多藥耐藥相關(guān)蛋白在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義

1、多藥耐藥相關(guān)蛋白在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義【摘要】目的研究人肝細(xì)胞癌組織中多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)的表達(dá)情況并探討其臨床意義。方法采用免疫組織化學(xué)方法檢測了110例隨訪資料完整的肝細(xì)胞癌石蠟切片組織中MRP表達(dá)情況,并與臨床病理指標(biāo)聯(lián)系,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果本組肝細(xì)胞癌110例,表達(dá)陽性57例,其陽性率為52%。術(shù)前行經(jīng)肝動脈栓塞化療(TACE)及未行TACE治療者的MRP陽性率分別為51%(19/37)和52%(38/73)。MRP與癌灶大小、數(shù)目、癌栓、有無包膜、組織分化、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)情況、是否合并肝硬化無關(guān)。MRP陽性患者的1、3、5年生存率分別為63%、26%和

2、10%；而MRP陰性者的1、3、5年生存率分別為89%、60%和53%，顯著高于MRP陽性者（P0.01）。MRP陽性者的無癌生存期平均為11.8個月，顯著低于MRP陰性者的36.2個月（P0.01）。結(jié)論術(shù)前TACE治療與否不影響MRP表達(dá)。MRP的表達(dá)與HCC預(yù)后呈顯著負(fù)相關(guān)，可能成為判斷HCC預(yù)后的良好腫瘤標(biāo)志物?！娟P(guān)鍵詞】癌,肝細(xì)胞免疫組織化學(xué)MRPExpression of multidrug-resistance-associated protein in liver cancerFU Jianmin,ZHANG Wei,PENG Xianghong,et al. Cancer H

3、ospital ,Peking Union Medical College and Chinese Academy of Medical Sciences,Beijing 100021【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression of multidrug-resistance-associated protein (MRP) in hepatocellular carcinoma (HCC) and its clinical implications.MethodsMRP-1(a monoclonal antibody) was used t

4、o detect immunohistochemical expression of MRP in paraffinembedded specimen of HCC by means of the avidin-biotin-peroxidase method.Results were compared with clinical pathology.ResultsMembrane bound and/or cytoplasmic globular positivity were observed in 57 (51.8%) of the 110 HCCs.There was no diffe

5、rence of MRP expression in patients whether or not undergoing preoperative intraarterial chemoembolization (TACE) (51.4%,19/37 vs. 52.1%,38/73,P0.05),nor there was significant difference between status of MRP and the size,number,emboli,capsule,differentiation of HCC and HBsAg of the patients.Patient

6、s postoperative disease-free survival in positive MRP (11.8 months) was significantly shorter than that of negative MRP (36.2 months),P0.01.The 1, 3, 5 years survival rate in MRP positive HCC patients were 62.7%, 25.5%, and 9.7% respectively compared with that of 89.1%, 59.6%,and 53.1% in MRP negati

7、ve patients P0.01.ConclusionsExpression of MRP in HCCs is associated with a shorter disease-free interval and shorter survival time, and preoperative TACE had no influence on the expression of MRP.【Key words】 Carcinoma,hepatocellularImmunohistochemistryMRP原發(fā)性肝癌已成為目前我國惡性腫瘤死亡的主要原因,大多數(shù)肝癌患者發(fā)現(xiàn)時即為中晚期,失去手術(shù)

8、機(jī)會,經(jīng)肝動脈化學(xué)藥物治療栓塞(transcatheter arterial chemoembolization,TACE)和全身化學(xué)藥物治療是主要治療手段,但是常常出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象,導(dǎo)致治療失敗。1992年,Cole等1發(fā)現(xiàn)了一種新的基因,即多藥耐藥相關(guān)蛋白基因(multidrug resistance-associated protein,MRP),并證實(shí)其與癌細(xì)胞的耐藥關(guān)系密切。鑒于目前國內(nèi)外尚無有關(guān)肝癌組織中MRP表達(dá)研究的報(bào)道,我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測了原發(fā)性肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)組織中MRP的表達(dá)情況,現(xiàn)報(bào)告如下。資料與方法一、標(biāo)本來源

9、所有標(biāo)本取自1988年1994年我院腹部外科手術(shù)切除之HCC組織,按下列程序和條件篩選病例:（1）術(shù)后隨訪資料完整;（2）有腫瘤原發(fā)灶蠟塊保存;（3）MRP染色效果良好。二、臨床資料合格入選病例共110例,其中男性93例，女性17例，男女=5.51;年齡2872歲，中位年齡52.3歲;乙型肝炎表面抗原(HBsAg)陽性80例,陽性率為72.7%;AFP陽性68例, 陽性率為61.8%。本組術(shù)前行TACE治療37例, 常用藥物及劑量為：阿霉素100 mg,絲裂霉素20 mg，5-氟脲嘧啶1 000 mg。術(shù)后行TACE治療38例，無水酒精注射12例，全身化療10例，復(fù)發(fā)后再次手術(shù)5例，放療3例。

10、隨訪時間39年,1、3、5年生存率分別為75.5%、42.1%和31.7%;1、2、3年無癌生存率分別為50.0%、41.8%和29.1%。三、免疫組織化學(xué)染色全部標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定,石蠟包埋,制備5 m厚切片,貼于經(jīng)多聚賴氨酸處理過的切片上,70烘片2小時。首次加入的抗體(一抗)為鼠抗人單克隆抗體MRP-1(由荷蘭大學(xué)自由醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教授Scheper惠贈),工作濃度150;ABC法免疫組織化學(xué)染色,切片加一抗前微波抗原修復(fù)10分鐘,顯色劑為DAB,PBS代替一抗作為陰性對照。四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS進(jìn)行2檢驗(yàn)和處理生命表結(jié)果1.MRP表達(dá)陽性結(jié)果為細(xì)胞胞膜和(或)胞漿

11、染為黃色(1),染色結(jié)果分為“-”、“+”、“+”三級:未見陽性細(xì)胞為“-”;陽性細(xì)胞少于50%為“+”;陽性細(xì)胞多于50%為“+”。110例HCC組織中,有MRP陽性57例,陽性率為52%,其中MRP“+”陽性13例,“+”陽性44例。2.110例中術(shù)前行TACE治療37例，其中MRP陽性19例,陽性率為51%;術(shù)前未行TACE治療者73例,其中MRP陽性38例,陽性率為52%,兩組間差異無顯著意義。3.根據(jù)HCC的大小、數(shù)目、有無完整假包膜和門靜脈癌栓、組織分化程度、HBsAg情況及是否伴隨肝硬化分組,進(jìn)行MRP表達(dá)與HCC臨床病理分析,結(jié)果見表1。HCC組織中的大肝癌、無假包膜和伴有門靜

12、脈癌栓者的MRP陽性率較高,但差異無顯著意義(P0.05)。4.MRP陽性的病例,其1、3、5年生存率分別為63%(37/59)、26%(14/55)和10%(3/31);而MRP陰性者,其1、3、5年生存率分別為89%(49/55)、60%(31/52)和53%(17/32),明顯高于MRP陽性者,兩組間差異有極顯著意義(P0.01)。5.MRP陽性病例的無瘤生存期平均為11.8個月,而MRP陰性病例的無瘤生存期平均為36.2個月,明顯高于MRP陽性者,兩組間差異有極顯著意義(P0.01)。表1HCC某些臨床病理指標(biāo)與MRP表達(dá)的關(guān)系(例)腫瘤情況例數(shù)MRP陽性陽性2值P值+例數(shù)百分比直徑(

13、cm) 326152911423532173121547 5522182331602.5210.283數(shù)目單結(jié)節(jié)965011354648多結(jié)節(jié)1432911793.4530.063包膜有61316243049無492272027550.1810.670癌栓有9216778無10151123850500.0250.875分化高43244151944中50227212856低1772810591.1390.566HBsAg 陽性80408324050陰性301351217570.1670.682肝硬化有9141 11395055無1912257371.4020.236注：2為組內(nèi)比較 討論原發(fā)性肝

14、癌對化學(xué)藥物治療(下稱化療)極不敏感,其耐藥機(jī)制尚不清楚。早先發(fā)現(xiàn)的多藥耐藥基因MDR1的產(chǎn)物P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gy)在HCC組織中的表達(dá)約60%70%,且P-gy的表達(dá)與術(shù)前是否化療無關(guān),但與癌細(xì)胞組織類型相關(guān)2,即侵襲性強(qiáng)的癌細(xì)胞其P-gy高表達(dá);Soini等3報(bào)道P-gy表達(dá)與HCC的生存率和無病生存期呈正相關(guān),可作為判斷HCC預(yù)后的指標(biāo)。多藥耐藥相關(guān)蛋白基因(MRP)是從一株無MDR1基因表達(dá)的耐阿霉素的人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株H69AR中分離的一種新基因,位于人染色體16號p13區(qū)1帶,分子量190KD,編碼1531個氨基酸,該蛋白位于細(xì)胞膜上1。將MRP基因轉(zhuǎn)

15、染給正常細(xì)胞后可使其對阿霉素、絲裂霉素等發(fā)生耐藥4,國外已在人白血病、肺癌、食管癌、乳腺癌、卵巢癌、腎癌及黑色素瘤等組織中檢測出MRP的表達(dá)5,但目前尚無有關(guān)MRP在肝癌組織中的研究報(bào)道。MRP主要介導(dǎo)癌細(xì)胞對阿霉素、絲裂霉素、足葉乙甙和長春新堿等耐藥，而其中阿霉素和絲裂霉素為肝癌化療一線藥物。研究MRP表達(dá)與肝癌耐藥和預(yù)后的關(guān)系，有助于選擇合理的化療方案，并避免藥物浪費(fèi)和副作用。本組采用免疫組織化學(xué)方法檢測了110例HCC組織中MRP的表達(dá),結(jié)果顯示陽性率為52%(57/110),表達(dá)率較高;在術(shù)前行TACE治療的HCC組織中,其MRP的表達(dá)(51%)與未行TACE治療者(52%)基本相似,

16、提示大部分HCC可能為先天耐藥,術(shù)前TACE不能誘導(dǎo)耐藥發(fā)生。Ota等6發(fā)現(xiàn)MRP基因表達(dá)陽性的非小細(xì)胞肺癌預(yù)后較差,Sugawara等7利用免疫組織化學(xué)的方法獲得相似結(jié)果。本組結(jié)果顯示MRP陽性的HCC,其生存率和無病生存期均明顯低于MRP陰性者,差異有極顯著意義。并且伴有門靜脈癌栓、多結(jié)節(jié)、大肝癌的HCC組織,其MRP高表達(dá),提示MRP的表達(dá)與HCC的侵襲性相關(guān),可能是惡性腫瘤侵襲進(jìn)展的標(biāo)志,MRP可作判斷HCC預(yù)后的分子指標(biāo)。目前,有關(guān)原發(fā)性肝癌耐藥機(jī)制的研究尚少,難以得出明確結(jié)論,還有許多問題待研究解決。隨著對HCC耐藥機(jī)制的研究深入,有可能找到克服其耐藥的方法,開發(fā)出對肝癌敏感的新型

17、化療藥，以提高肝癌的治療水平。本文1見插頁第1頁作者單位：傅建民、趙東兵、馮強(qiáng)、邵永孚，(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 協(xié)和醫(yī)科大學(xué) 腫瘤研究所 腫瘤醫(yī)院腹部外科)張偉、彭向紅、金順錢腫瘤研究所腫瘤生物學(xué)檢測中心100021 北京參考文獻(xiàn)1Cole SP,Bhardwaj G,Gerlach JH,et al.Overexpression of a transporter gene in a mutidrug-resistant human lung cancer cell line.Science，1992，258:1650-1654.2Itsubo M,Ishikawa T,Toda G,et al.I

18、mmunohistochemical study of expression and cellular localization of the multidrug ressistance gene product P-glycoprotein in primary liver carcinoma.Cancer，1994，73:298-303.3Soini Y,Virkajarvi N,Raunio H,et al.Expression of P-glycoprotein in hepatocellular carcinoma:a potential marker of prognosis.J Clin Pathol，1996，49:470-473.4Zaman GJ Ven,Lankelma,J,Tellingen OV,et al.Role of gluta