正交設(shè)計研究石韋總黃酮和鞣質(zhì)提取工藝(一)

1、正交設(shè)計研究石韋總黃酮和鞣質(zhì)提取工藝(一)    作者：王自軍，楊紅兵，齊譽(yù)，邊麗【關(guān)鍵詞】 石韋;,總黃酮;,鞣質(zhì)摘要：目的優(yōu)化石韋總黃酮和鞣質(zhì)的超聲提取工藝。方法以總黃酮和鞣質(zhì)含量為考察指標(biāo)，通過正交設(shè)計試驗篩選石韋總黃酮和鞣質(zhì)的最佳超聲提取工藝。結(jié)果總黃酮的最佳提取條件為A1B3C2D2，即（乙醇）=60%，m（乙醇）m（石韋）=201，提取時間60 min，共提取2次，測得石韋中總黃酮的平均含量為3.768%；鞣質(zhì)的最佳提取條件為A1B3C2D1，即（乙醇）=10%， m（乙醇）m（石韋）=201，提取時間30 min，提取1次，測得石韋鞣質(zhì)平均

2、含量為6.266%。結(jié)論 通過正交設(shè)計實驗優(yōu)選得到的石韋總黃酮和鞣質(zhì)的超聲提取工藝條件穩(wěn)定可行。關(guān)鍵詞：石韋; 總黃酮; 鞣質(zhì)Study of Ethanol Extraction Process for Total Flavonoids And Tannin Containment of Flolium Pyrrosiae by Orthogonal DesignAbstract:ObjectiveTo optimize ultrasonic extracting process of the total flavonoids of and tannin Flolium pyrrosiae

3、with orthogonal design. MethodsThe optimum ultrasonic extraction conditions were investigated by orthogonal design and with the total flavonoids and tannin as the content index. ResultsThe optimum extraction condition of the total flavonoids obtained was: A1B3C2D2，（CH3CH2OH）=60%，m（CH3CH2OH）m（Flolium

4、 pyrrosiae）=201，the time of extracting was 60 minutes, the total times of extraction was 2, the average containment flavonoids of Flolium Pyrrosiae was 3.768% ；the optimum extraction condition of tannin obtained was: A1B3C2D1，（CH3CH2OH）=10%，m（CH3CH2OH）m（Flolium pyrrosiae）=201，the time of extraction

5、was 60 minutes，the total time of extraction was 1, the average containment tannin of Flolium Pyrrosiae was 6.266%. ConclusionThe optimized process is feasible for the extraction of the total flavonoids of Flolium Pyrrosiae and tannin. Key words:Flolium Pyrrosiae; Total flavonoids； Tannin石韋系水龍骨科石韋屬植物

6、的全草，主要分布于華北、西北及湖南等地。石韋味苦、甘、性微寒，歸肺，膀胱經(jīng)。具有利尿通淋、清熱止血的功效。主治肺炎水腫、膀胱炎、泌尿系統(tǒng)結(jié)石、慢性氣管炎、吐血、尿道炎、感冒咳嗽及小便不利等。藥理研究表明廬山石韋水煎濃縮液及提取物經(jīng)動物實驗均有鎮(zhèn)咳及祛痰作用，對于因化學(xué)療法及放射療法引起的白細(xì)胞下降，有使其升高作用，并有抗單純性皰疹病毒作用1。石韋含有多種生物活性物質(zhì)，對它的研究很少，尤其是對總黃酮和鞣質(zhì)提取工藝的研究尚未見報道。超聲技術(shù)的應(yīng)用近年來得到很大發(fā)展。超聲具有穿透力強(qiáng)、選擇性高等特點。超聲技術(shù)可以大大加快反應(yīng)速度，縮短反應(yīng)時間 2。超聲技術(shù)應(yīng)用于植物細(xì)胞破壁，有效地提高了收率3。本實

7、驗運(yùn)用超聲技術(shù)輔助研究石韋中總黃酮和鞣質(zhì)的提取工藝，反應(yīng)速度加快。1 材料和方法1.1 儀器和材料UV2401型分光光度計(日本島津)，超聲波儀 (浙江省象山縣石浦海天電子儀器廠)，BS210S型萬分之一電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；SHBB95型循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司），HHS數(shù)顯恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠）。石韋（石韋粉碎備用）、95%的酒精、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁、EDTA、鉻黑T、醋酸鋅、濃氨水（試劑為分析純）。1.2 方法1.2.1 原理乙醇是常用的黃酮類化合物提取溶劑，利用黃酮類分子中的酚羥基可與Al3+在堿性溶液中顯色的原理測定其含量4

8、；鞣質(zhì)為多羥基物，具有較強(qiáng)極性，不穩(wěn)定的特點，故在提取時選用極性較大溶劑、短時間提取的方法，本實驗選取的是一定濃度的乙醇溶液，采用超聲提取法,最后用絡(luò)合滴定法測其含量，計算公式為鞣質(zhì)%= 0.1556×(V1×C1-20×V2×C2) W×100%5。在正交設(shè)計研究石韋總黃酮和鞣質(zhì)的提取工藝實驗中6，總黃酮和鞣質(zhì)采用的是超聲提取法。用比色法測定黃酮含量，絡(luò)合滴定法測定鞣質(zhì)含量，最后運(yùn)用數(shù)理統(tǒng)計方法處理實驗數(shù)據(jù) ，最終找出最佳提取條件。1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取120干燥至恒重的蘆丁對照品10 mg置燒杯中，加適量乙醇在水浴上微熱溶解，放

9、冷后轉(zhuǎn)移到50 ml容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻（每毫升含蘆丁0.2 mg），精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 ml于25 ml容量瓶中，分別加水至6 ml，分別加入5%亞硝酸鈉1.0 ml混勻，放置6 min，然后加入10%硝酸鋁1.0 ml，混勻，放置6 min，加入4%氫氧化鈉10.0 ml，用水稀釋至刻度，混勻，放置15 min，在510 nm處以第1瓶溶液作空白分別測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立回歸方程A=11.225C+0.0027，r=0.999 13。1.2.3 從石韋中提取總黃酮精密稱取一定量的石韋，按因素水平表超聲提取石韋中的總黃酮

10、，減壓過濾,用100 ml的容量瓶定容。搖勻，放置5 min。吸取0.5 ml移至10 ml容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉0.4 ml，放置6 min后，加10%硝酸鋁0.4 ml，放置6 min后，再加4%的氫氧化鈉4 ml加水至刻度，搖勻，放置15 min；在波長510 nm處，進(jìn)行吸光度的測定，最后處理數(shù)據(jù)。1.2.4 從石韋中提取鞣質(zhì)精密稱取一定量的石韋，按因素水平表超聲提取鞣質(zhì)，減壓過濾，將提取液恒溫水浴15 min后，加入25 ml醋酸鋅溶液，18 ml濃氨水，再恒溫水浴30 min。取出冷卻至室溫，用一定濃度乙醇溶液在500 ml容量瓶中定容，靜置10 min，精密吸取上層清液2

11、5 ml于250 ml錐形瓶中，加蒸餾水200 ml，量取25 ml氨氯化銨緩沖溶液（pH=10），加少許鉻黑T（固體），以0.05 mol?L-1EDTA滴定，記下EDTA溶液體積，最后處理數(shù)據(jù)。2 結(jié)果2.1 提取黃酮正交實驗數(shù)據(jù)處理與分析見表12。表1 因素水平（略）表2 正交實驗結(jié)果分析（略）由表2中極差可知,各因素依次為BACD，以A1B3C2D2為最佳。2.1.2 提取鞣質(zhì)正交實驗數(shù)據(jù)處理與分析見表34。表3 因素水平（略）表4 正交實驗結(jié)果分析（略）由表4中極差分析可知,各因素依次為ABCD，以A1B3C2D1最佳。3 討論研究表明，黃酮類化合物具有降脂、抗血栓、抗氧化、降糖等多

12、種生理活性7。鞣質(zhì)廣泛存在于自然界，是多種中草藥的有效成分之一，具有多種生物活性，如抗腫瘤、抗過敏、抗衰老等，鞣質(zhì)類藥物的研制引起了國內(nèi)外學(xué)者廣泛的關(guān)注8。本文根據(jù)正交設(shè)計實驗采用超聲技術(shù)從石韋中提取總黃酮，其優(yōu)選的最佳工藝條件為：乙醇濃度為60%，乙醇與石韋的質(zhì)量比為201，提取時間60 min，共提取2次，測得石韋中總黃酮平均含量為3.768%；從石韋中提取鞣質(zhì)優(yōu)選的最佳工藝條件為：乙醇濃度10%，乙醇與石韋的質(zhì)量比為201，提取時間30 min，提取1次，測得石韋鞣質(zhì)平均含量為6.266%。石韋提取工藝條件的篩選，其評價指標(biāo)的選擇十分關(guān)鍵。僅僅用鞣質(zhì)和總黃酮得率評價工藝條件尚不完全，有待進(jìn)一步研究。參考文獻(xiàn)：1 馬 辰,周 圓,劉愛茹.高效液相色譜法測定中藥石韋兩種成分的含量J.藥學(xué)學(xué)報，2003,38(4)：286.2 應(yīng)崇福.超聲學(xué)M.北京：科學(xué)出版社,1990：511.3 趙兵,王玉春,歐陽藩,等.超聲波在植物提取中的應(yīng)用J.中草藥,1999,30(9)：458. 4 孫佩霞,葉麗卡，張曉麗,等.比色法測定淫羊藿膠囊中總黃酮的含量J.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，1999，16(1)：