂2 h，再用90 ml甲醇提取3 h，置100 ml容量瓶定容，待測。 2.

5、2正交設(shè)計：根據(jù)生產(chǎn)實際及文獻5，認(rèn)為總黃酮成分提取與乙醇濃度(A)、倍數(shù)(B)、提取時間(C)有關(guān)，故選擇該三者為3個考察因素，各取3個水平，進行L9(34)正交表實驗，見表1。每次試驗藥材用量為50 g，以500 ml容量瓶定容液中總黃酮濃度為指標(biāo)。 表1正交因素水平表 水平 乙醇濃度 A (%) 用量 B (倍) 時間 C (h) 1 50 8 2 2 70 12 4 3 95 16 6 2.3總黃酮含量測定及結(jié)果：按文獻方法6用蘆丁作對照品，以吸收度 A為縱坐標(biāo)，濃度 C (g/ml)為橫坐標(biāo)，得回歸方程(5.544 g/ml線性范圍)： C=80.258 A0.452， =0.999

6、1。藥材提取供試液中總黃酮濃度(以500 ml定容提取液濃度計)直觀分析表、方差分析表分別見表2、表3。 表2直觀分析表 序號 因素 總黃酮含量 (g/ml) A B C 1 1 1 1 753.796 2 1 2 2 1037.254 3 1 3 3 934.702 4 2 1 2 1377.483 5 2 2 3 1395.042 6 2 3 1 1029.883 7 3 1 3 1456.250 8 3 2 1 1226.950 9 3 3 2 1169.797 K1 2725.752 3587.529 3010.629 K2 3802.408 3659.246 3584.534 K3

7、3852.997 3134.382 3785.994 K1 905.504 1195.843 1003.543 K2 1267.469 1219.749 1194.845 K3 1284.332 1044.794 1261.998 R 375.828 174.955 258.455 表3方差分析表 變異來源 離差平方和 自由度 均方 F P A 270269.85 2 135134.93 26.79 0.05 B 53996.42 2 26998.21 5.35 0.1 C 107904.89 2 53952.44 10.70 0.1 3討論與結(jié)論 3.1最佳提取方法：通過直觀分析表，三因素主

8、次順序為ACB，方差分析結(jié)果顯示：A為主要因素，其次為C、B。從平均得率和實際工作成本考慮優(yōu)選方案為A3B1C3，即：95%乙醇8倍量提取6 h。與甲醇提取總黃酮(理論值)相比該法得率為92.1%。 3.2通過實驗比較認(rèn)為，采用水提法效果較差，只相當(dāng)于優(yōu)選方法的50%左右。 3.3生藥總黃酮提取工藝的報道較多，其中乙醇濃度影響較大。一般認(rèn)為乙醇濃度增高有利于總黃酮的提取，但提取側(cè)柏葉總黃酮時，采用50%乙醇回流4 h稀釋20倍為最佳6，可能是由于黃酮甙含量較高所致。 作者簡介：郭澄：男，1965年生，副主任藥師，博士 作者單位：郭澄張純邵元福鄭越中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)長征醫(yī)院 參考文獻 1郭澄.南方菟絲子化學(xué)成分的研究.中國藥學(xué)雜志，1997，32(1)8 2郭澄.菟絲子質(zhì)量研究.中國中藥雜志，1991，16(10)581 3郭澄.菟絲子生物學(xué)及其應(yīng)用.成都