糖發(fā)酵實驗報告

1、糖發(fā)酵試驗一、目的1 了解糖發(fā)酵的原理和在腸道細(xì)菌鑒定中的重要作用。2 掌握通過糖發(fā)酵鑒別不同微生物的方法。二、原理多糖?單糖?丙酮酸?酸性產(chǎn)物 （或產(chǎn)酸產(chǎn)氣 ）?ph 下降?指示劑呈酸性變色 （假設(shè)產(chǎn)氣者有 氣泡出現(xiàn) ） 。不同的細(xì)菌可根據(jù)分解利用糖能力的差異表現(xiàn)出是否產(chǎn)酸產(chǎn)氣作為鑒定菌種的依據(jù) 。 是 否產(chǎn)酸 ，可在糖發(fā)酵培養(yǎng)基中加入指示劑 通常為溴甲酚紫 ，即 b.c.p ，其 ph 在以下呈黃 色，ph在以上呈紫色丨，經(jīng)培養(yǎng)后根據(jù)指示劑的顏色變化來判斷。是否產(chǎn)氣可在發(fā)酵培養(yǎng)基中放入倒置小倒管觀察 。不同的微生物具有發(fā)酵不同糖 醇 的酶類 ， 所以發(fā)酵途徑及發(fā)酵產(chǎn)物各不相同 。 例 如：

2、 大腸桿菌能使乳糖發(fā)酵 ， 產(chǎn)酸產(chǎn)氣 ，而傷寒桿菌則不能 ；大腸桿菌能使葡萄糖發(fā)酵 ，產(chǎn)酸 產(chǎn)氣 ， 而傷寒桿菌則只產(chǎn)酸 、 不產(chǎn)氣 。糖發(fā)酵試驗是常用的鑒別微生物的生化反應(yīng) ， 在腸道細(xì)菌的鑒定上尤為重要 。 絕大多數(shù) 細(xì)菌都能利用糖類作為碳源和能源 ， 但是它們在分解糖類物質(zhì)的能力上有很大的差異 。 有些細(xì) 菌能分解某種糖產(chǎn)生有機酸 （如乳酸、醋酸、丙酸等 ）和氣體 （如氫氣、甲烷、二氧化碳等 ）； 有些細(xì)菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣 。 例如大腸桿菌能分解乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣 ； 傷寒桿菌分解葡萄糖 產(chǎn)酸不產(chǎn)氣 ， 不能分解乳糖 ； 普通變形桿菌分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣 ， 不能分解乳糖 。 發(fā)酵培養(yǎng)基

3、含有蛋白胨 ， 指示劑 （ 溴甲酚紫 ） ， 倒置的德漢氏小管和不同的糖類 。當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)酸時 ， 溴甲酚 紫指示劑可由紫色 （ph6.8） 變?yōu)辄S色 （ph5.2）。 氣體的產(chǎn)生可由倒置的德漢氏小管中有無氣泡來證明 。三 、 器材1 菌種 大腸桿菌 , 普通變形桿菌斜面各一支 。2 培養(yǎng)基 葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管和乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管各 3 支（ 內(nèi)裝有倒置的德漢氏小 管） 。 3 儀器或其他用具 試管架 ， 接種環(huán)等 。四、操作步驟 1用記號筆在各試管外壁上分別標(biāo)明發(fā)酵培養(yǎng)基名稱和所接種的細(xì)菌菌名。2 取葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管 3 支 ， 分別接入大腸桿菌 ，普通變形桿菌 ， 第三支不接種 ， 作為

4、對照 。另取乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管 3 支 ，同樣分別接人大腸桿菌 ， 普通變形桿菌 ， 第三支 不接種 ， 作為對照 。在接種后 ，輕緩搖動試管 ， 使其均勻 ， 防止倒置的小管進入氣泡 。3將接種過和作為對照的6支試管均置37 C培養(yǎng)2448h。4觀察各試管顏色變化及德漢氏小管中有無氣泡。篇二 ：發(fā)酵實習(xí)實驗報告第一部分 、實驗部分實驗一 、 酸乳的制作一 、 實驗?zāi)康? 、 掌握酸乳的制作方法 、 基本原理 ；2 、 了解發(fā)酵劑制備過程中的操作要點 ；3 、 對最終產(chǎn)品進行感官評定及理化檢測 ，并進行品質(zhì)比較 。二 、 基本原理酸乳也成為酸牛奶 ，是人們喜歡的飲用發(fā)酵乳 。所謂發(fā)酵乳 、 鮮

5、乳或乳制品等主要原料 添加乳酸菌 ，發(fā)酵以后形成的具有特殊風(fēng)味的乳制品 。 乳經(jīng)過發(fā)酵制成發(fā)酵乳以后營養(yǎng)價值提 高， 發(fā)酵乳中的蛋白質(zhì) 、鈣鹽容易消化吸收 ，具有消化 、抑制腸道內(nèi)異常的發(fā)酵和殺死腸道中 的有害菌的作用 。酸奶是以牛奶為原料經(jīng)過均質(zhì) 、消毒 、發(fā)酵等過程加工而成的 。酸乳的品種很多 ，根據(jù) 發(fā)酵工藝的不同 ， 可以分為凝固型酸乳和攪拌型酸乳兩大類。凝固型酸乳在接種發(fā)酵菌株后 ，立即進行包裝 ，并在包裝容器內(nèi)發(fā)酵 、成熟 。攪拌型酸乳先在發(fā)酵罐中接種 、發(fā)酵 ，發(fā)酵結(jié)束 后在進行無菌灌裝并后熟 。 其基本原理就是通過乳酸菌發(fā)酵牛奶中的乳糖產(chǎn)生乳酸 ， 乳酸使牛 奶中酪蛋白 約占全

6、乳的 2.9% ，占乳蛋白的 85% 變性凝固而使整個奶液呈凝乳狀態(tài)。同時， 通過發(fā)酵還可以形成酸奶特有的香味和風(fēng)味 ，本實驗主要學(xué)習(xí)凝固型酸奶的制作方法 。三 、 實驗材料1、材料 ：純牛奶 、白糖 、酸牛奶2 、 儀器 ：電爐 、 水浴鍋 、 電子天平 、恒溫培養(yǎng)箱 、 相關(guān)玻璃器皿四 、 實驗步驟1 、 取 2000ml 純牛奶放入鍋中加熱 ；2、當(dāng)?shù)竭_一定溫度后 ，按照 8%的比例加入 160g 白糖 ，攪拌溶解3、將牛奶加熱到90 C ;4 、小組分裝 ， 每個三角瓶中加入 50ml 的牛奶 ，5、將分裝好的牛奶放到 95 C的水浴鍋中，滅菌5min ;6、冷卻到45 C ,在酒精燈

7、下，接種適量的酸牛奶一勺，并攪拌均勻，封好口 ；7、在37 C的溫箱中保溫培養(yǎng) 2-4h ,8、轉(zhuǎn)入0-4 C冰箱中冷藏保存;9 、 品質(zhì)鑒定五 、 實驗結(jié)果品質(zhì)鑒定 ：1. 色澤 ：色澤均勻一致 ， 呈乳白色 。2. 氣味：具有與種子酸奶同樣的香味 ， 無酒精發(fā)酵味 ， 無霉味或其他不良味道 。3. 狀態(tài) ： 凝塊均勻 ， 無氣泡 ，沒有乳清析出 。4. 口感 ：口感就好 ，與種子酸奶味道一致 ，清香，順滑 ，沒有顆粒狀物質(zhì) 。 總結(jié) ：本 次實驗所制作的酸乳 ， 質(zhì)量品質(zhì)和外觀色澤均非常好 。六 、 思考題1 、 牛乳的殺菌工藝有哪幾種 ？ 牛乳的殺菌工藝中最經(jīng)典的就是巴氏殺菌法和超高溫滅

8、菌法 ， 還有煮沸殺菌法2、乳酸菌在乳中發(fā)酵的原理是什么 ？牛乳為什么是凝固的 ？基本原理就是通過乳酸菌發(fā)酵牛奶中的乳糖產(chǎn)生乳酸 ， 乳酸使牛奶中酪蛋白 約占全乳 的 2.9% ， 占乳蛋白的 85% 變性凝固而使整個奶液呈凝乳狀態(tài) 。實驗二 、 甜酒釀的制作一、實驗?zāi)康?、學(xué)習(xí)甜酒釀的發(fā)酵工藝 ；2、明確發(fā)酵的原理 。二、實驗原理甜酒釀是以糯米為主要原料 ，通過微生物的發(fā)酵釀制而成的 。 由于酵母不能直接利用淀 粉，因此必須先用糖化菌如根霉 、毛霉等把淀粉分解成單糖或雙糖 。因此 ，甜酒釀是在糖化菌 和酵母菌共同作用下釀制而成的 ， 甜酒釀的制作過程包括糖化和酒化兩個過程 。糖化過程是在 糖

9、化菌如根霉分泌糖化酶的作用下 ， 將淀粉水解成葡萄糖 ；酒化的過程是酵母菌利用葡萄糖經(jīng) 過 emp 途徑生成丙酮酸 ，然后進入無氧呼吸將丙酮酸轉(zhuǎn)化為乙醇 。三、實驗材料1、材料 ：糯米 、 酒藥2、四、器材 ：燒杯 、錫箔紙 、吸管 、電子天平 、電磁爐 、不銹鋼匙 、玻璃棒等 實驗步驟1、選擇原料 ； 選擇粒大飽滿 、無蛀蟲 、無雜物 、色澤鮮亮 、質(zhì)量好的新糯米共1100g ， 每小組大約有 275g 左右 ；2、淘洗浸泡 ； 將米在水中浸泡 12-24 小時 ，后用自來水沖洗 ，浸米的目的是使米中的淀粉粒子吸水膨脹 ， 便于蒸煮糊化 ；將浸泡好的米用自來水沖洗干凈 ，并瀝干 。3、 蒸煮

10、米飯 ；將洗凈瀝干的米在高壓鍋中隔水蒸煮 10-20 分鐘 ，常壓 30-40 分鐘 。 要求達到熟而不糊 ， 外硬內(nèi)軟 ，內(nèi)無白心 ，疏松易散 ，透而不爛 ，均勻一致 。4、于拌淋飯降溫 ； 用冷開水淋洗糯米飯 ，以到達降溫增水的目的 ， 并使熟飯外表光滑 ， 易入酒藥，利于糖化發(fā)酵菌的繁殖；淋飯時要邊拌邊淋，使米飯快速降溫至35 C左右，防止因緩慢冷卻導(dǎo)致微生物污染5、 接入酒曲;將冷卻至30 C左右的米飯，按糯米量1%約11g接入酒藥，將大米 平均分成4 份， 拌勻裝入燒杯 ， 并在中央用玻璃棒打一孔道 ， 搭成喇叭型凹窩 中間低， 周邊 高， 外表再撒上少許酒藥 ， 用封口膜封口 。6

11、、 保溫發(fā)酵；30 C培養(yǎng)48小時，待喇叭型凹窩內(nèi)有許多液體滲出，即可食用，但此 時酒味淡泊 ， 略有酸味 ，假設(shè)要品嘗酒香濃郁的酒釀 ， 可適當(dāng)延長發(fā)酵的時間 。7、后熟發(fā)酵;在8-10 C下培養(yǎng)2-3天。8 、 質(zhì)量評估 ； 酒香濃郁 ， 液體清澈透明 ， 酒液充分 。五 、 結(jié)果思考題結(jié)果分析 ：在保溫發(fā)酵 48 小時后 ，將燒杯移除后 ， 看到在燒杯的底部出現(xiàn)少量的清澈 的液體 ， 在喇叭口的大米的表層出現(xiàn)了白色的霉菌 。 在后發(fā)酵過程中 ， 燒杯底部的清澈的液體 的量不斷增加 。 此時出現(xiàn)淡淡的酒精味 ，略有酸味 。 品鑒時 ， 燒杯的底部出現(xiàn)了 2cm 厚的清 澈的液體 ，酒精味濃

12、郁 ， 有一股淡淡的清香 。1 、 甜酒釀制作過程中應(yīng)注意問題有哪些 ？在甜酒釀的制作過程中應(yīng)注意在挑選糯米的時候選取粒大飽滿的新糯米， 在蒸煮的時候， 注意不要將米飯蒸糊 ， 在淋飯降溫的時候用冷開水快速降溫 ， 防止因為緩慢降溫冷卻導(dǎo)致 其他微生物的污染 。在接種酒曲之后要攪拌均勻 ， 接入適量的酒藥 ，外表撒上少許酒藥 ，注意 用a4紙封口。保溫發(fā)酵的溫度為 30 C ,培養(yǎng)的時間為48小時。在進行質(zhì)量報告時，當(dāng)發(fā) 現(xiàn)米飯上層的霉菌出現(xiàn)黑色或者黃色時 ，不要食用 。 在進行品嘗鑒評的時候 ，將上層的霉菌除 去。2 、 說明甜酒釀制作的發(fā)酵原理 ？甜酒釀是在糖化菌和酵母菌共同作用下釀制而成

13、的 ， 甜酒釀的制作過程包括糖化和酒化 兩個過程 。糖化過程是在糖化菌如根霉分泌糖化酶的作用下 ， 將淀粉水解成葡萄糖 ； 酒化的過 程是酵母菌利用葡萄糖經(jīng)過 emp 途徑生成丙酮酸 ， 然后進入無氧呼吸將丙酮酸轉(zhuǎn)化為乙醇 。實驗三 、 槐耳粗多糖的提取一 、 實驗?zāi)康? 、 掌握發(fā)酵產(chǎn)物的精制過程 ；2 、 明確提取 、濃縮 、 醇沉和干燥的原理 。二 、 實驗原理溫度升高能使細(xì)胞壁通透性增加并促進膨脹 ， 增加了可溶性成分的溶解和擴散速度 ， 所 以浸取溫度越高 ， 浸出速度越快 。 但溫度升高后 ， 某些目的產(chǎn)物不穩(wěn)定發(fā)生分解變質(zhì) ， 同時使 揮發(fā)性目的產(chǎn)物揮發(fā)散失 。 因此， 要把浸取

14、溫度控制在適當(dāng)?shù)姆秶?。在目的產(chǎn)物浸出過程中 ， 溶劑的 ph 值對浸出速度有影響 。 某些目的產(chǎn)物可溶解于酸性溶劑 ， 則要使用酸性溶劑浸提 ；有些目的產(chǎn)物易溶解于堿性溶液 ， 因而要選擇堿性溶劑提取 。根據(jù)目的產(chǎn)物的酸堿性質(zhì)可確定 提取過程中溶劑 ph 值的范圍 。分級沉淀法是指在混合組分的溶液中加入與該溶液能互溶的溶劑 ，通過改變?nèi)軇┑臉O性 而改變混合組分溶液中某些成分的溶解度 ， 使其從溶液中析出 。如在含有糖類或蛋白質(zhì)的水溶 液中 ，分次加入乙醇 乙醇 ：中強極性 ，能與水以任何比例相混 ，乙醇濃度越高溶液極性越 低。各種目的產(chǎn)物在乙醇中的溶解度隨乙醇濃度的變化而變化 ， 使醇含量逐

15、步增高 ，逐級沉 淀出分子量由大到小的蛋白質(zhì) 、多糖 、多肽 。濃縮的方法有蒸發(fā)濃縮 、冷凍濃縮和吸收濃縮等 ， 其中的蒸發(fā)濃縮是將溶液加熱沸騰，使溶劑汽化除去 ， 從而提高溶液中溶質(zhì)的濃度 ，可以分為常壓蒸發(fā)濃縮和真空蒸發(fā)濃縮兩類 。 干燥時 ， 發(fā)酵產(chǎn)品提取過程中的最后一個環(huán)節(jié)， 是將潮濕的固體中的水除去的過程， 與蒸發(fā)相比， 水分是不在沸騰的狀態(tài)下汽化 ，而是在其本身溫度低于沸點的條件下進行 ，很多因素如物 料的性質(zhì)和形狀 、 物料本身的溫度 、干燥介質(zhì)的溫度 、濕度和流動情況等影響著干燥的速度 。 方法有空氣加熱干燥法 、 杰出加熱法和冷凍升華干燥法。三 、 實驗器材1 、 材料 ：槐

16、耳2 、 器材 ：分液漏斗 、 電爐四、實驗步驟1 、 浸泡2、：250g 槐耳，粉碎后加入 8 倍蒸餾水浸泡 24h ；3、熱浸提：ph自然，100 C ,不時攪拌，2h ;4 、 過濾 ，殘渣加入適量的水 ， 重復(fù)抽提一次 ，合并兩次提取所得濾液 ；5 、 濃縮 ，采用蒸發(fā)濃縮法 ，加熱至小于 150ml 左右體積 ；6、去蛋白， 連續(xù) 2-3 次加入氯仿 ：正丁醇 =4:1 溶液去除蛋白 sevag 法， 至不顯 示蛋白反應(yīng)為止 ，離心收集上清液 。注： sevag 法： 加入倍多糖體積的氯仿和乙醇的混合液 ， 震蕩別離 15min 左右 ， 直 到氯仿和水的界面沒有沉淀為止 ， 且重復(fù)

17、處理 2-3 次才能有效去除多糖中的蛋白質(zhì)。 7、本次實驗經(jīng)濃縮和抽提之后獲得 80g 的粗多糖提取液 。 將所得的多糖的粗提取液平 均分成4 份， 依據(jù)每份的質(zhì)量體積按照 70%、 75%、 80%、 85%的乙醇濃度加入乙醇 ， 室溫下 靜止 24h ；8 、 離心 濾紙過濾 ， 切記不要震蕩 ； 3600rpm, 離心 10min9、收集沉淀，采用對流加熱干燥方法，60 C加熱干燥至恒重；10、稱重， 按照下表記錄數(shù)據(jù) 。六 、 思考題1 、 沉淀多糖最適乙醇用量是什么 ？沉淀多糖最適的乙醇用量是 75%濃度 ， 大約是粗多糖濃縮液的 4 倍體積乙醇 。2 、 粗多糖的提取率是多少 ？以

18、最適乙醇的濃度 75% 為標(biāo)準(zhǔn) ， 粗多糖的提取率 =1.02g/(250g/4)x100%=1.632% 篇 三：發(fā)酵實驗報告 發(fā)酵工程原理 綜合實驗小型發(fā)酵罐的使用與發(fā)酵過程監(jiān)測與分析學(xué)院名稱 ：食品學(xué)院年級專業(yè) ：09 級生物工程實驗日期摘 發(fā)酵罐是用于培養(yǎng)微生物或細(xì)胞的封閉容器或生物反應(yīng)裝置。 可用于研究 、分析或生產(chǎn) 。 有多種在材料 、 大小和形狀上各異的產(chǎn)品 。 最常用的為全攪拌罐式反應(yīng)器 。 發(fā)酵罐 廣泛應(yīng)用于乳制品 、飲料、生物工程 、制藥、精細(xì)化工等行業(yè) ，罐體設(shè)有夾層 、保溫層 、可加 熱、冷卻、保溫。罐體與上下填充頭 或雛形均采用旋壓 r 角加工 ，罐內(nèi)壁經(jīng)鏡面拋光處

19、理， 無衛(wèi)生死角 ， 而全封閉設(shè)計確保物料始終處一無污染的狀態(tài)下混合、發(fā)酵 ，設(shè)備配備空氣呼吸孔 ， cip 清洗噴頭 ，人孔等裝置 。本實驗通過控制合適的培養(yǎng)條件 ， 使大腸桿菌迅速持續(xù)生長 ， 在發(fā)酵過程中定時取 樣測定不同時期發(fā)酵液的細(xì)菌濁度及殘留復(fù)原糖的變化了解發(fā)酵過程中菌體生長及對培 養(yǎng)基的利用情況 。關(guān)鍵詞 ： 大腸桿菌 液體發(fā)酵 最大比生長速率 平均細(xì)胞得率系數(shù)目錄、八前 31.材料與設(shè)備 41.1.材料 41.1.1. 菌種 1.1.2. 培養(yǎng)基 41.1.3. 其他材料 41.2. 設(shè)備 42. 實驗方法 42.1. 流程 42.2. 菌種準(zhǔn)備 52.2.1. 配制培養(yǎng)基 5

20、2.2.2. 接種與培養(yǎng) 52.3. 上罐前的準(zhǔn)備 52.4. 實罐滅菌 62.5. 發(fā)酵操作 62.5.1. 取樣 62.5.2.2.5.3.接種 電腦監(jiān)控 . 7 72.5.4.發(fā)酵管理 72.6.發(fā)酵過程中各項生理指標(biāo)的測定 72.6.1.od 值測定 72.6.2.葡萄糖測定 72.7.放罐清洗 83. 結(jié)果與分析 93.1.菌體濃度與吸光值關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線 3.2. 發(fā)酵過程各參數(shù)變化規(guī)律 93.3. 1 干菌體濃度 93.2.2 葡萄糖濃度 103.2.3 ph 值、 do 值和其他一些參數(shù) 103.4. 各參數(shù)整理與分析 113.5. 最大比生長速率 133.6. 平均細(xì)胞得率系數(shù)

21、154. 6 實驗操作對實驗結(jié)果的影響 153.6.1 菌種活化與一級菌種 、 二級菌種的制備 153.6.2 搖床 153.6.3 上罐前管理 153.6.4 實罐滅菌 163.6.5 接種時管理 16發(fā)酵時管理 .3.6.7 od值測 16定 .復(fù)原糖測 17定 . 17試驗中遇到的問題及猜想 .丿4、 17參考文獻 . 18、八前言發(fā)酵罐是進行液體發(fā)酵的專用設(shè)備 。實驗室使用的小型發(fā)酵罐 ， 其體積可從 1l 至數(shù)百 升。 一般 5l 以下是用耐壓玻璃制作罐體 ，10l 以上用不銹鋼板或鋼板制作罐體 。發(fā)酵罐配備 控制系統(tǒng)，它主要是對發(fā)酵過程中的各種參數(shù)如溫度、ph、溶解氧、攪拌速度、空

22、氣流量、補料 、 泡沫水平等進行設(shè)定 、 顯示 、 記錄以及對這些參數(shù)進行反饋調(diào)節(jié)控制 。大腸桿菌 e.coli是遺傳工程研究過程中常用的受體菌 ， 對大腸桿菌的遺傳背景和生理特性研究已相當(dāng)徹底 ， 已有很多不同抗藥性 、 不同營養(yǎng)依賴型和不同校正突變型的菌種供選擇應(yīng)用 ，可以根據(jù)不同的載體而選擇不同的菌種 。 大腸桿菌在營養(yǎng)條件充足 時，2030min即可繁殖一代，而且大規(guī)模發(fā)酵成本低,具有巨大的生產(chǎn)潛力 為了解發(fā)酵過程中菌體的生長及對培養(yǎng)基的利用情況 ， 需在發(fā)酵過程中定時地取樣測 定。包括對菌體進行鏡檢 、 測定不同時期發(fā)酵液的細(xì)菌濁度及殘留復(fù)原糖rg 的變化等 。1. 材料與設(shè)備1.1

23、. 材料1.1.1. 菌種大腸桿菌 e.coliA A1.1.2. 培養(yǎng)基種子培養(yǎng)基 ：葡萄糖 10g ， 蛋白胨 10g ，牛肉膏 10g ， 酵母膏 5g ， 氯化鈉 5g， 水1000ml 。發(fā)酵培養(yǎng)基 ：葡萄糖 20g ， 蛋白胨 10g ，牛肉膏 10g ， 酵母膏 10g ， 氯化鈉 5g ， 氯化銨 5g ，水 1000ml 。全部用自來水配制培養(yǎng)基 。1.1.3. 其他材料泡敵、斐林試劑 、0.1% 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液 、40%氫氧化鈉等 。1.2. 設(shè)備biotech-7bgz 發(fā)酵罐1套配套蠕動泵、ph電極、溶氧(do)電極、空壓機及所有連 接管、 分光光度計 、 旋轉(zhuǎn)式搖床

24、、 離心機 、 恒溫培養(yǎng)箱等 。2. 實驗方法2.1. 流程菌種斜面一級種子37 C 250ml 搖瓶)37 C培養(yǎng) 10h 二級種子 (500ml 搖罐取分析測定發(fā)酵罐管路準(zhǔn)備罐滅菌酵圖 1 發(fā)酵過程流程2.2. 菌種準(zhǔn)備2.2.1. 配制培養(yǎng)基配制種子固體培養(yǎng)基 100ml ,分裝試管，0.1mpa 121 °C滅菌20min ,擺成斜面。 配制種子培養(yǎng)液 600ml ， 分別分裝 50ml 于兩個 250ml 三角瓶中 作一級種子瓶 ， 余下 550ml 平均分裝于三個 500ml 三角瓶中 作二級種子用 ， 同上滅菌備用 。2.2.2. 接種與培養(yǎng)2.2.2.1. 菌種活化上

25、罐前兩天 ， 從冰箱中取出菌種轉(zhuǎn)接斜面 ， 37 C 培養(yǎng) 24h 。2.2.2.2. 接一級種上罐前一天，由斜面菌種轉(zhuǎn)接一級種子瓶 ，37 C振蕩125r/min丨培養(yǎng)12h。分別測 接種前和培養(yǎng)結(jié)束時的 od 值， 計算出凈增 od ， 并作記錄 。2.2.2.3. 接二級種將一級種轉(zhuǎn)接二級種子 ， 接種量 5%。 之后， 37 C 振蕩 125r/min 培養(yǎng) 10h 。2.3. 上罐前的準(zhǔn)備洗凈發(fā)酵罐及各聯(lián)接膠管 。配制發(fā)酵培養(yǎng)基 5000ml ， 置發(fā)酵罐內(nèi) ， 加入幾滴泡敵 。校正 ph 電極和溶氧 (do) 電極。安裝好發(fā)酵罐 ， 把電極插口 、取樣管 、 補料口 、消泡劑料瓶等

26、固定 、 密封好后 ， 開夾套 出、 進水閥 v2 、 w1， 使夾套充滿水 。 篇四 ：微生物實驗報告膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測專業(yè)： 學(xué)號：一、實驗?zāi)康?探究檢測其病原菌的類型并通過一系列的觀察與鑒定從而確定其病原菌的名稱和性質(zhì) 。 在實踐中學(xué)習(xí)培養(yǎng)基的制備 、消毒和滅菌，細(xì)菌的別離與培養(yǎng)，細(xì)菌群體和個體形態(tài)特征的觀 察，細(xì)菌生化反應(yīng)鑒定等技巧 。從而掌握微生物實驗的各種操作方法 ，培養(yǎng)對微生物實驗的興 趣。二、實驗材料器材 打火機、油性筆、酒精燈、接種環(huán)、接種針、污物盤、普通冰柜、隔水式電熱恒溫培養(yǎng) 箱、奧林巴斯 cx21 型生物顯微鏡、電爐、試管帶棉塞、稱量紙、藥勺、牛皮紙、硫酸 紙

27、、橡皮筋、尺子、錐形瓶、高壓蒸汽滅菌器、鑷子、玻片、吸水紙、拭鏡紙試劑藥品普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 、蒸餾水、膿汁標(biāo)本、糞便標(biāo)本、石蠟油、生理鹽水、結(jié)晶紫、盧 戈碘液、95%乙醇、稀釋復(fù)紅、葡萄糖微量發(fā)酵管2 支、乳糖微量發(fā)酵管2 支、青霉 素抗菌素紙片、鏈霉素抗菌素紙片 、慶大霉素抗菌素紙片 、血漿、福氏志賀菌診斷血清三、方法與步驟干粉培養(yǎng)基-蒸餾水-加熱溶化-分裝-集中放在試管筐里-罩上硫酸紙、牛皮紙T用橡皮 筋扎好-放入講臺邊的滅菌桶或滅菌筐內(nèi)-送到高壓蒸汽滅菌室洗刷室-滅菌T1平板培養(yǎng)基：傾注平板10ml-瓊脂完全凝固后，平板倒放-4C冰箱保存?zhèn)溆谩?斜面培養(yǎng)基：培養(yǎng)基趁熱斜放-瓊脂凝固以后

28、，4 C冰箱保存?zhèn)溆谩?貼上標(biāo)簽后滅菌使用 。 空氣的細(xì)菌學(xué)檢查每組 1 個營養(yǎng)瓊脂平板，選擇采樣地點實驗室、衛(wèi)生間或任選地點 -將平板蓋打開，蓋朝下放置在平板旁邊 -平板暴露于空氣中15min -平板倒扣蓋上-作標(biāo)記-37C溫箱培養(yǎng) 24h-觀察結(jié)果。 人體體表的細(xì)菌學(xué)檢查 甲乙常規(guī)洗手，丙丁標(biāo)準(zhǔn)洗手。甲和乙、丙和丁共用 1 個平板 按規(guī)定在普通平板上接種手指上的細(xì)菌 。第 1 格為洗手前，第 2 格為洗手后，第 3 格為消毒后，第 4 格空白對照。接種環(huán)燒灼滅菌-分別取膿汁標(biāo)本與糞便標(biāo)本點在普通平板和依紅美藍(lán)平板上，各做兩份，-燒掉接種環(huán)上多余的標(biāo)本 -冷卻后，應(yīng)用分區(qū)劃線別離法 ，將膿汁

29、標(biāo)本接種于營養(yǎng)瓊脂 平板2份，糞便標(biāo)本接種于伊紅美藍(lán)平板2份t接種環(huán)燒灼滅菌 -將平板倒置37 C培養(yǎng)1824h -觀察結(jié)果 。接種環(huán)燒灼滅菌-挑選平板上典型的四種單菌落白色、黃色、紫黑色、粉紅色進行斜面接種純培養(yǎng)-做好標(biāo)記-接種環(huán)燒灼滅菌-斜面培養(yǎng)基置于37 °C培養(yǎng)過夜T保存?zhèn)溆?革蘭氏染色：取潔凈載玻片T用滅菌操作后的接種環(huán)取生理鹽水1-2環(huán)于玻片上T挑取細(xì)菌培養(yǎng)物少許與鹽水輕輕抹勻卡寺涂片干燥后在酒精燈火焰外側(cè)快速來回2-3回合結(jié)晶紫初染1min -水洗T盧戈碘液媒染1min 水洗）5%乙醇脫色約20s水洗稀釋品紅-復(fù)染1min水洗-吸干,鏡 檢。 肉湯接種法 :接種環(huán)燒灼滅

30、菌-分別在斜面培養(yǎng)物中挑取菌苔少許 -立即移入肉湯培養(yǎng)基管中 -在接近 液面的管壁上輕輕研磨 -沾取少量肉湯調(diào)和 -混勻-試管口通過火焰 2-3 次滅菌-塞好棉塞 35C 培養(yǎng) 46h接種環(huán)燒灼滅菌-分別取之前實驗中得到的四種菌液在普通平板密集涂布 -接種環(huán)燒灼滅 菌 標(biāo)記:青、鏈、慶鑷子火焰消毒貼青霉素、鏈霉素、慶大霉素紙片 按壓鑷子消毒 倒置37 C培養(yǎng)1824h 觀察結(jié)果取干凈玻片一張在左右兩邊分別滴加兔血漿 1-2 滴，生理鹽水 1 滴接種環(huán)燒灼滅菌 冷卻分別用接種環(huán)取之前實驗所得到的白色和黃色菌苔 （23個菌落的菌量 ）與血漿研磨混 合邊混勻邊觀察結(jié)果接種環(huán)燒灼滅菌稍等片刻，觀察結(jié)果

31、接種針燒灼滅菌用滅菌接種針分別刮取實驗所得到的紫黑色和粉紅色菌苔 分別接種在 葡萄糖發(fā)酵微量管中和乳糖發(fā)酵微量管內(nèi) 接種環(huán)燒灼滅菌將微量管平放在平板內(nèi) 37C培 養(yǎng)過夜后觀察結(jié)果。接種針燒灼滅菌分別用接種針在紫黑色和粉紅色的斜面取菌 從半固體培養(yǎng)基中心垂直 刺入，可刺達近底管處，但不要到達管底循原來的路線退出接種針 試管口迅速通過火焰 2- 3次滅菌塞好棉塞燒灼滅菌接種針 37C培養(yǎng)24h觀察結(jié)果取潔凈的載玻片一張 將磨面近端設(shè)為對照區(qū) 滴加生理鹽水 15ul 遠(yuǎn)端設(shè)為試驗區(qū)滴 加福氏志賀菌診斷血清 15ul 接種環(huán)燒灼滅菌用接種環(huán)分別取粉紅色菌苔 研磨于鹽水或血 清內(nèi)，混合均勻接種環(huán)燒灼滅菌

32、載玻片來回傾側(cè)觀察結(jié)果四、結(jié)果與討論對膿汁中細(xì)菌的分析討論1、 用普通平板，從膿汁標(biāo)本中別離出金黃色和白色兩種菌落。2、 在顯微鏡下觀察時，這兩種細(xì)菌均為 g+球菌，排列不規(guī)則，呈葡萄串狀，是典型的 葡萄球菌。3、 結(jié)合菌落的顏色，可以初步斷定，這是金黃色葡萄球菌和白色葡萄球菌。4、 通過血漿凝固酶試驗 ，觀察到黃色菌落的細(xì)菌能使血漿產(chǎn)生顆粒性物質(zhì)，說明為凝固 酶陽性；白色菌落則沒有凝集反應(yīng) ，說明其為凝固酶陰性 。5 、最后進行的是藥敏試驗 ， 從培養(yǎng)基上可以觀察到 ，不同的抗生素所形成的抑菌圈不同。 其中青霉素對金黃色葡萄球菌最敏感。對糞便中細(xì)菌的分析討論1 、用伊紅美藍(lán)平板別離菌落時 ，

33、可以從糞便標(biāo)本中別離出紫黑色具有金屬光澤的菌落和 粉紅色半透明菌落 。2 、在顯微鏡下觀察時 ，這兩種菌均為 g- 桿菌 ，排列不規(guī)則 ，從形態(tài)上不能鑒別是什么 細(xì)菌。3 、經(jīng)糖發(fā)酵試驗 ，可以觀察到 ，紫黑色的細(xì)菌能使葡萄糖和乳糖的試管變色和產(chǎn)生氣 體； 粉紅色的細(xì)菌只能使葡萄糖的試管變色。4 、經(jīng)半固體動力試驗 ，觀察到紫黑色的細(xì)菌使半固體培養(yǎng)基成渾濁狀態(tài)， 粉紅色的細(xì)菌只在接種針插入的方向聚集 。5 、綜上所述 ，紫黑色的細(xì)菌為大腸埃希菌 ， 粉紅色的細(xì)菌為志賀菌 。6 、 最后進行藥敏試驗時 ， 發(fā)現(xiàn)大腸埃希菌對青霉素不敏感 ， 對慶大霉素和鏈霉素都敏 感。綜上所述 ，膿汁標(biāo)本中別離得

34、黃色菌落為金黃色葡萄球菌， 白色菌落為白色葡萄球菌 ，致病菌為金黃色葡萄球菌 ； 糞便標(biāo)本中別離得紫黑色菌落為大腸埃希菌， 粉紅菌落為福氏志賀菌， 致病菌為福氏志賀菌 。篇五：發(fā)酵實驗報告發(fā)酵工藝及設(shè)備實驗報告學(xué)院 ： 化學(xué)化工學(xué)院 專業(yè)：生物工程 班級： 1201 學(xué)號： 201206030133 學(xué)生 ： 程迅 日期 2014 年 11 月實驗一 搖瓶發(fā)酵法制備糖化酶一、實驗?zāi)康?1 掌握搖床發(fā)酵法制備糖化酶的工藝流程及操作方法 2 了解利用黑曲霉菌菌種發(fā)酵時的生長條件及注意事項3 熟練掌握實驗過程中的無菌操作和培養(yǎng)條件的選擇二、實驗儀器及試劑菌種 ：黑曲霉儀器：錐形瓶500ml）、移液管

35、、恒溫水浴鍋、秒表、50ml比色管、牛皮紙、紗布 8 層 、 ph 計。藥品： 三水乙酸鈉 、冰醋酸 、硫代硫酸鈉 、 碘、氫氧化鈉 、 硫酸 、可溶性淀粉 、 玉米 粉 、 豆餅粉 、 麩皮三 、 實驗原理搖瓶發(fā)酵是實驗室常用的通風(fēng)發(fā)酵方法 ， 通過將裝有液體發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶放在搖床上 振蕩培養(yǎng) ，以滿足微生物生長 、繁殖及產(chǎn)生許多代謝產(chǎn)物對氧的需求。 它是實驗室篩選好氣性菌種 ，以及摸索種子培養(yǎng)工藝與發(fā)酵工藝的常用方法 。葡萄糖淀粉酶ec3.2.1.3系統(tǒng)名為淀粉 a-1,4-葡聚糖葡萄糖水解酶，俗稱糖化酶，是國內(nèi)產(chǎn)量最大的酶品種 。糖化酶對淀粉分子的作用是從非復(fù)原末端切開a-1,4 鍵，

36、也能切開a-1,3 鍵和a-1,6 鍵，產(chǎn)生葡萄糖。糖化酶有催化淀粉水解的作用 ， 能從淀粉分子非復(fù)原末端開始 ， 分解 a-1,4- 葡萄糖苷 鍵生成葡萄糖 。 葡萄糖分子中含有醛基 ，能被次碘酸鈉氧化 ， 過量的次碘酸鈉酸化后析出碘 ， 再用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定 ，計算酶活力 。四、實驗步驟1. 培養(yǎng)步驟1. 1 種子培養(yǎng)基制備及滅菌將新鮮土豆去皮切塊 ， 稱取 200300 g 土豆塊放入 500 ml 燒杯中 ，加入一定量水 ， 在電爐上煮沸至土豆塊熟透 ，用 120 目紗布過濾 ， 濾渣反復(fù)用一定量水清洗 、過濾2 次， 合 并各次濾液且定容至 1000 ml 即得土豆汁 。 取一

37、定體積的土豆汁 ， 在其中加入 5%的蔗糖， 溶解搖勻并調(diào) ph 至 5.5 ， 即得種子培養(yǎng)基 。 將適量種子培養(yǎng)基倒入錐形瓶 250ml ， 用紗布塞塞住管口 ， 并用牛皮紙包扎 ， 置滅菌鍋中，于121 C下滅菌30min。待滅菌完畢，冷卻取出。1. 2 發(fā)酵培養(yǎng)基制備及滅菌取6只500ml搖瓶，分別按裝液量100、200、300ml配制培養(yǎng)基玉米粉6% 豆餅 粉2%、 麩皮 1%， 加水后稍微搖動 ， 使原料濕潤 ， 浸入水中 。用 8 層紗布包扎瓶口 ，再加牛 皮紙包扎。置滅菌鍋中，于121 C下滅菌30min。1. 3 發(fā)酵培養(yǎng)基接種 ：將已生長好的菌種 ，在無菌條件下 ， 按照

38、10%的接 量8%-12%接種到發(fā)酵培養(yǎng)基上 。1. 4發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵：將搖瓶固定在搖床上，培養(yǎng)溫度為31 C ,轉(zhuǎn)速為120r/min ， 培養(yǎng)時間 96h 。 顯微鏡觀察菌絲形態(tài) ，用試紙測發(fā)酵液 ph ， 測定酶活 力。 搖瓶培養(yǎng)時觀察各種搖瓶機的結(jié)構(gòu) 。2. 糖化酶活力測定3. 1 待測酶液的制備 ：精確吸取液體酶 1.00ml， 先用少量的乙酸緩沖液溶解 ， 并用玻璃棒搗研 ， 將上清液小心傾入容量瓶中 。 沉渣部分再加入少量緩沖液 ， 最后全部移入容量瓶中 ， 用緩沖液定容至刻度 估計酶活力在 100250u/ml 范圍內(nèi) ， 搖勻 。通過 4 層紗布過濾 ， 濾液供測定用 。4.

39、 2 酶活力測定 ：于甲 、 乙兩支 50ml 比色管中 ， 分別加入可溶性淀粉溶液 25ml 及緩沖液 5ml ， 搖勻 后，于40 C恒溫水浴中預(yù)熱5min。在甲管樣品中加入待測酶液 2ml ,立刻搖勻，在此 溫度下準(zhǔn)確反應(yīng) 30min ，立刻各加入氫氧化鈉溶液 0.2ml ，搖勻 ，將兩管取出迅速冷卻 ，并 于乙管空白中補加待測酶液 2ml 。吸取上述反應(yīng)液與空白液各 5ml ，分別置于碘量瓶中 ， 準(zhǔn)確加入碘溶液 10ml ，再加氫氧化鈉溶液 15ml ，搖勻塞緊 ， 于暗處反應(yīng) 15min 。取出 ，加 硫酸溶液 2ml ， 立即用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液滴定 ， 直至藍(lán)色剛好消失為其終點 。5. 3 酶活力計算 ：樣品酶活力u/g或u/ml=579.9 x (a-b)c Xn式中：a與b分別為空白、樣品消耗 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積 ， ml ；c 為硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度 ，mol/l ；n 為稀釋倍數(shù) 。五 、 數(shù)據(jù)分析比較不同裝液量下的菌體形態(tài)特征 、 酶活力 ， 將結(jié)果填入下表 ：裝液量 /ml指標(biāo)酶活力ph菌體特征 100 420u/ml 4.2 200 510u/ml 4.1 300 570u/ml 3