聚合酶鏈反應(yīng)檢測冠心病患者外周血人巨細(xì)胞病毒

1、    聚合酶鏈反應(yīng)檢測冠心病患者外周血人巨細(xì)胞病毒        摘要目的：探討人類巨細(xì)胞病毒(HCMV)與動脈粥樣硬化(AS)的關(guān)系及外周血檢測的意義。方法：應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)特異擴(kuò)增HCMV早期抗原區(qū)。結(jié)果：冠心病組64例外周血陽性43例(67.2%)；健康對照組30例中陽性3例(10.0%)，兩組比較，差異有顯著意義(P0.05)。結(jié)論：HCMV可能是AS的一種致病因子，并可從外周血中檢出。關(guān)鍵詞聚合酶鏈反應(yīng)巨細(xì)胞病毒動脈粥樣硬化冠心病 The detection of

2、 cytomegalovirus in the peripheral blood cells of patients with coronary heart diseaseFeng JiuxianBao GuoliangJiang Xiaofenget al(Shanghai Chest Hospital,200030)AbstractObjective:To investigate the relationship between coronary heart disease and cytomegalovirus (CMV) infection.Methods:Major immediat

3、e-early antigen region of CMV was distingiushed by using ploymerase chain reaction (PCR).Results:In 64 patients with coronary heart disease,43 cases (67.1%) were considered as positive for CMV infection.In comparasion,positive band was detected in only 10% (3/30 cases) of healthy objectives.This dif

4、ference in CMV infection between two groups was statistically significant (P0.05).Conclusion:CMV infection may be an important factor in the pathogenesis of atherosclerosis and this virus can be detected in the peri-pheral blood cells.Key wordsPolymerase chain reactionCytomegalovirusAtherosclerosisC

5、oronary heart disease人類巨細(xì)胞病毒(HCMV)感染非常普遍，唯多呈亞臨床不顯性感染和潛伏感染。HCMV是引起人類先天性畸形的重要原因之一，近年來HCMV感染與人動脈粥樣硬化(AS)形成的關(guān)系引起人們的重視1。我們應(yīng)用聚合酶反應(yīng)(PCR)檢測64例冠心病患者和30例健康對照者外周血HCMV，以探討AS和HCMV感染的聯(lián)系和建立外周血HCMV的PCR檢測方法。1對象與方法1.1研究對象冠心病64例，男38例，女26例；年齡4474歲(平均56.4±6.0)歲。均為急性心肌梗死、陳舊性心肌梗死及經(jīng)冠狀動脈造影證實(shí)的心絞痛患者。嚴(yán)格除外合并感染性疾病、免疫性疾病、輸血及

6、應(yīng)用激素免疫抑制劑者。健康對照組30例，男18例，女12例,年齡4062(平均52.3±8.6)歲。均為健康體檢無明顯心腦血管硬化證據(jù)者。1.2研究方法1.2.1模板DNA提取：取全血1 ml加入溶血試劑(含NH4Cl、NH4CO3)破壞紅細(xì)胞，然后加蛋白酶K消化。按標(biāo)準(zhǔn)酚氯仿異式醇法2提取DNA，再溶于適量TE溶液中，經(jīng)紫外分光光度計(jì)定量，5 l溶液含DNA 1 g。1.2.2PCR擴(kuò)增：主要檢測早期病毒抗原區(qū)(IEA)。引物序列如下：P1TATACCCCAGAC-GGAAGAGAAATTCA，P2TATAGCCAT-AATCTCATCAGGGGGAG。反應(yīng)體系為31l，其中含10

7、×擴(kuò)增緩沖液、dNTP、Taq DNA聚合酶、引物和1g DNA模板。反應(yīng)條件：94變性5min，941min、6530s、721min×35循環(huán)72延伸10min。1.2.3擴(kuò)增產(chǎn)物分析：在每個反應(yīng)管中加入6l上述緩沖液，取擴(kuò)增產(chǎn)物10l加樣于2%瓊脂糖凝膠上，電壓100 V電泳30min，在紫燈下觀察到430bp的條帶即為陽性病例。本組檢測時以HCMV基因探針的陽性對照。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法2檢驗(yàn)，P0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果冠心病組64例外周血HCMV檢測陽性43例，陽性率67.2%。健康對照組30例外周血HCMV陽性3例，陽性率10.0%。有顯著性差異(P0.05

8、)。3討論AS的病因迄今未完全闡明，目前日益增多的證據(jù)提示HCMV參與AS的形成。HCMV經(jīng)急性或隱性感染后病毒基因存在于一定組織或細(xì)胞中，已發(fā)現(xiàn)人的動脈平滑肌細(xì)胞是HCMV的一個潛伏場所3。Fish等4提出HCMV可在單核巨噬細(xì)胞內(nèi)囊胞化以避免病毒降解和從細(xì)胞中清除，從而持續(xù)生存在單核巨噬細(xì)胞內(nèi)。因此可以從外周血中檢測HCMV來反映HCMV感染情況。本文檢測64例冠心病患者外周血其HCMV陽性率為67.2%，明顯高于健康對照組(10.0%)。舒先江等5在AS斑塊中檢測HCMV的陽性率為63.2%，而正常冠狀動脈中為14.3%。提示在外周血細(xì)胞和AS中HCMV感染率相似。近來研究單核巨噬細(xì)胞在

9、AS形成中的作用有新的進(jìn)展，來自血液中單核巨噬細(xì)胞是AS病灶中最早出現(xiàn)的細(xì)胞成分之一，人類AS斑塊的泡沫細(xì)胞大部分來自于單核巨噬細(xì)胞。在內(nèi)皮損傷部位約30%的增殖細(xì)胞是單核巨噬細(xì)胞，從而改變了過去認(rèn)為增殖主要是平滑肌細(xì)胞。單核巨噬細(xì)胞在AS的發(fā)生發(fā)展中不僅可攝取脂類形成泡沫細(xì)胞，而且具有許多復(fù)雜的功能。以上過程提示HCMV可能通過感染單核巨噬細(xì)胞到達(dá)冠狀動脈，從而啟動或促進(jìn)AS病變的形成，成為AS的一種致病因子。目前，移植后的心臟AS的形成和加速已備受關(guān)注。臨床研究證實(shí)，HCMV感染使心臟移植手術(shù)失敗率及死亡率增高，并使移植心臟加速形成AS。因此在開展心臟移植時有必要在移植前后對受體進(jìn)行外周血

10、HCMV檢測，了解有無并發(fā)HCMV感染，以便采取積極治療來提高心臟移植手術(shù)成功率，降低心臟移植后AS形成的速度。參考文獻(xiàn)1Joseph J,Melnick JL,Adam E.Possible role of cytomegalovirus in atherogenesis.JAMA,1990,263:22042Sambrook J.Molecular cloning:a laboratory manual.3rd ed.New York:Cold Harbor Laboratory,1989.931-9583Melnick JL,Petrie BL,Dreesman GR,et al.Cytomegalovirus antigen within human artrial smooth muscle cells.Lancet,1983,(2):6644Fish KN,Britt W,Nelson JA.A novel mechanism for persistanc